إعداد نظام Resipher "Sandwich" لمراقبة معدل استهلاك الأكسجين في مزارع RPE جيدة التمايز

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

39 Views

•

03:25 min

•

August 16th, 2024

DOI :

10.3791/202163-v

August 16th, 2024

•

Qitao Zhang*¹, Daisy Y. Shu*², Richard A. Bryan³, John Y. S. Han¹, Gillian A. Gulette¹, Kin Lo³, Leo A. Kim⁴, Jason M. L. Miller¹^,⁵

¹Kellogg Eye Center, University of Michigan, Ann Arbor, ²School of Optometry and Vision Science, University of New South Wales, ³Lucid Scientific, ⁴Schepens Eye Research Institute of Mass. Eye and Ear, Department of Ophthalmology, Harvard Medical School, ⁵Cellular and Molecular Biology Program, University of Michigan, Ann Arbor

* These authors contributed equally

Transcript

للبدء ، ضع غطاء الاستشعار على لوحة استقبال فارغة 96 جيدا وضعها في حاضنة زراعة الخلايا. قم بمحاذاة الجهاز وتركيبه على غطاء الاستشعار وقم بتوصيله بالمحور عبر كابل USB المرفق لإنشاء شطيرة Recyfer. انتقل الآن إلى موقع Lucid Lab وانقر فوق زر التجربة الجديدة في الزاوية اليمنى العليا لإنشاء تجربة جديدة.

قم بتسمية عنوان التجربة وأدخل أي ملاحظات تجريبية ذات صلة بالدراسة. بعد ذلك ، قم بتهيئة ظروف جيدة في مجموعات العلاج. على سبيل المثال ، إذا تم اختبار تأثيرات تركيزات المصل المختلفة في الوسائط على معدل استهلاك الأكسجين ، فحدد المصل في تركيزات المصل المتوسطة لاسم المجموعة لاستخدامها ، وأضف المزيد من قيم النسبة المئوية للمصل بالنقر فوق زر علامة الجمع.

ثم قم بتعيين الآبار التي ستتلقى نسبة مصل معينة وحدد نمط لون لتلك الآبار. انقر فوق الزر إضافة مجموعة لإضافة المزيد من المجموعات حسب الحاجة. بعد ذلك ، حدد إعداد اللوحة وحدد الجهاز المقابل ونمط اللوحة.

للقيام بذلك ، انقر فوق الزر "إضافة لوحة" ، واختر الجهاز وحدد نوع اللوحة. حدد العلاج ، وانقر على البئر المقابل. الآن ، انقر فوق الزر "ابدأ الآن" لبدء التجربة.

تأكد من أن المؤشر الموجود على موقع الويب والصمام الثنائي الباعث للضوء على المحور أخضر ثابت. دع النظام يعمل لمدة 15 إلى 60 دقيقة للسماح باختبار معايرة كل جهاز استشعار جيدا واكتشاف الأكسجين الجوي. بعد ذلك ، قم بإزالة الجهاز من غطاء الاستشعار وضع الجهاز رأسا على عقب في الحاضنة للسماح للمحرك الموجود على الجهاز بإعادة الضبط.

الآن ، ضع اللوحة مع غطاء الاستشعار مرة أخرى في غطاء مزرعة الخلية ، جنبا إلى جنب مع لوحة 96 بئر تحتوي على مزارع RPE. قم بتغيير الوسائط الموجودة في اللوحة باستخدام مزارع RPE إلى نفس الوسائط والحجم لجميع الآبار للحصول على قيم معدل استهلاك الأكسجين الأساسية لكل بئر. ثم انقل غطاء الاستشعار إلى اللوحة التي تحتوي على مزارع الخلايا وضع الغطاء القياسي على اللوحة التي تحتوي على مزارع الخلايا إلى لوحة استقبال 96 بئر فارغة ، للحفاظ على عقم الغطاء القياسي.

ضع اللوحة مع مزارع الخلايا وغطاء الاستشعار مرة أخرى في حاضنة زراعة الخلايا. قم بمحاذاة الجهاز وتركيبه على غطاء الاستشعار وقم بتوصيله باللوحة عبر كابل USB المرفق. تحقق من أن المؤشرات الموجودة على واجهة موقع الويب والمركز كلها خضراء ثابتة.

دع الجهاز يقيس معدلات استهلاك الأكسجين أو التعرف الضوئي على الحروف على كل بئر لمدة 12 إلى 24 ساعة على الأقل لالتقاط التعرف الضوئي على الحروف الأساسي. بعد التجربة ، اغمر غطاء الاستشعار في 70٪ من الإيثانول لمدة 10 دقائق في غطاء مزرعة الخلية لتعقيمه. بمجرد أن يتبخر الإيثانول والماء تماما ، ضع غطاء الاستشعار على لوحة استقبال جديدة مكونة من 96 بئر.

Explore More Videos

JoVE

From the series

نظام مراقبة التعرف الضوئي على الحروف الجديد لثقافات RPE المتمايزة