معالجة الإجهاد الحراري لشتلات نبات الأرابيدوبسيس وتحضير تدرج السكروز للتنميط المتعدد الجسيمات واستخراج الحمض النووي الريبي

للبدء ، باستخدام قطارة ، طبق 250 من بذور نبات الأرابيدوبسيس لكل مجموعة من الظروف على ورق ترشيح موضوعة على صفيحة أجار Murashige و Skoog Basal Media بدون سكروز ، مكملة بنسبة 1.2٪ أجار نباتي. لف اللوحة بورق الألمنيوم لحجب الضوء وضعها في حاضنة عند أربع درجات مئوية لمدة يومين للحث على التبخير. بعد يومين ، قم بفك ورق القصدير وانقل البذور المبنيئة إلى غرفة النمو.

دع النباتات تنمو لمدة خمسة أيام. بعد ذلك ، أغلق اللوحة التي تحتوي على شتلات عمرها خمسة أيام بشريط لاصق مقاوم للماء. ضع الطبق في حمام مائي 40 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لمعالجة الإجهاد الحراري.

مباشرة بعد المعالجة الحرارية ، قم بتبريد اللوحة ونقلها إلى غرفة نمو مثبتة على 22 درجة مئوية لمدة ساعتين للسماح بالتعافي. احصد 250 شتلة معالجة حراريا أو غير معالجة في أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 مل. قم بتجميد العينات التي تم جمعها على الفور في النيتروجين السائل.

تحضير محلول تدرج السكروز بتركيزات 12.5٪ 24.4٪ 36.3٪ 48.1٪ و 60٪ لتحضير تدرج كثافة السكروز المتقطع ، قم أولا بتحميل 2.2 مل من محلول السكروز 60٪ في قاع الأنبوب. ثم ضع الأنبوب في فريزر 80 درجة مئوية لتجميد محلول السكروز إلى حالة صلبة. بعد التصلب ، قم بتحميل 2.2 مل من كل تركيز من تركيزات السكروز الأخرى في السلسلة من الأسفل إلى الأعلى.

قم بتخزين تدرج السكروز المحضر على حرارة 80 درجة مئوية حتى الاستخدام.