للبدء ، قم بتضمين اليرقة المعدلة وراثيا في الاغاروز منخفض الذوبان في طبق ميكروويل ذو قاع زجاجي. ضع الطبق على المرحلة المجهرية في المجهر المقلوب. ضع المنطقة المطلوبة للاستئصال وركزها في وسط مجال الرؤية.
اختر إعدادات Z-stack لتصوير اتساع نطاق الأوبيركل بالكامل. قم بتصوير منطقة الاهتمام قبل الاستئصال. ثم ارسم منطقة دائرية بقطر 25 ميكرومتر في مستوى ثنائي الأبعاد محدد.
ركز على النقطة باستخدام منطقة الاهتمام أو أداة عائد الاستثمار. لإجراء الاستئصال ، قم بتطبيق طاقة الاستئصال المقاسة بدون هدف على 450 مللي واط لمدة 10 ثوان. قم بتعريض المنطقة المحددة لليزر ثنائي الفوتون.
بعد الاستئصال ، قم بتأكيد الاستئصال هيكليا عن طريق تصوير نفس المكدس Z بنفس الإعدادات ، كما هو مستخدم قبل الاستئصال. باستخدام ملقط أو إبرة تشريح ، قم بإزالة اليرقات بعناية من الاغاروز منخفض الذوبان. أولا ، قم بإزالة طبقة من الاغاروز تغطي اليرقات.
ثانيا ، قم بإزالة الاغاروز على اتصال مباشر مع اليرقات. ضع اليرقات مرة أخرى في طبق به وسائط E3 نقية. بعد أربع أو ست ساعات من الآفة ، أعد تصوير منطقة الجراحة باستخدام يرقات مدمجة في الاغاروز في نفس الإعدادات على نفس المجهر.
بعد معالجة الصور في فيجي ، حدد الخلايا بعلامة نووية ، أو عن طريق قياس المنطقة ، في حالة تداخل الخلايا. لتحديد المنطقة ، قم بإنشاء قناع يشمل البلاعم. استخدم أداة الصورة والضبط والعتبة وإنشاء عائد استثمار وتحليل الجسيمات.
ثم قم بقياس المنطقة. إنشاء رسوم بيانية ترسم نتائج القياس باستخدام برنامج مناسب. تم الكشف عن تراكم كبير من البلاعم في منطقة البراعم المستعصية بعد ست ساعات من الاستئصال في يرقات ما بعد ستة أيام من الإخصاب.
في اليرقات بعد أربعة أيام من الإخصاب ، زاد عدد البلاعم بعد أربع ساعات من الآفة. زاد عدد البلاعم ومساحتها بعد أربع ساعات من الآفة مقارنة بالحالة غير المستعصية.
