للبدء ، أدخل ماصة صغيرة في مجتذب micropipette واسحب إبرة الحقن المجهري. قم بمحاذاة طرف الإبرة مع أقسام ميكرومتر المرحلة تحت نطاق تشريح. باستخدام الميكرومتر كدليل قياس ، استخدم زوجا حادا من الملقط لكسر الإبرة إلى حجم تجويف أكبر قليلا من قطر الخلية.
باستخدام حقنة سعة 50 ملليلتر مزودة بحشو ماصة ، املأ الإبرة بالكامل بالزيت المعدني. على جهاز الزرع ، أدر المحبس ثلاثي الاتجاهات بحيث يواجه ذراعه الطويل مضخة الحقن الدقيقة. اضغط على مكبس حقنة الخزان لطرد جميع فقاعات الهواء من الخط الهيدروليكي.
الحفاظ على الضغط الخفيف على المكبس ، أدر المحبس ثلاثي الاتجاهات بحيث تواجه الذراع الطويلة الآن حقنة الخزان. ثم أدخل الإبرة في الحامل دون إدخال فقاعات هواء. اضبط الإبرة بحيث تواجه اليسار مباشرة بزاوية تتراوح من 10 إلى 15 درجة من الأفقي.
باستخدام المعالجات الدقيقة الخشنة والدقيقة ، قم بمناورة طرف الإبرة تحت هدف المجهر لجعله موضع تركيز. إذا كان السائل يتدفق داخل أو خارج طرف الإبرة ، فاضبط الضغط باستخدام مضخة المحقنة حتى يتم ملاحظة هلالة مستقرة بين الزيت و RPT. إذا بقيت فقاعة زيت ، حرك الإبرة إلى اليمين لسحب طرفها من RPT ، ثم عد إلى اليسار لإعادة وضعها.
حرك المسرح إلى اليمين حتى يتم إعادة المتبرع إلى العرض. أعد التركيز وركز على الخلايا المراد زرعها ، مع محاذاة الإبرة مع الخلايا الموجودة خارج مباشرة. بعد ذلك ، أدخل الإبرة في المانح ، وإذا لزم الأمر ، أعد تثبيت الغضروف المفصلي للزيت في طرف الإبرة باستخدام مضخة الحقن المجهرية.
ضع طرف الإبرة على الخلايا محل الاهتمام وقم بتطبيق شفط لطيف باستخدام مضخة الحقن الدقيقة. بعد أخذ الخلايا الكافية ، قم بإزالة الإبرة من المتبرع وإعادة تثبيت المادة في طرف الإبرة. أعد وضع المسرح لإحضار أول مضيف إلى العرض / المركز والتركيز على المنطقة التي سيتم وضع الخلايا فيها ومحاذاة الإبرة مع هذه المنطقة خارج مباشرة.
ثم أدخل الإبرة في المضيف وأعد تثبيت الغضروف المفصلي الزيتي في طرف الإبرة. ضع طرف الإبرة في موقع الترسيب واضغط برفق باستخدام مضخة الحقن الدقيقة حتى يتم إطلاق العدد الصحيح من خلايا المتبرع من الإبرة. أخيرا ، قم بإزالة الإبرة من المضيف.
في 12 ساعة بعد الزرع ، لوحظت خلية عصبية متبرعة بنجاح في المنطقة الأمامية من النواة الحركية المبهمة للمضيف ، وأظهرت علامات نتوءات عصبية صحية. وبحلول يومين بعد الزرع، لم تظل الخلية العصبية المزروعة في مكانها الصحيح فحسب، بل بدأت أيضا في تمديد محور عصبي جديد نحو القوس البلعومي الرابع، مما يشير إلى التكامل الناجح داخل المضيف.
