بعد 24 ساعة من الجسيمات النانوية المغناطيسية ، حقن 10b المضاد للميكرورنا ، قم بوزن الفأر وحساب حجم d-luciferin لإعطاء جرعة 150 ملليغرام لكل كيلوغرام. قم بإعداد حقنة قياس 28 مع الحجم الذي يحمي المحلول من الضوء المباشر. بمجرد التخدير ، قم بتجشير الفأر برفق لتجنب المزيد من الإصابات في موقع الجراحة ، وحقن جرعة د-لوسيفيرين داخل الصفاق.
اسمح للماوس بالتعافي وانتظر لمدة 10 دقائق قبل التصوير. بعد إعداد نظام التصوير في الجسم الحي ، أو ماسح ضوئي IVIS ، ضع حصيرة التألق السوداء منخفضة التألق في مرحلة التصوير وقم بتكوين مصفوفة مخروط الأنف للتصوير. في البرنامج، انقر فوق معالج التصوير.
ثم حدد التصوير الحيوي ، متبوعا بالمرشح المفتوح. في الشاشة التالية، حدد موضوع التصوير ومجال الرؤية. ضع الماوس المخدر في وضع الانبطاح على الماسح الضوئي IVIS.
انقر فوق تسلسل اكتساب ، وباستخدام إعدادات التعريض التلقائي مع حد أدنى للإشارة يبلغ 3000 عدد ، التقط صورة لتوطين خلايا الورم الأرومي الدبقي U-251 المسمى لوسيفيراز. بعد ذلك ، في معالج التصوير ، حدد التألق ، متبوعا بزوج مفلتر مع إضاءة epi. في الشاشة التالية ، حدد المسبار ، Cy5.5.
حدد موضوع التصوير ومجال الرؤية. باستخدام إعدادات التعرض التلقائي مع حد أدنى للإشارة يبلغ 6 ، 000 عدد ، التقط صورة لتوطين الجسيمات النانوية المغناطيسية ، المضادة للميكرورنا 10 ب. ضع الفأر المخدر على سرير التصوير بالرنين المغناطيسي.
قم بتثبيت الرأس ووضعه للمسح الضوئي باستخدام قضيب العض وقضبان الأذن. قم بتثبيت مسبار درجة حرارة المستقيم المشحم وتأكد من عمل التنفس ومراقبة درجة الحرارة. ضع ملف دماغ الماوس فوق الرأس عن طريق تركيب الأوتاد الموجودة على سرير الماوس في الفتحات الموجودة على الملف ، وقم بلصق الملف في مكانه لتقليل الحركة أثناء المسح.
ضع وسادة صغيرة لتدوير الماء الدافئ فوق الجزء العلوي من الماوس للحفاظ على درجة حرارة الجسم. حرك الماوس وسرير التصوير إلى موضعهما للمسح الضوئي. في برنامج الاستحواذ ، ابدأ خطوة إعداد التذبذب لضبط ملفات التصوير بالرنين المغناطيسي ومطابقتها.
تأكد من أن التتبع في المنتصف وعميق قدر الإمكان. الحصول على مسح موضعي ثلاثي المستويات للدماغ. باستخدام المعلمات التالية ، احصل على فحوصات T2 مرجحة ثنائية الأبعاد للكشف عن الورم.
احصل على خريطة b0 للدماغ بأكمله لحساب الرقائق الموضعية باستخدام أداة الرقائق للخريطة. استخدم صورا ثلاثية الأبعاد T2 مرجحة بالنجوم لتصور الجسيمات النانوية. باستخدام المعلمات التالية ، احصل على خريطة نجمة T2 لمزيد من التصوير بالجسيمات النانوية باستخدام الصورة ثنائية الأبعاد T2 المرجحة كمرجع لوضع الفحص فوق الورم.
احصل على 10 صور صدى إيجابية مع خمسة مللي ثانية من التباعد الزمني للصدى. في نقطة النهاية التجريبية ، قم بوزن الماوس ، واحسب حجم d-luciferin لإعطاء جرعة 150 ملليغرام لكل كيلوغرام. إجراء تصوير التلألؤ البيولوجي الحي بعد 10 دقائق من الحقن ، كما هو موضح سابقا.
ضع طبق بتري مع الدماغ المستأصل من الفأر القتل الرحيم في ماسح IVIS. قم بتخيل الدماغ بكل من طرائق التلألؤ البيولوجي والفلورة باستخدام نفس إعدادات الاستحواذ مثل التصوير في الجسم الحي. أظهرت إشارات التألق والتلألؤ الحيوي Cy5.5 في الجسيمات النانوية المغناطيسية للفئران المحقونة المضادة للحمض النووي الريبي الميكروريبي 10b توضعا واضحا ، مما يشير إلى توصيل الجسيمات النانوية إلى الورم ، بينما لم تظهر الفئران الضابطة أي إشارة مضانة.
أظهر التصوير الفلوري خارج الجسم الحي توطين الجسيمات النانوية في أعضاء الإزالة الرئيسية ، مثل الكبد والكلى. يوضح الانخفاض المميز في إشارة التصوير بالرنين المغناطيسي المرجحة T2 إمكانات الجسيمات النانوية المغناطيسية ، المضادة للميكرورنا 10b كعامل تباين للرنين المغناطيسي لعبور الحاجز الدموي الدماغي وتراكمها في منطقة الورم.
