الحفاظ على خلايا HEK293T وبذرها من أجل تعداء البلازميد المنقسم

للبدء ، احتفظ بخلايا HEK293T في وسط الاستزراع المحتوي على DMEM مع 10٪ FBS في حاضنة مرطبة. تحقق من التقاء اللوحة تحت المجهر. عندما تصل الخلايا إلى ما يقرب من 80 إلى 90٪ من التقاء ، قم بإزالة الوسائط واغسلها ب 10 مل من DPBS.

ثم قم بإزالة DPBS من طبق الثقافة. عالج الخلايا بملليلتر واحد من 0.05٪ تريبسين-EDTA فينول أحمر واحتضان الخلايا لمدة ثلاث دقائق عند 37 درجة مئوية. بعد إزالة اللوحة من الحاضنة ، أضف تسعة ملليلتر من وسط الثقافة لإيقاف تفاعل التربسين ، واخلطها عن طريق سحب العينات لإخراج أي خلايا متبقية.

الآن ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب سعة 50 مل. جهاز طرد مركزي بوزن 300 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بمجرد إزالة الوسائط ، أعد تعليق كريات الخلية في مليلتر واحد من الوسائط الطازجة.

لصفيحة الخلايا في صفيحة من ستة آبار ، اجمع بين الحجم اللازم للخلايا مع 13 مل من الوسائط في أنبوب سعة 50 ملليلترا. بعد ذلك ، قم بتوزيع ملليلترين من معلق الخلية المخفف في كل من الآبار الستة واضغط برفق على اللوحة من جميع الجوانب لنشر الخلايا بالتساوي. بعد ذلك ، ضع الطبق في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون طوال الليل.