تفكك الدماغ وبذر الخلايا العصبية القشرية في زراعة الخلايا

للبدء ، قم بفرم الأدمغة المعزولة إلى قطع في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر بشفرة مشرط معقمة يمكن التخلص منها. أضف التربسين إلى الأنبوب بتركيز نهائي قدره 0.25٪اغمر الأنبوب في حمام ماء ساخن من 35 إلى 38 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. ماصة بلطف تعليق الأنسجة صعودا وهبوطا لفصل الخلايا.

ثم أضف 0.5 ملليلتر من مصل الأبقار الجنينية إلى المعلق المتجانس لتحييد نشاط التربسين. قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية شبكة النايلون 70 ميكرومتر. باستخدام مكبس حقنة سعة ملليلتر واحد ، قم بطحن الأنسجة برفق في مصفاة الخلية.

ثم الطرد المركزي الأنبوب المخروطي عند 300 غرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. تخلص من Poly-L-Ornithine في قوارير T25 وشطف القوارير ثلاث مرات بخمسة ملليلتر من PBS. صب الأنبوب بعناية لإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلية عن طريق سحب الإصبع برفق باستخدام ملليلتر إلى ثلاثة ملليلتر من الوسائط العصبية القاعدية الكاملة.

قم بطلاء الخلايا في قوارير T25 المغلفة ب Poly-L-Ornithine مع ما يقرب من 20 مليون خلية لكل قارورة في خمسة ملليلتر من الوسائط العصبية القاعدية الكاملة. احتضان ثقافة الخلية عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون 5٪. التصقت الخلايا العصبية في قوارير T25 وألواح 96 بئرا وشكلت عمليات عصبية بحلول اليوم الثالث.

احتوت ثقافات الخلايا العصبية دون المستوى الأمثل على كتل الخلايا والحطام.