للحصول على تعليق أحادي الخلية من دماغ الخلايا العصبية المعزولة ، ضع الدماغ في خالط Dounce زجاجي مبرد مسبقا سعة 15 ملليلتر يحتوي على كمية مناسبة من محلول ملح هانكس المتوازن المثلج ، أو المخزن المؤقت HBSS. استخدم مدقة Dounce السائبة لفصل أنسجة المخ برفق وببطء بحوالي 100 إلى 120 ضربة على الجليد. قم بتصفية تعليق أنسجة المخ الناتج من خلال مصفاة خلية 70 ميكرون في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر.
شطف أنبوب Dounce مع خمسة ملليلتر من HBSS والمضي قدما في الترشيح لتحقيق أقصى قدر من جمع الخلايا. أجهزة الطرد المركزي تعليق الأنسجة المصفاة عند 550 جم لمدة ست دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة المادة الطافية باستخدام شفاط فراغ ، وأعد تعليق الحنك الخلوي في ملليلتر واحد من محلول تدرج الكثافة متساوي التوتر بنسبة 30٪.
نقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي 15 ملليلتر. أضف كمية مناسبة من محلول تدرج الكثافة بنسبة 30٪ ، واقلب الأنبوب برفق لضمان الخلط الشامل. على الفور الطرد المركزي الأنبوب عند 845 جم مع ضبط التسارع والفرامل على المستوى الثالث لمدة 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإزالة الأنبوب برفق من جهاز الطرد المركزي دون اهتزاز ، وقم بشفط طبقة المايلين العلوية بعناية باستخدام طرف سعة ملليلتر واحد متصل بالفراغ. ثم استنشق المادة الطافية ، تاركا وراءها من واحد إلى ملليلتر ، وأعد تعليق الحنك الخلوي بحد أدنى 10 ملليلتر من HBSS البارد. أجهزة الطرد المركزي عند 550 جم لمدة ست دقائق عند أربع درجات مئوية.
اغسل مرة أخرى مع ما لا يقل عن سبعة ملليلتر من HBSS البارد ، وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى. بعد إزالة أكبر قدر ممكن من المادة الطافية ، أعد تعليق الخلايا في 100 إلى 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت لقياس التدفق الخلوي لتحليل قياس التدفق الخلوي.
