تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف الحساس عن طفرات الورم في عينات الحمض النووي للسرطان المستخرجة

لبدء استخراج الحمض النووي من عينات الأنسجة المضمنة الرسمية والثابتة. ثم الطرد المركزي مسحوق جاف التمهيدي في 5،400 إلى 8،400 غرام لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق ، وإضافة الحجم المناسب من الماء المقطر المزدوج على طول جدار أنبوب التمهيدي. أضف خمسة ميكرولترات لكل من التمهيدي الأمامي والخلفي إلى 50 ميكرولترا من مخزون البرايمر من النوع البري ، و 40 ميكرولترا من الماء المقطر المزدوج.

بعد الخلط مرتين إلى ثلاث مرات ، دوامة الأنبوب وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة. بالنسبة لتفاعل البلمرة المتسلسل أو إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل ، أضف الكواشف المطلوبة إلى كل أنبوب تفاعل. دوامة لخلط وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة.

ضع أنبوب PCR في أداة PCR للتضخيم. اضبط برنامج الدورة الحرارية وقم بتشغيله. ثم قم بإجراء رحلان كهربائي هلامي على منتج PCR باستخدام 2٪ Agarose للتحقق مما إذا كان الجزء المستهدف قد تم تضخيمه.

لتنقية منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، قم بطرد مركزي لفترة وجيزة تنقية واحد وتنقية اثنين تم إحضارهما إلى درجة حرارة الغرفة وإعداد خليط تفاعل التنقية. ضع أنبوب PCR في أداة PCR وقم بتشغيل الجهاز باستخدام المعلمات المحددة مسبقا.