للبدء ، قم بإعداد كتل الشمع من الفئران القتل الرحيم المحقونة بحبوب Xiaoyao. قطعي كتل الشمع إلى أقسام متواصلة بسمك ستة ميكرومتر ، واخبزي الشرائح على حرارة 70 إلى 72 درجة مئوية لمدة 30 إلى 60 دقيقة. انقل الشرائح إلى محلول إزالة الشمع لمدة ثماني دقائق ، ثم جففها مرتين في 75٪ من الإيثانول اللامائي لمدة خمس دقائق لكل منهما قبل شطفها في PBS لمدة خمس دقائق.
الآن قم بإجراء إصلاح الضغط العالي EDTA لمدة 15 دقيقة. بعد الشطف باستخدام PBS ، أضف 3٪ بيروكسيد الهيدروجين إلى الأنسجة واحتضنه لمدة 10 دقائق. اغسل المنديل ثلاث مرات باستخدام PBS لمدة خمس دقائق لكل منهما.
باستخدام قلم الكيمياء المناعية، ارسم دائرة حول الأنسجة. بعد غسل الأنسجة باستخدام PBS ، قم بتلطيخ الأسنان طوال الليل في محلول الأجسام المضادة الأولي. في اليوم التالي ، اشطف المنديل ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منهما في PBS.
أضف الجسم المضاد الثانوي بالتنقيط واحتضنه لمدة 60 دقيقة. بعد الشطف باستخدام PBS ، احتضان الأنسجة في محلول DAB الجاهز للاستخدام لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. الآن تلطيخ الأنسجة في الهيماتوكسيلين لمدة ثلاث دقائق.
مرة أخرى ، اشطف المنديل باستخدام PBS قبل وضعه في محلول التمايز لمدة 10 ثوان. بعد شطف PBS ، أضف محلول الإرجاع لمدة 10 ثوان. أخيرا ، قم بإجراء معالجة الإيثانول اللامائي بنسبة 75٪ لمدة خمس دقائق وختم الشريحة براتنج محايد.
أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين - اليوزين تربيق مرتبة بإحكام في الفئران الزائفة ، بينما أظهرت الفئران OVX تغيرات نموذجية في هشاشة العظام مع تربيق متناثر وتضخم تجاويف نخاع. أظهرت مقارنة التصوير المقطعي المحوسب الصغير شبكة تربيقية غير مكتملة وترقق قشرة العظام في الفئران OVX مقارنة بالفئران الزائفة. بعد التدخل الدوائي ، أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين - اليوزين بنية التربيق المستعادة وانخفاض تجويف النخاع مقارنة بمجموعة OVX.
أظهرت مؤشرات التصوير عددا أقل من التربيق المكسور واستعادة الشبكة في مجموعة حبوب Xiaoyao ذات الجرعة العالية مقارنة بمجموعة OVX. أظهرت نتائج الكيمياء النسيجية المناعية زيادة الفوسفاتيز القلوي والكولاجين من النوع الأول وانخفاض الإنترلوكين 17 و ACT1 و الإنترلوكين 6 في مجموعة الأدوية.
