وأيد هذا العمل من قبل زمالة وندبيك ليدر جروب جديد لLNN. يقر PWW دعم التمويل منحة من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC). كما نشكر المركز الدانمركي الجزيئية Bioimaging في جامعة جنوب الدنمارك للوصول إلى القرص الغزل المجهر.

ويمكن أن يتم الحصول على البروتينات الموسومة EGFP في غشاء البلازما لتحليل KICS على مجهر epifluorescence، TIRF الإعداد أو على المجهر القرص الغزل المقرر أن الحصول على صور للغشاء من الفائدة. هناك حاجة إلى حجم بيكسل وكذلك الوقت بين إطارات الصور للتحليل. تسلسل صورة 100-1،200 إطارات بمعدل الإطار من 4-30 هرتز يمكن استخدامها للتحليل. خلال عملية الاستحواذ، فمن المهم للحفاظ على الغشاء في التركيز طوال فترة التصوير، والتركيز على جزء من الغشاء شقة في مضان التي يتم توزيعها بشكل موحد. تتحرك الحويصلات، جاحظ مناطق الغشاء وعضيات الخلية يمكن حصدها في وقت لاحق في عملية التحليل. وينبغي اختيار الوقت الاستحواذ حتى لا يكون هناك أي انحراف أو حركة الخلية. للحصول على البرامج النصية رمز KICS لMATLAB، اتصل بول وايزمان (Paul.Wiseman @ McGill.ca). أول مرة يتم استخدام رمز KICS، MAT مفتوحةLAB وانقر فوق ملف، ثم تعيين المسار، ثم انقر فوق إضافة مع المجلدات الفرعية والعثور على مجلد على جهاز الكمبيوتر الذي توجد رمز KICS. ثم انقر فوق موافق، وحفظ وإغلاق. الآن تواصل مع تحليل المحاصيل وصفها في النقاط التالية. 1. استيراد صورة تسلسل الاهتمام إلى برنامج تحليل التصوير باعتباره TIFF المكدس حفظ الملف مع اسم: stack1.tif. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد منطقة مستطيلة ذات الاهتمام (ROI) في الجزء المسطح من الغشاء باستثناء عضيات الخلية تتحرك وجاحظ مناطق الغشاء. يتم اختيار حجم المحاصيل بحيث يتم إنشاؤها بما فيه الكفاية لإحصاءات جيدة ك 2 المؤامرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المحاصيل في المنطقة وحفظ المحاصيل كملف TIFF في المجلد المناسب. إذا كان هناك العديد من المحاصيل من نفس الفيلم، واستخدام الزيادة العدد، على سبيل المثال &quot;stack1crop.tif&quot;، &quot;stack1crop2.tif&quot;، &quot;stack1crop3.tif&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المجلد الذي يحتوي على المحاصيل محلياعلى جهاز الكمبيوتر، وليس على الخادم، في حين تقوم التحليل KICS. </li></ol> 2. استيراد المحاصيل في برمجيات تحليل واحدا تلو الآخر لإجراء تحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MATLAB مفتوحة ونوع &quot;icsgui&quot; في إطار الأوامر ثم اضغط ENTER. ICS GUI هو اسم التنفيذي للبرنامج واجهة المستخدم الرسومية صورة ارتباط التحليل الطيفي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في واجهة المستخدم الرسومية ICS انقر على &quot;KICS&quot; علامة التبويب. وأظهرت لقطة شاشة من إطار التحليل في الشكل 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العثور على مجلد مع اسم المجلد &quot;رمز MATLAB&quot; وانتقل إلى الملف مع اسم الملف &quot;مخطوطات&quot; وفتح بذلك عن طريق النقر المزدوج عليها. بدلا من ذلك، انقر بزر الماوس الأيمن على الملف واختيار &quot;فتح مع MATLAB&quot; أو انتقل إلى ملف مفتوح في MATLAB وفتح ملف البرامج النصية. ويسمى هذا الملف محرر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في التمرير لمحرر &quot;KICS تحميل مجموعات البيانات&quot;، ثم نسخ أو اسم نوع الملف وموقع المجلد في سطر الأوامر التي تبدأمع IMG = على سبيل المثال &quot;C: المستخدمين المستندات AQP3dynamics stack1crop.tif&quot;. في سطر الأوامر أدناه موقع المجلد تعيين عدد من الأطر ليتم تحليلها - مثل [1:500]. استخدام نفس الإعدادات لكافة الأفلام متتالية في سلسلة بيانات. إذا كان هناك انحراف التركيز في إطارات في وقت لاحق، ينبغي استبعاد هذه من التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في محرر انقر فوق &quot;حفظ&quot; ثم انقر فوق &quot;تقييم الخلية&quot;. يتم تحميل بيانات الآن في البرنامج في التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في إطار تحليل KICS في واجهة المستخدم الرسومية، أدخل الإعدادات للتحليل: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Unclick صناديق &quot;T الخلية&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل عدد تأخيرات زمنية ليتم تحليلها. وعدد من الفجوات الزمنية (τ) يكون لها تأثير على المؤامرة نشرها ويجب أن يتم اختياره بحيث المؤامرة نشرها هو الخطية. تبدأ مع دخول 25 ثم تنخفض إلى حيث المؤامرة نشرها هو الخطية. τ هو عدد مرات تتخلف التحليل KICS يقارن وتأخر الوقت هو الوقت المناسب بإلى صف إطار واحد والقادمة. وينبغي اختيار أصغر قيمة التي تعطي مؤامرة الخطية. الحد الأقصى لعدد تأخيرات زمنية يتم اختيار بحيث يتم الحصول على تناسب خطي، واختيار وقيمة أعلى إنتاج البيانات التي لا يمكن تركيبها الخط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل الحد الأقصى لقيمة ك 2 (انظر دائرة 1 في الشكل 1)، فإنه عادة ما يكون 20-50. وخير ك 2 المؤامرة هي مؤامرة التي توجد فيها العديد من نقاط البيانات التي يتم توزيعها على طول الخط. تبدأ مع دخول 70 ثم تنخفض بعد أن قيمت ك 2 ونشر المؤامرات وتحديد أدنى قيمة حيث الكتلة نقاط البيانات حول خط مستقيم. ك 2 القيمة هو حجم التربيعية للالمكانية ك متجه في الفضاء فورييه. في البداية، ينبغي تكرار تحليل حتى يتم تحديد أفضل القيم، ثم استخدام نفس الإعدادات لكافة الأفلام التوالي في سلسلة البيانات ولكن دائما التأكد من أن إعدادات اختيار تعطي مناسبا للبيانات: ك جيدة 2 المؤامراتومؤامرة نشر الخطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر &quot;إعدادات المتجر والمضي قدما&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;نعم&quot; لإظهار كافة الرسوم البيانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;تحميل صورة سلسلة&quot; (انظر دائرة 2 في الشكل 1)، ثم انقر فوق &quot;مساحة العمل&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد &quot;imgSerCrop&quot;، ثم انقر فوق &quot;استيراد من مساحة عمل&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدخال الضبط جمع نظام التصوير. في &quot;حجم بكسل&quot; مربع أدخل الحجم المتوقع بيكسل للنظام التصوير الذي يتم الحصول مداخن الصورة. لAQP3-EGFP، استخدمت 0.111. في المربع &quot;أدخل الوقت (ق) بين الإطارات&quot;، وكان يستخدم لAQP3 0.1150-EGFP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر فوق &quot;تحديد رويس&quot;، أدخل &quot;1&quot;، انقر فوق موافق و&quot;استخدام الصورة كاملة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انقر على زر &quot;التحليل هل KICS&quot; وانقر فوق نعم للقيام به &quot;تصفية متحرك&quot;. سوف تفتح تلقائيا النتائج كصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصغير إطار إعدادات، والتقليل من معلومات الخلية يندوث، وتصغير إطار photophysics. في إطار ديناميكية، تحقق من أن المؤامرة ديناميات يظهر تناسب خطية من البيانات إلى خط مع ميل سلبي وهذا يعني أن نقاط البيانات ربط ويمكن الافتراض نشرها مجانا. تسجيل معامل الانتشار لتأخر وقت محدد وك 2 إعدادات (أنه ليس من الضروري أن نشير إلى الانحراف المعياري للصالح). يجب أن تتجمع نقاط البيانات في المؤامرات ك 2 حول خط لوقت معين تتخلف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مربع التجزئة &quot;حفظ أرقام المفتوحة كصور&quot;، ثم انقر فوق &quot;حفظ أرقام المفتوحة كصور&quot; لإنقاذ يؤدي الملفات. حفظ في مجلد جديد تحت C: المستخدمين المستندات AQP3diffusion. انقر فوق &quot;البيانات الحالية واضحة&quot; وتواصل مع تحليل المحصول المقبل. </li></ol></li></ol> يتم احتساب 3. متوسط ​​معامل الانتشار المحسوبة للحصول على نظرة عامة على تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل معاملات نشر الفردية من كل العائد على الاستثمار في spreadsheet (تأكد من أن نلاحظ τ وك 2 القيم)، استخدم أسماء المحاصيل كما هو مبين أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب متوسط ​​معامل الانتشار والانحراف المعياري باستخدام برنامج جدول بيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء اختبار كولموجوروف-سميرنوف أو الطلاب اختبار t لتقييم فروق ذات دلالة إحصائية باستخدام مستوى الدلالة 5٪. ويمكن إجراء مقارنات Quantitave بين الخلايا (على سبيل المثال يعامل مقابل nontreated). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح إصدار جداول للنشر المؤامرات التي تم إنشاؤها بواسطة برامج التحليل لكل محصول، ويبلغ متوسط ​​البيانات لكل حالة لكل تأخر الوقت. توليد مؤامرة جديدة لنشرها في المتوسط ​​في تقديم أوراق أو العروض التقديمية. </li></ol>

<ol>
	<li>Kolin, D. L., Ronis, D., Wiseman, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=k-Space+image+correlation+spectroscopy:+A+method+for+accurate+transport+measurements+independent+of+fluorophore+photophysics.">k-Space image correlation spectroscopy: A method for accurate transport measurements independent of fluorophore photophysics.</a> Biophysical Journal. 91, 3061-3075 (2006).</li><li>Saxton, M. J., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+tracking:+Applications+to+membrane+dynamics.">Single-particle tracking: Applications to membrane dynamics.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 26, 373-399 (1997).</li><li>Bannai, H., Levi, S., Schweizer, C., Dahan, M., Triller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+lateral+diffusion+of+membrane+molecules+with+quantum+dots.">Imaging the lateral diffusion of membrane molecules with quantum dots.</a> Nat Protoc. 1, 2628-2634 (2006).</li><li>Jaqaman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+single-particle+tracking+in+live-cell+time-lapse+sequences.">Robust single-particle tracking in live-cell time-lapse sequences.</a> Nat Methods. 5, 695-702 (2008).</li><li>Pinaud, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+partitioning+of+a+glycosyl-phosphatidylinositol-anchored+protein+in+glycosphingolipid-rich+microdomains+imaged+by+single-quantum+dot+tracking.">Dynamic partitioning of a glycosyl-phosphatidylinositol-anchored protein in glycosphingolipid-rich microdomains imaged by single-quantum dot tracking.</a> Traffic. 10, 691-712 (2009).</li><li>Wieser, S., Axmann, M., Schutz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+analysis+of+single-molecule+tracking+data+by+comprehensive+testing+against+Monte+Carlo+simulations.">Versatile analysis of single-molecule tracking data by comprehensive testing against Monte Carlo simulations.</a> Biophys J. 95, 5988-6001 (2008).</li><li>Sbalzarini, I. F., Koumoutsakos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feature+point+tracking+and+trajectory+analysis+for+video+imaging+in+cell+biology.">Feature point tracking and trajectory analysis for video imaging in cell biology.</a> Journal of Structural Biology. 151, 182-195 (2005).</li><li>Durisic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+correction+of+blinking+bias+in+image+correlation+transport+measurements+of+quantum+dot+tagged+macromolecules.">Detection and correction of blinking bias in image correlation transport measurements of quantum dot tagged macromolecules.</a> Biophys J. 93, 1338-1346 (2007).</li><li>Umenishi, F., Verbavatz, J. M., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+regulated+membrane+diffusion+of+a+green+fluorescent+protein-aquaporin+2+chimera.">cAMP regulated membrane diffusion of a green fluorescent protein-aquaporin 2 chimera.</a> Biophys J. 78, 1024-1035 (2000).</li><li>Levin, M. H., Haggie, P. M., Vetrivel, L., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+in+the+endoplasmic+reticulum+of+an+aquaporin-2+mutant+causing+human+nephrogenic+diabetes+insipidus.">Diffusion in the endoplasmic reticulum of an aquaporin-2 mutant causing human nephrogenic diabetes insipidus.</a> The Journal of biological chemistry. 276, 21331-21336 (2001).</li><li>Semrau, S., Schmidt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+image+correlation+spectroscopy+(PICS):+retrieving+nanometer-scale+correlations+from+high-density+single-molecule+position+data.">Particle image correlation spectroscopy (PICS): retrieving nanometer-scale correlations from high-density single-molecule position data.</a> Biophys J. 92, 613-621 (2007).</li><li>Petersen, N. O., Hoddelius, P. L., Wiseman, P. W., Seger, O., Magnusson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+membrane+receptor+distributions+by+image+correlation+spectroscopy:+concept+and+application.">Quantitation of membrane receptor distributions by image correlation spectroscopy: concept and application.</a> Biophys J. 65, 1135-1146 (1993).</li><li>Marlar, S., Arnspang, E. C., Koffman, J. S., L&#248;cke, E. M., Christensen, B. M., Nejsum, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+cAMP+increases+aquaporin-3+plasma+membrane+diffusion.">Elevated cAMP increases aquaporin-3 plasma membrane diffusion.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 306, (2014).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

قدمت هذه الورقة خطوة بخطوة محة مفصلة عن كيفية تطبيق أسلوب التحليل KICS لتحديد معاملات نشر من صور المجهر من البروتينات ذات الكلمات الدلالية مع البروتينات الفلورية. تحليل مستقل عن التحقيق مع اختيار مجموعة ديناميكية واسعة جدا في كثافة وضع العلامات وبالتالي يمكن أن تطبق ?...

تنظم المنظمة الزمانية المكانية أربعة الأبعاد والتنقل الجانبي للبروتينات غشاء البلازما بإحكام ويمكن أن تلعب دورا في وظيفة البروتين والنشاط والتفاعل البروتين البروتين. الانتشار الأفقي للبروتينات غشاء البلازما، وقد جرت العادة على درس عن طريق حساب معاملات نشر للجسيمات واحدة من الوقت الفاصل بين التصوير من الكم نقطة أو صبغ المسمى غشاء بروتينات البلازما 2-4. هذا النهج يتطلب إدخال علامة خارج الخلية البروتين في غشاء البلازما لالكم نقطة أو وضع العلامات الصبغة، والتي يمكن أن تمس للطي البروتين وظيفة، وبالتالي، لا يمكن أن يتحقق لبعض البروتينات. وقد تبين حجم الفراغية من الكم نقطة لإبطاء انتشار البروتين 5 وعلاوة على ذلك، وصفت سوى نسبة ضئيلة من البروتينات في عدد السكان مع نقاط الكم، وليس من المعروف ما إذا كان هذا الكسر هو ممثل لمجموع مجموعة من البروتينات غشاء البلازما. هيئة تنظيم الاتصالات جسيم واحدcking يبدو (SPT) قياسات معاملات نشر سلسلة من الصور من الكم نقطة البروتينات المسمى ينطوي على تعيين المناصب ذروة تصوير الجزيئات مع اثنين من الأبعاد التمويه يناسب تليها خوارزميات التحليل واسعة النطاق. التحليل هو حسابيا مكثفة للغاية، وتتطلب منحنى غير الخطية واسعة النطاق المناسب في كل إطار صورة تسلسل الوقت الفاصل بين لتقريب وظيفة انتشار نقطة المجهر (عادة اثنين من الأبعاد المكانية Gaussians) وربط لاحقة من المناصب الجسيمات في مسارات الجسيمات التي تصف حركة الجزيئات واحدة 6،7. صورة تقنية الترابط وضعت مؤخرا، ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي (KICS) تمكن قياسات بسيطة النسبية للمعاملات نشر الموسومة fluorescently البروتينات غشاء البلازما. إمكانية لحساب معاملات روتينية نشر بروتينات الغشاء المسمى مع البروتينات الفلورية التي كتبها KICS هو أداة فريدة من نوعها التي تتولىالعديد من المزايا التقليدية الكم دوت تحليل SPT: لا يلزم من الأكواد الإدراج خارج الخلية وقتا طويلا خارج الخلية وضع العلامات (خطوط الخلايا معربا عن البروتينات الفلورية يمكن استخدامها)؛ يتم استخراج معاملات نشر من تجمع مجموعه من البروتينات الفلورية مقارنة فرعية المسمى مع نقاط الكم؛ تحليل بسيط دون الحاجة إلى تتبع البروتينات واحد ويمكن إجراء التحليل باستخدام التعليمات البرمجية الموجودة مع عدم وجود شرط للبرمجة مستخدم إضافي. هذه الطريقة السريعة لأنه هو أسلوب المتوسط ​​والتي تمكن بسرعة حساب وحساب معاملات نشر. هذه القياسات الانتشار السريع للسكان البروتين تكمل المعلومات أكثر تفصيلا النقل الجزيئية التي تم الحصول عليها عن مجموعة فرعية من السكان وفقا للأساليب SPT مضنية. الوقت KICS يرتبط تسلسلات الصور مضان المجهر الأولى التي تحولت إلى فورييه الفضاء، وبالتالي يفصل فلوريداتقلبات uorescence بسبب photophysics من تلك التي تعزى إلى النقل الجزيئية 1. ونتيجة لذلك، يمكن KICS تحديد كثافة العدد، سرعة التدفق، ونشر fluorescently المسمى الجزيئات في حين يجري غير متحيز من قبل photobleaching من معقدة أو امض من fluorophores. وهذا يجعل KICS أداة مفيدة لتحديد بسرعة ديناميات نشر بروتينات غشاء الخلية fluorescently المسمى من دون الحاجة إلى كتابة الخوارزميات مخصص. إلى جانب البروتينات fluorescently المسمى، KICS يمكن أيضا أن تطبق على الكم دوت المسمى غشاء بروتينات 8. تقدم هذه الورقة مقدمة خطوة بخطوة لكيفية استخدام KICS لاستخراج معاملات نشر EGFP الموسومة البروتينات غشاء البلازما من خلال إظهار كيفية وضع المحصول، وكيفية استخدام رمز وكيفية تقييم المؤامرات ولدت، الذي نشر يتم استخراج معاملات. على سبيل المثال، البيانات التي حصلت عليها الغزل مجموعة القرص المجهري في شبه الانعكاس الداخلي الكامل يتألقيتم تقديم الامتحانات التنافسية الوطنية (TIRF) واسطة، من البروتين الكلى قناة المياه aquaporin-3 (AQP3) الموسومة مع EGFP.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="406">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">31600-083</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">FBS</td>
			<td style="width:71px;">Invitrogen</td>
			<td>10082147</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicilin&#160;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/13752?lang=en&amp;region=DK">13752</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kanamycin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td>15160070</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td>11860038</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phenol red free medium</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td>11880-028</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMSO</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d8418?lang=en&amp;region=DK">D8418&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES</td>
			<td style="width:71px;">Gibco</td>
			<td>15630056</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Apparatus</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Spinning Disk Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">Ti Eclipse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EMCCD Camera</td>
			<td style="width:71px;">Andor</td>
			<td style="width:119px;">Ixon+</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

easy measurement of diffusion coefficients of egfp-tagged plasma membrane proteins using k-space image correlation spectroscopy

وينظم انتشار الأفقي وتجزئة بروتينات غشاء البلازما بإحكام في الخلايا، وبالتالي، ودراسة هذه العمليات سوف تكشف عن رؤى جديدة لغشاء البلازما وظيفة البروتين والتنظيم. مؤخرا، ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي (KICS) وقد وضعت 1 لتمكين القياسات الروتينية للمعاملات نشرها مباشرة من صور الموسومة fluorescently البروتينات غشاء البلازما، التي تجنب التحيز المنهجي الذي عرضته photophysics التحقيق. على الرغم من أن الأساس النظري لتحليل معقد، وطريقة يمكن تنفيذها من قبل nonexperts باستخدام رمز متاحة بحرية لقياس معاملات نشر من البروتينات. KICS بحساب دالة الارتباط الوقت من صورة كومة مضان المجهري بعد فورييه تحويل كل صورة إلى المتبادلة (ك) الفضاء. في وقت لاحق، في المتوسط ​​دائرية، اللوغاريتم الطبيعي وتحويل الخطية يناسب إلى وظيفة ارتباط تعطي معامل الانتشار. هذاوتوفر ورقة دليل خطوة بخطوة لتحليل الصورة وقياس معاملات الانتشار عبر KICS. أولا، يتم الحصول على ارتفاع معدل الإطار تسلسل الصور من البلازما بروتين الغشاء fluorescently المسمى باستخدام المجهر مضان. ثم، يتم تحديد المنطقة ذات الاهتمام (ROI) تجنب عضيات داخل الخلايا، والانتقال حويصلات أو جاحظ مناطق الغشاء. يتم استيراد المكدس العائد على الاستثمار في مدونة متاحة بحرية ويتم تعيين العديد من المعلمات تحديدا (انظر القسم الطريقة) لتحليل KICS. البرنامج ثم يقوم بإنشاء &quot;المنحدر من المنحدرات&quot; مؤامرة من وظائف الارتباط الوقت ك الفضاء، ويتم حساب معامل الانتشار من المنحدر من المؤامرة. وفيما يلي الإجراء خطوة بخطوة KICS لقياس معامل الانتشار من بروتين الغشاء باستخدام الكلوي قناة المياه aquaporin-3 المفتاحية EGFP كمثال الكنسي.

للحصول على مداخن صورة مناسبة ليتم تحليلها مع KICS، ويمكن استخدام نظم المجهر مختلفة. فمن الممكن لتحليل تسلسلات الصور من المجهر مضان برنامج التحصين الموسع فضلا عن TIRF أو الغزل قرص الإعداد. يجب أن يكون غشاء مسطحة دون أي عضيات الخلية تتحرك كبيرة أو تتحرك الحويصلات / الكائنا?...

Watch this Scientific Journal Video about Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy at JoVE.com

Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy

تقدم هذه الورقة خطوة خطوة الدليل لأسلوب تحليل تذبذب ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي (KICS) لقياس معاملات نشر fluorescently المسمى غشاء بروتينات البلازما في خلايا الثدييات الحية.

من السهل قياس إنتشار معاملات EGFP الموسومة البروتينات عن طريق غشاء البلازما ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي

Lateral diffusion and compartmentalization of plasma membrane proteins are tightly regulated in cells and thus, studying these processes will reveal new ...

easy-measurement-diffusion-coefficients-egfp-tagged-plasma-membrane

Research

JoVE Journal

Biology

10.6K Views.  Aarhus University.  تقدم هذه الورقة خطوة خطوة الدليل لأسلوب تحليل تذبذب ك الفضاء صورة الارتباط الطيفي (KICS) لقياس معاملات نشر fluorescently المسمى غشاء بروتينات البلازما في خلايا الثدييات الحية. 

Video: Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy

Measuring Diffusion Coefficients via Two-photon Fluorescence Recovery After Photobleaching

Multi-fluorescence recovery after photobleaching is a microscopy technique used to measure the diffusion coefficient (or analogous transport parameters) of macromolecules, and can be applied to both in vitro and in vivo biological systems. Multi-fluorescence recovery after photobleaching is performed by photobleaching a region of interest within a fluorescent sample using an intense laser flash, then attenuating the beam and monitoring the fluorescence as still-fluorescent molecules from outside the region of interest diffuse in to replace the photobleached molecules. We will begin our demonstration by aligning the laser beam through the Pockels Cell (laser modulator) and along the optical path through the laser scan box and objective lens to the sample. For simplicity, we will use a sample of aqueous fluorescent dye. We will then determine the proper experimental parameters for our sample including, monitor and bleaching powers, bleach duration, bin widths (for photon counting), and fluorescence recovery time. Next, we will describe the procedure for taking recovery curves, a process that can be largely automated via LabVIEW (National Instruments, Austin, TX) for enhanced throughput. Finally, the diffusion coefficient is determined by fitting the recovery data to the appropriate mathematical model using a least-squares fitting algorithm, readily programmable using software such as MATLAB (The Mathworks, Natick, MA).

In this article we will describe the procedure for measuring diffusion coefficients using multi-photon fluorescence recovery after photobleaching. We will begin by aligning the laser along the optical path to the sample and determining the proper experimental parameters, then continue generating and finally fitting fluorescence recovery curves.

قياس معاملات إنتشار عبر ثنائي الفوتون الاسترداد بعد الإسفار Photobleaching

Multi-fluorescence recovery after photobleaching is a microscopy technique used to measure the diffusion coefficient (or analogous transport parameters) ...

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the lipidic cubic phase or in meso method. The method has been shown to be quite versatile in that it has been used to solve X-ray crystallographic structures of prokaryotic and eukaryotic proteins, proteins that are monomeric, homo- and hetero-multimeric, chromophore-containing and chromophore-free, and alpha-helical and beta-barrel proteins. Recent successes using in meso crystallization are the human engineered beta2-adrenergic and adenosine A2a G protein-coupled receptors. Protocols are presented for reconstituting the membrane protein into the monoolein-based mesophase, and for setting up crystallizations in the manual mode. Additional steps in the overall process, such as crystal harvesting, are to be addressed in future video articles. The time required to prepare the protein-loaded mesophase and to set up a crystallization plate manually is about one hour.

Herein is described the procedure implemented in the Caffrey Membrane Structural and Functional Biology Group to set up manually crystallization trials of membrane proteins in lipidic mesophases.

بلورة البروتينات الغشائية لتحديد الهيكل باستخدام Mesophases Lipidic

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

Quantitative Measurement of GLUT4 Translocation to the Plasma Membrane by Flow Cytometry

Glucose is the main source of energy for the body, requiring constant regulation of its blood concentration. Insulin release by the pancreas induces glucose uptake by insulin-sensitive tissues, most notably the brain, skeletal muscle, and adipocytes. Patients suffering from type-2 diabetes and/or obesity often develop insulin resistance and are unable to control their glucose homeostasis. New insights into the mechanisms of insulin resistance may provide new treatment strategies for type-2 diabetes.
The GLUT family of glucose transporters consists of thirteen members distributed on different tissues throughout the body1. Glucose transporter type 4 (GLUT4) is the major transporter that mediates glucose uptake by insulin sensitive tissues, such as the skeletal muscle. Upon binding of insulin to its receptor, vesicles containing GLUT4 translocate from the cytoplasm to the plasma membrane, inducing glucose uptake. Reduced GLUT4 translocation is one of the causes of insulin resistance in type-2 diabetes2,3.
The translocation of GLUT4 from the cytoplasm to the plasma membrane can be visualized by immunocytochemistry, using fluorophore-conjugated GLUT4-specific antibodies.
Here, we describe a technique to quantify total amounts of GLUT4 translocation to the plasma membrane of cells during a chosen duration, using flow cytometry. This protocol is rapid (less than 4 hours, including incubation with insulin) and allows the analysis of as few as 3,000 cells or as many as 1 million cells per condition in a single experiment. It relies on anti-GLUT4 antibodies directed to an external epitope of the transporter that bind to it as soon as it is exposed to the extracellular medium after translocation to the plasma membrane.

This protocol describes a rapid technique to quantify the translocation of GLUT4 from the cytoplasm to the plasma membrane of cells by flow cytometry.

قياس الكمي GLUT4 إزفاء إلى غشاء البلازما التي التدفق الخلوي

Glucose is the main source of energy for the body, requiring constant regulation of its blood concentration. Insulin release by the pancreas induces ...

Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Membrane proteins perform critical functions in living cells related to signal transduction, transport and energy transformations, and, as such, are implicated in a multitude of malfunctions and diseases. However, a structural and functional understanding of membrane proteins is strongly lagging behind that of their soluble partners, mainly, due to difficulties associated with their solubilization and generation of diffraction quality crystals. Crystallization in lipidic mesophases (also known as in meso or LCP crystallization) is a promising technique which was successfully applied to obtain high resolution structures of microbial rhodopsins, photosynthetic proteins, outer membrane beta barrels and G protein-coupled receptors. In meso crystallization takes advantage of a native-like membrane environment and typically produces crystals with lower solvent content and better ordering as compared to traditional crystallization from detergent solutions. The method is not difficult, but requires an understanding of lipid phase behavior and practice in handling viscous mesophase materials. Here we demonstrate a simple and efficient way of making LCP and reconstituting a membrane protein in the lipid bilayer of LCP using a syringe mixer, followed by dispensing nanoliter portions of LCP into an assay or crystallization plate, conducting pre-crystallization assays and harvesting crystals from the LCP matrix. These protocols provide a basic guide for approaching in meso crystallization trials; however, as with any crystallization experiment, extensive screening and optimization are required, and a successful outcome is not necessarily guaranteed.

The protocols describe the essential steps for obtaining diffraction quality crystals of a membrane protein starting from reconstitution of the protein in a lipidic cubic phase (LCP), finding initial conditions with LCP-FRAP pre-crystallization assays, setting up LCP crystallization trials and harvesting crystals.

بلورة البروتينات في الغشاء Mesophases Lipidic

Membrane proteins perform critical functions in living cells related to signal transduction, transport and energy transformations, and, as such, are ...

Quantification of Proteins Using Peptide Immunoaffinity Enrichment Coupled with Mass Spectrometry

There is a great need for quantitative assays in measuring proteins. Traditional sandwich immunoassays, largely considered the gold standard in quantitation, are associated with a high cost, long lead time, and are fraught with drawbacks (e.g. heterophilic antibodies, autoantibody interference, 'hook-effect').1 An alternative technique is affinity enrichment of peptides coupled with quantitative mass spectrometry, commonly referred to as SISCAPA (Stable Isotope Standards and Capture by Anti-Peptide Antibodies).2 In this technique, affinity enrichment of peptides with stable isotope dilution and detection by selected/multiple reaction monitoring mass spectrometry (SRM/MRM-MS) provides quantitative measurement of peptides as surrogates for their respective proteins. SRM/MRM-MS is well established for accurate quantitation of small molecules 3, 4 and more recently has been adapted to measure the concentrations of proteins in plasma and cell lysates.5-7 To achieve quantitation of proteins, these larger molecules are digested to component peptides using an enzyme such as trypsin. One or more selected peptides whose sequence is unique to the target protein in that species (i.e. "proteotypic" peptides) are then enriched from the sample using anti-peptide antibodies and measured as quantitative stoichiometric surrogates for protein concentration in the sample. Hence, coupled to stable isotope dilution (SID) methods (i.e. a spiked-in stable isotope labeled peptide standard), SRM/MRM can be used to measure concentrations of proteotypic peptides as surrogates for quantification of proteins in complex biological matrices. The assays have several advantages compared to traditional immunoassays. The reagents are relatively less expensive to generate, the specificity for the analyte is excellent, the assays can be highly multiplexed, enrichment can be performed from neat plasma (no depletion required), and the technique is amenable to a wide array of proteins or modifications of interest.8-13 In this video we demonstrate the basic protocol as adapted to a magnetic bead platform.

Stable Isotope Standards and Capture by Anti-Peptide Antibodies (SISCAPA) couples affinity enrichment of peptides with stable isotope dilution mass spectrometry (MRM-MS) to provide quantitative measurement of peptides as surrogates for their respective proteins. Here we describe the protocol using magnetic particles in a partially automated format.

الكمي من البروتينات عن طريق التخصيب الببتيد Immunoaffinity اقترن الطيف الكتلي

There is a great need for quantitative assays in measuring proteins. Traditional sandwich immunoassays, largely considered the gold standard in ...

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing (MTT)

Our goal is to obtain a comprehensive description of molecular processes occurring at cellular membranes in different biological functions. We aim at characterizing the complex organization and dynamics of the plasma membrane at single-molecule level, by developing analytic tools dedicated to Single-Particle Tracking (SPT) at high density: Multiple-Target Tracing (MTT)1. Single-molecule videomicroscopy, offering millisecond and nanometric resolution1-11, allows a detailed representation of membrane organization12-14 by accurately mapping descriptors such as cell receptors localization, mobility, confinement or interactions.
We revisited SPT, both experimentally and algorithmically. Experimental aspects included optimizing setup and cell labeling, with a particular emphasis on reaching the highest possible labeling density, in order to provide a dynamic snapshot of molecular dynamics as it occurs within the membrane. Algorithmic issues concerned each step used for rebuilding trajectories: peaks detection, estimation and reconnection, addressed by specific tools from image analysis15,16. Implementing deflation after detection allows rescuing peaks initially hidden by neighboring, stronger peaks. Of note, improving detection directly impacts reconnection, by reducing gaps within trajectories. Performances have been evaluated using Monte-Carlo simulations for various labeling density and noise values, which typically represent the two major limitations for parallel measurements at high spatiotemporal resolution.
The nanometric accuracy17 obtained for single molecules, using either successive on/off photoswitching or non-linear optics, can deliver exhaustive observations. This is the basis of nanoscopy methods17 such as STORM18, PALM19,20, RESOLFT21 or STED22,23, which may often require imaging fixed samples. The central task is the detection and estimation of diffraction-limited peaks emanating from single-molecules. Hence, providing adequate assumptions such as handling a constant positional accuracy instead of Brownian motion, MTT is straightforwardly suited for nanoscopic analyses. Furthermore, MTT can fundamentally be used at any scale: not only for molecules, but also for cells or animals, for instance. Hence, MTT is a powerful tracking algorithm that finds applications at molecular and cellular scales.

Mapping Molecular Diffusion in the Plasma Membrane by Multiple-Target Tracing MTT

Multiple-Target Tracing is a homemade algorithm developed for tracking individually labeled molecules within the plasma membrane of living cells. Efficiently detecting, estimating and tracing molecules over time at high-density provide a user-friendly, comprehensive tool to investigate nanoscale membrane dynamics.

رسم خرائط الانتشار الجزيئي في غشاء البلازما من قبل متعددة الهدف، للبحث عن المفقودين (MTT)

Our goal is to obtain a comprehensive description of molecular processes occurring at cellular membranes in different biological functions. We aim at ...

Use of a Robot for High-throughput Crystallization of Membrane Proteins in Lipidic Mesophases

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through macromolecular X-ray crystallography (MX). An essential ingredient of MX is a steady supply of ideally diffraction-quality crystals. The in meso or lipidic cubic phase (LCP) method for crystallizing membrane proteins is one of several methods available for crystallizing membrane proteins. It makes use of a bicontinuous mesophase in which to grow crystals. As a method, it has had some spectacular successes of late and has attracted much attention with many research groups now interested in using it. One of the challenges associated with the method is that the hosting mesophase is extremely viscous and sticky, reminiscent of a thick toothpaste. Thus, dispensing it manually in a reproducible manner in small volumes into crystallization wells requires skill, patience and a steady hand. A protocol for doing just that was developed in the Membrane Structural &amp; Functional Biology (MS&amp;FB) Group1-3. JoVE video articles describing the method are available1,4. 
The manual approach for setting up in meso trials has distinct advantages with specialty applications, such as crystal optimization and derivatization. It does however suffer from being a low throughput method. Here, we demonstrate a protocol for performing in meso crystallization trials robotically. A robot offers the advantages of speed, accuracy, precision, miniaturization and being able to work continuously for extended periods under what could be regarded as hostile conditions such as in the dark, in a reducing atmosphere or at low or high temperatures. An in meso robot, when used properly, can greatly improve the productivity of membrane protein structure and function research by facilitating crystallization which is one of the slow steps in the overall structure determination pipeline. 
In this video article, we demonstrate the use of three commercially available robots that can dispense the viscous and sticky mesophase integral to in meso crystallogenesis. The first robot was developed in the MS&amp;FB Group5,6. The other two have recently become available and are included here for completeness.	
An overview of the protocol covered in this article is presented in Figure 1. All manipulations were performed at room temperature (~20 &deg;C) under ambient conditions.

Herein is described a robotic approach to high-throughput crystallization of membrane proteins in lipidic mesophases for use in structure determination using macromolecular X-ray crystallography. Three robots capable of handling the viscous and sticky protein-laden mesophase integral to the method are introduced.

استخدام روبوت لارتفاع الإنتاجية البلورة من بروتينات الغشاء في Mesophases شحمي

Structure-function studies of membrane proteins greatly benefit from having available high-resolution 3-D structures of the type provided through ...

The Cell-based L-Glutathione Protection Assays to Study Endocytosis and Recycling of Plasma Membrane Proteins

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes for degradation or to the plasma membrane for recycling. The cell based L-glutathione protection assays can be used to study endocytosis and recycling of protein receptors, channels, transporters, and adhesion molecules localized at the cell surface. The endocytic assay requires labeling of cell surface proteins with a cell membrane impermeable biotin containing a disulfide bond and the N-hydroxysuccinimide (NHS) ester at 4 &#186;C -&#160;a temperature at which membrane trafficking does not occur. Endocytosis of biotinylated plasma membrane proteins is induced by incubation at 37 &#186;C. Next, the temperature is decreased again to 4 &#186;C to stop endocytic trafficking and the disulfide bond in biotin covalently attached to proteins that have remained at the plasma membrane is reduced with L-glutathione. At this point, only proteins that were endocytosed remain protected from L-glutathione and thus remain biotinylated. After cell lysis, biotinylated proteins are isolated with streptavidin agarose, eluted from agarose, and the biotinylated protein of interest is detected by western blotting. During the recycling assay, after biotinylation cells are incubated at 37 &#176;C to load endocytic vesicles with biotinylated proteins and the disulfide bond in biotin covalently attached to proteins remaining at the plasma membrane is reduced with L-glutathione at 4 &#186;C as in the endocytic assay. Next, cells are incubated again at 37 &#176;C to allow biotinylated proteins from endocytic vesicles to recycle to the plasma membrane. Cells are then incubated at 4 &#186;C, and the disulfide bond in biotin attached to proteins that recycled to the plasma membranes is reduced with L-glutathione. The biotinylated proteins protected from L-glutathione are those that did not recycle to the plasma membrane.

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes for degradation or to the plasma membrane for recycling. Methods described in this article are designed to study endocytosis and recycling of plasma membrane proteins.

في دراسة لالإلتقام وإعادة غشاء البلازما من البروتينات القائم على خلية L-الجلوتاثيون حماية فحوصات

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes ...

Imaging Plasma Membrane Deformations With pTIRFM

To gain novel insights into the dynamics of exocytosis, our group focuses on the changes in lipid bilayer shape that must be precisely regulated during the fusion of vesicle and plasma membranes. These rapid and localized changes are achieved by dynamic interactions between lipids and specialized proteins that control membrane curvature. The absence of such interactions would not only have devastating consequences for vesicle fusion, but a host of other cellular functions that involve control of membrane shape. In recent years, the identity of a number of proteins with membrane-shaping properties has been determined. What remains missing is a roadmap of when, where, and how they act as fusion and content release progress.
Our understanding of the molecular events that enable membrane remodeling has historically been limited by a lack of analytical methods that are sensitive to membrane curvature or have the temporal resolution to track rapid changes. PTIRFM satisfies both of these criteria. We discuss how pTIRFM is implemented to visualize and interpret rapid, submicron changes in the orientation of chromaffin cell membranes during dense core vesicle (DCV) fusion. The chromaffin cells we use are isolated from bovine adrenal glands. The membrane is stained with a lipophilic carbocyanine dye,1,1&#39;-dioctadecyl-3,3,3&#39;,3&#39;-tetramethylindodicarbocyanine, 4-chlorobenzenesulfonate, or&#160;diD. DiD intercalates in the membrane plane with a &#34;fixed&#34; orientation and is therefore sensitive to the polarization of the evanescent field. The diD-stained cell membrane is sequentially excited with orthogonal polarizations of a 561&#160;nm laser (p-pol, s-pol). A 488&#160;nm laser is used to visualize vesicle constituents and time the moment of fusion. Exocytosis is triggered by locally perfusing cells with a depolarizing KCl solution. Analysis is performed offline using custom-written software to understand how diD emission intensity changes relate to fusion pore dilation.

Polarization-based Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (pTIRFM) enables real-time detection of cell membrane dynamics. This article describes the implementation of pTIRFM for the study of membrane remodeling during regulated exocytosis. The technique is generalizable to other processes in cell biology that directly or indirectly involve changes in membrane shape.

التصوير البلازما غشاء التشويهات مع pTIRFM

To gain novel insights into the dynamics of exocytosis, our group focuses on the changes in lipid bilayer shape that must be precisely regulated during ...

Using Digital Image Correlation to Characterize Local Strains on Vascular Tissue Specimens

Characterization of the mechanical behavior of biological and engineered soft tissues is a central component of fundamental biomedical research and product development. Stress-strain relationships are typically obtained from mechanical testing data to enable comparative assessment among samples and in some cases identification of constitutive mechanical properties. However, errors may be introduced through the use of average strain measures, as significant heterogeneity in the strain field may result from geometrical non-uniformity of the sample and stress concentrations induced by mounting/gripping of soft tissues within the test system. When strain field heterogeneity is significant, accurate assessment of the sample mechanical response requires measurement of local strains. This study demonstrates a novel biomechanical testing protocol for calculating local surface strains using a mechanical testing device coupled with a high resolution camera and a digital image correlation technique. A series of sample surface images are acquired and then analyzed to quantify the local surface strain of a vascular tissue specimen subjected to ramped uniaxial loading. This approach can improve accuracy in experimental vascular biomechanics and has potential for broader use among other native soft tissues, engineered soft tissues, and soft hydrogel/polymeric materials. In the video, we demonstrate how to set up the system components and perform a complete experiment on native vascular tissue.

We describe the use of digital image correlation to characterize the local surface strain field on vascular tissue samples subjected to uniaxial tensile testing. These measurements facilitate precise quantification of the sample mechanical response and the generation of constitutive stress-strain relations.

باستخدام ارتباط صورة رقمية لوصف سلالات المحلية على الأوعية الدموية عينات الأنسجة

Characterization of the mechanical behavior of biological and engineered soft tissues is a central component of fundamental biomedical research and ...