للبدء ، خذ 100 ملليغرام من الأنسجة الطازجة أو 20 ملليغرام من الأنسجة المجففة بالهواء وضعها في أنبوب طرد مركزي سعة ملليلتر. ضع حبتين من الفولاذ المقاوم للصدأ بحجم خمسة ملم في أنبوب الطرد المركزي وانقلهما إلى مطحنة مناديل عالية الإنتاجية تعمل بسرعة 60 هرتز لمدة 60 ثانية. لاستخراج الحمض النووي ، أضف 800 ميكرولتر من المخزن المؤقت للعزل النووي المبرد مسبقا إلى العينة وضعه على خلاط دوامة لمدة خمس دقائق.
ثم ضع العينة في جهاز طرد مركزي وقم بتدويرها على حرارة 13 ، 780 جم لمدة 10 دقائق. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية بعناية. بعد ذلك ، أضف 600 ميكرولتر من Buffer P1 ، متبوعا بخمسة ميكرولتر من RNase A إلى العينة.
بعد الدوامة ، احتضان العينات في حمام مائي عند 65 درجة مئوية لمدة 1.5 ساعة ، مع قلب الأنابيب مرتين إلى ثلاث مرات أثناء الحضانة. ثم أضف 200 ميكرولتر من Buffer P2. تخلط جيدا. ووضع العينة على الثلج لمدة 15 دقيقة.
بعد ذلك ، جهاز طرد مركزي عند 13 ، 780 جم لمدة 10 دقائق. قم بشفط المادة الطافية بعناية على عمود مرشح AF وقم بطردها عند 13 ، 780 جم لمدة دقيقتين. انقل المرشح السفلي إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 ملليلتر.
بعد حساب حجم المرشح ، أضف 1.5 ضعف حجم Buffer P3 إلى العينة ورجها على الفور لخلط العينة. أضف 650 ميكرولتر من الخليط المحضر إلى عمود الامتصاص واحتضنه لمدة خمس دقائق. ثم ، جهاز الطرد المركزي عند 13 ، 780 جم لمدة 30 إلى 60 ثانية.
أضف المرشح الذي تم الحصول عليه في عمود الامتصاص مرة أخرى. جهاز طرد مركزي وتخلص من سائل النفايات. اغسل العمود مرتين ب 600 ميكرولتر من محلول الشطف WB. بعد الطرد المركزي ، تخلص من سائل النفايات ، ثم ضع عمود الامتصاص في أنبوب تجميع فارغ.
بعد الطرد المركزي للعينة عند 13 ، 780 جم لمدة دقيقتين ، اتركها في درجة حرارة الغرفة لتبخر الإيثانول المتبقي. انقل عمود الامتصاص إلى أنبوب طرد مركزي نظيف سعة 1.5 ملليلتر ، وأضف 45 ميكرولترا من الماء منزوع الأيونات المعقم المسخن مسبقا إلى 65 درجة مئوية إلى مركز الغشاء الممتز. بعد خمس دقائق ، قم بالطرد المركزي للأنبوب عند 13 ، 780 جم لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة.
ثم استخدم مقياس الطيف الضوئي. تحديد تركيز الحمض النووي في المحلول المصفى. تراوحت نسب امتصاص OD260 إلى OD280 من 1.8 إلى 1.84 ، وتجاوزت كمية الحمض النووي 100 نانوجرام لكل ميكرولتر ، مما يؤكد الجودة الجيدة للحمض النووي المستخرج.
