للبدء ، احصل على صور متعددة المشاهدات لأجنة أسماك الحمار الوحشي في المرحلة المبكرة باستخدام مجهر الورقة الضوئية. بمجرد اكتشاف نقاط الاهتمام، حدد جميع المشاهدات، وانقر بزر الماوس الأيمن واختر تسجيل باستخدام نقاط الاهتمام. للتحقق من مدى دقة التسجيل، حدد طريقتين متتاليتين.
انتقل إلى المنطقة المتداخلة وقم بالتبديل بين الطريقتين لملاحظة ما إذا كانت الخرزات المصورة من زوايا مختلفة متراكبة. بعد التسجيل بنجاح ، انقر فوق حفظ في نافذة مستكشف طرق العرض المتعددة لحفظ ملف XML المحدث. الآن افتح الخرزة.
XML في محرر نصوص من اختياره ونسخ الكتلة بأكملها ضمن عرض التسجيلات. افتح الجنين. XML واستبدل كتلة تسجيلات العرض بالكتلة المنسوخة من ملف الخرز.
ثم افتح الجنين. XML في Big Stitcher وتحقق بعناية مما إذا كان التسجيل قد نجح مع الجنين. كرر نفس الشيء للحبات عن طريق التحقق من تداخل الهياكل ذات الأهمية في كل عرضين متتاليين.
لإجراء فك الالتفاف متعدد المشاهدات ، حدد جميع طرق العرض في ملف الخرزة ، وانقر بزر الماوس الأيمن ، واختر وظائف انتشار النقاط وخيارات الاستخراج. تابع أحجام وظائف انتشار النقاط الافتراضية وانقر فوق موافق. ثم أعد حفظ ملف XML. بعد ذلك ، افتح الجنين.
XML وتعيين وظيفة انتشار النقاط لكل طريقة عرض على حدة. انقر بزر الماوس الأيمن فوق طريقة عرض ، وانقر فوق Point Spread Functions ، واختر تعيين ، وحدد خيارات متقدمة ، متبوعا بتعيين PSF جديد لجميع طرق العرض المحددة. انقر فوق "تصفح" ، وانتقل إلى مسار ملف XML وافتح مجلد PSF.
في طريقة العرض المحددة ، اختر وظيفة انتشار نقطة المطابقة مع المعرف المقابل ، وانقر فوق موافق. بعد تعيين وظيفة انتشار النقاط لجميع طرق العرض ، انقر بزر الماوس الأيمن واختر deconvolution متعدد المشاهدات. حدد المربع المحيط كطرق عرض محددة حاليا. عند 70٪ epiboly ، اتخذت الأجنة اتجاهات أفقية أو رأسية أو مائلة داخل أنبوب البوليمر مع كون الأفقي هو الأقل تمثيلا ، بينما لوحظت المواضع الرأسية والمائلة بالتساوي.
عندما تم تحضير العينات قبل المعدة ، أظهرت حوالي 25٪ من الأجنة اتجاها أفقيا. أظهرت بقية الأجنة اتجاهات أخرى مختلفة في مرحلة البراعم. ومع ذلك ، أعيد توجيه العديد منهم إلى الوضع الأفقي أثناء تكوين الجسيدات المبكر.
أظهرت مقارنة الصور المغرسة بمعلومات النطاق الخلوي عدم وجود فرق كبير في معلومات النوى ، ولكن تم حل حدود الخلية بشكل أفضل في مجموعة 30 درجة. مقارنة بصور الإدخال الأصلية ، احتوت الصور المجزأة على أخطاء. فشل البرنامج إما في اكتشاف حدود الخلية أو رسم حدود خلية غير موجودة.
أدى عدد الأخطاء إلى زيادة الصور المغرسة بشكل كبير التي تم الحصول عليها من التصوير على فترات زاوية 45 و 60 درجة مقارنة ب 30 درجة.
