Name: culturing human pluripotent and neural stem cells in an enclosed cell culture system for basic and preclinical research
Uploaded: 2016-06-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research at JoVE.com

فإن الكتاب أن نعترف الموظفين في Biospherix لمساعدتهم في تعلم استخدام نظام زراعة الخلايا Xvivo المغلقة، خصوصا مات فريمان. موظفي الشركة مايلز آند كيلي البناء، وشركة لعملهم في إنشاء البنية الأساسية للمختبرات، وخاصة روس هيوز. موظفو مستشفى الأطفال في دائرة مقاطعة أورانج من المرافق والخدمات المساندة لعملهم في تنسيق إعادة تشكيلها مختبر، خصوصا آدم Lukhard وديفين Hugie. موظفو مستشفى الأطفال في دائرة مقاطعة أورانج نظم المعلومات لمساعدتهم في إنشاء البنية التحتية لإدارة البيانات والوصول عن بعد، وخاصة تران نام؛ مستشفى الأطفال في مقاطعة أورانج فريق الإدارة التنفيذية للحصول على دعم طويل الأمد على المشروع، وخاصة الدكتورة ماريا Minon وبرنت Dethlefs. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مستشفى الأطفال في مقاطعة أورانج، ومعهد كاليفورنيا للالتجدد الطبه من خلال TR3-05476 منحة لخدمات الصحة العمومية. وساهمت جميع المؤلفين بالتساوي على هذا العمل.

<ol>
	<li>Brick, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Autism+Spectrum+Disorders+Stem+Cell+Resource+at+Children's+Hospital+of+Orange+County:+Implications+for+Disease+Modeling+and+Drug+Discovery.">The Autism Spectrum Disorders Stem Cell Resource at Children's Hospital of Orange County: Implications for Disease Modeling and Drug Discovery.</a> Stem Cells Transl.Med. 3 (11), 1275-1286 (2014).</li><li>Nethercott, H. E., Brick, D. J., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+induced+pluripotent+stem+cells+by+lentiviral+transduction.">Derivation of induced pluripotent stem cells by lentiviral transduction.</a> Methods Mol.Biol. 767, 67-85 (2011).</li><li>Pistollato, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+and+HIF1alpha+repress+the+differentiative+effects+of+BMPs+in+high-grade+glioma.">Hypoxia and HIF1alpha repress the differentiative effects of BMPs in high-grade glioma.</a> Stem Cells. 27 (1), 7-17 (2009).</li><li>Pistollato, F., Chen, H. L., Schwartz, P. H., Basso, G., Panchision, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+tension+controls+the+expansion+of+human+CNS+precursors+and+the+generation+of+astrocytes+and+oligodendrocytes.">Oxygen tension controls the expansion of human CNS precursors and the generation of astrocytes and oligodendrocytes.</a> Mol.Cell Neurosci. 35, 424-435 (2007).</li><li>Raval, J. S., Koch, E., Donnenberg, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+monitoring+of+non-viable+airborne+particles+correlates+with+airborne+colonies+and+represents+an+acceptable+surrogate+for+daily+assessment+of+cell-processing+cleanroom+performance.">Real-time monitoring of non-viable airborne particles correlates with airborne colonies and represents an acceptable surrogate for daily assessment of cell-processing cleanroom performance.</a> Cytotherapy. 14 (9), 1144-1150 (2012).</li><li>Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+stem+cell+therapies+for+neurological+diseases.">The potential of stem cell therapies for neurological diseases.</a> Expert.Rev.Neurother. 6, 153-161 (2006).</li><li>Schwartz, P. H., Brick, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapies+for+the+lysosomal+storage+diseases+-+the+quintessential+neurodegenerative+diseases.">Stem cell therapies for the lysosomal storage diseases - the quintessential neurodegenerative diseases.</a> Curr.Stem Cell Res.Ther. 3 (2), 88-98 (2008).</li><li>Schwartz, P. H., Brick, D. J., Nethercott, H. E., Stover, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+human+embryonic+stem+cell+culture.">Traditional human embryonic stem cell culture.</a> Methods Mol.Biol. 767, 107-123 (2011).</li><li>Stover, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process-based+expansion+and+neural+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+for+transplantation+and+disease+modeling.">Process-based expansion and neural differentiation of human pluripotent stem cells for transplantation and disease modeling.</a> J Neurosci.Res. 91 (10), 1247-1262 (2013).</li><li>Stover, A. E., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+feeder-free+conditions+in+chemically+defined+medium+with+enzymatic+single-cell+passaging.">Adaptation of human pluripotent stem cells to feeder-free conditions in chemically defined medium with enzymatic single-cell passaging.</a> Methods Mol.Biol. 767, 137-146 (2011).</li><li>Yoshida, Y., Takahashi, K., Okita, K., Ichisaka, T., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+enhances+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Hypoxia enhances the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 5 (3), 237-241 (2009).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

الخلايا المزروعة داخل CPF ترى أي تغييرات في الأكسجين أو ثاني أكسيد الكربون تركيزات لأنها تتحرك من الحاضنة لتجهيز غرفة إلى غرفة المجهر والظهر. ومن الأهمية بمكان أن الظروف في كل غرفة تتم مطابقة إلى الحاضنة الخاصة التي يتم الاحتفاظ الخلايا قبل أن يتم إزالة الخلايا من الحاضنة. الجو داخل الجهاز بشكل مستمر HEPA تصفية وتخصيص فيما يتعلق تركيزات الأكسجين وثاني أكسيد الكربون. يمكن زراعتها الخلايا بتركيزات موحدة لشركات الأمن الخاصة أو NSCs، 5٪ و 9٪ على التوالي. أو تركيزات بديلة يمكن اختيار لأنواع مختلفة من الخلايا أو لتجارب محددة. وبالتالي، يتم تزويد الجهاز مع مصادر ثابتة من الأكسجين الصف الطبية، وثاني أكسيد الكربون، والنيتروجين (الشكل 4). يتم تزويد كل ثلاثة من هذه الغازات من خلال أنظمة متعددة الغاز محدد ضمان امدادات ثابتة. ويتم تزويد الجهاز أيضا مع خليط الغاز المعايرة تتكون من10٪ (± 0.01٪) غاز ثاني أكسيد الكربون في الأكسجين. ويضم أنظمة متعددة خارج منشأة لانتاج الخلية ويتم إيصالها الغازات في منشأة من خلال السقف. وتقع الغاز المعايرة داخل المنشأة. يتم تزويد الجهاز بالإضافة إلى ذلك مع فراغ المنزل، وأيضا من خلال السقف. باستخدام نظام المراقبة الإلكترونية واللاسلكية وحدة الإرسال، يتم مراقبة باستمرار الضغوط إخراج جميع الفتحات. في حال أن يقع أي ضغط خارج النطاق، واتصل هاتفيا مشغلي منشأة لانتاج الخلايا تلقائيا وأخطرت هذه أن التدابير الملائمة يمكن أن تؤخذ. تلبية متطلبات الطاقة للجهاز لمدة ستة مخصصة 120 V الدوائر تنازلي من السقف وتوصيل مولدات احتياطية في المستشفى لضمان امدادات ثابتة. يتم التحكم في تشغيل الجهاز عن طريق برنامج على جهاز كمبيوتر يعمل بنظام الكمبيوتر بالطاقة من خلال توفير إمدادات الطاقة غير المنقطعة. هذه الترتيبات الكهرباء والكمبيوترتأكد من أن وظائف النظام بشكل مستمر حتى في حالة حدوث فشل نظام السلطة العامة. برنامج السيطرة على جهاز يحتوي على واجهة رسومية سهلة الاستخدام (الشكل 1)، التي تتيح للتحكم في تركيز الأكسجين وثاني أكسيد الكربون وكذلك الضغوط درجة الحرارة، والرطوبة، والغرفة. وسجلت قيم كل هذه المعايير بشكل مستمر لتوفير سجل تشغيل جميع المعلمات الجهاز. ويدعم هذه البيانات حتى على خادم بعيد كل ليلة لحماية سلامتها. يمكن الوصول إلى جهاز الكمبيوتر والبرامج عن بعد من قبل المستخدمين الإدارية لتقييم و / أو تغيير أي معلمة. بالإضافة إلى ذلك، الكمبيوتر والبرمجيات ويمكن الوصول عن بعد، مما يتيح تقييم تفاعلية من المعلمات أجهزة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها مع المستخدمين المحليين. يتم توصيل وحدة وإرسال إنذار إضافية للجهاز بحيث يتم إخطار مشغلي منشأة لانتاج الخلية من أي حالة خارج نطاق الجهاز. الوصول عن بعد جapabilities سماح تسجيل الدخول وتقييم خصوصيات حالة خارج النطاق. تم تصميم الجهاز كنظام وحدات في كل من ماكرو والشعور الجزئي. وحدات زراعة الخلايا الفردية، مثل الحاضنات وغرف المعالجة، يمكن تخصيص فيما يتعلق أبعاد ومتطلباتها وكذلك في التخطيط مع الاحترام لبعضهما البعض. بالإضافة إلى ذلك، فإن معظم وظائف السيطرة على وحدات فردية هي في حد ذاتها وحدات مثل التي تحكم الغاز في الغلاف الجوي الفردية، على سبيل المثال، يمكن الاستعاضة عنها بسهولة دون اضطراب كبير في النظام. غرف المعالجة المتخصصة، مثل واحد لرؤية المجهري والتلاعب في مزارع الخلايا، يتم تكييفها بسهولة إلى النظام. كلا على النقيض من المرحلة ومضان المجهر هي داخل النظام (الشكل 6) بحيث الخلايا يمكن أن تكون ملطخة على الهواء مباشرة، والمستعمرات يمكن تشريح في الظروف الجوية نفسها كما في الداخل رانه الحاضنات. التوجيه من الكابلات من خلال الحلقات أغلقت في الجدران الجانبية من غرفة معالجة يسمح المعدات مثل امدادات الكهرباء وأجهزة الكمبيوتر أن تبقى خارج الجهاز، وعادة على عربة (الشكل 6). غرف المعالجة في منشأة لانتاج الخلايا لديها نمط تدفق الهواء مختلفة من BSCs التقليدية. في BSCs التقليدية، يتدفق تدفق الهواء إلى أسفل من فتحة العادم المركزي وانشقاقات في مسارين منفصلين، والتي يتم تناولها من قبل اثنين من فتحات كمية مختلفة في الجزء الأمام والخلف من الطابق مجلس الوزراء. على النقيض من ذلك، فإن CPF ديه تنفيس واحدة في الجزء الأمامي من السقف. تدفق الهواء إلى الأسفل ونحو الجزء الخلفي من الغرفة، حيث ثم فإنه يتم رسمها صعودا إلى تنفيس المدخول. على الرغم من أن هذه الشراكة هي بطبيعتها نظيفة جدا، وهذا نمط تدفق الهواء فريد من نوعه يعني أن الفنيين لديها لضبط قليلا تقنيتهم ​​للحد من مخاطر التلوث. كما هو الحال مع ش.م.ب التقليدية، مختبر عامل الصورةhould معها تجنب وضع أيديهم المنبع لوحات ثقافة الخلية المفتوحة وزجاجات وسائل الإعلام. ومع ذلك، تم تغيير الاتجاه الذي هو المنبع في CPF مرفق إنتاج خلايا المختبر نفسه هو المعيار إلى حد ما، وتأتي مجهزة الثلاجة -20 درجة مئوية، والمجمد -80 درجة مئوية، 4 ° C ثلاجة، جهاز للطرد المركزي، وحمام الماء. ويضم المختبر أيضا بالوعة مع الضوابط القدم للتشغيل حر اليدين مريحة. من أجل هذا المختبر لتصبح السريري منشأة لانتاج خلايا وظيفية، ومع ذلك، لا يزال يتعين إجراء عدة تعديلات إضافية. أولا، الجهاز نفسه يجب أن تتم ترقية لديك القدرة على رصد المركبات العضوية المتطايرة، والجسيمات، وتركيزات ثاني أكسيد الكلور الذي يستخدم لإزالة التلوث. ثانيا، وغرفة معالجة تحتوي على آلة نظام مراقبة الأصول الميدانية قد يكون مقر وتوصيلها إلى بقية الجهاز عن طريق وحدة العازلة. وهذا سوف يسمح لفرز الخلايا وتنقية آرالسكان الخلية ansplantable تحت الظروف البيئية المناسبة. وأخيرا، يجب أن يضم الجهاز بأكمله داخل غرفة نظيفة الجدار لينة. وهذا يوفر المنظمة الدولية للتوحيد القياسي فئة (ISO) 8 البيئة للجهاز 5. عقم عالية وطبيعة الكمبيوتر التي تسيطر عليها من CPF يجعل من نظام مثالي للتطبيقات المستقبلية مع العلاج القائم على الخلايا والعمليات التصنيعية الجيدة. والتخفيف من مخاطر التلوث إلى حد كبير، ولكن الأهم من ذلك أن شروط توسيع الخلية يتم تسجيلها تلقائيا، وتحفظ من قبل نظام الكمبيوتر. موثقة الانحرافات في تركيزات غازات، ودرجة الحرارة، والرطوبة، وجميع الأحداث من الوصول إلى نظام صارم. هذا يمكن أن يساعد كثيرا عند التحقيق في مشاكل جودة المنتج. ومع ذلك، لا تزال هناك قيود. استخدام أي وجميع الكواشف واللوازم (على سبيل المثال، مكونات وسائل الإعلام، الماصات، لوحات) يجب أن تكون موثقة بشكل منفصل. إضافةitionally، هناك العديد من المشاكل المحتملة (بما في ذلك العديد من أشكال الخطأ البشري) التي يمكن أن تنشأ والتي لا علاقة لها تماما لمتغيرات موثقة من قبل نظام مراقبة هذه الشراكة ل. وهكذا، فإن الحاجة إلى الموظفين المدربين تدريبا عاليا وثائق اليدوية مفصلة من المهام لا يزال في مكانه.

Standard stem cell culture techniques suffer from several environmental constraints that place undue stresses on the cells and expose the cells to unacceptable risks of contamination. Among the stresses that cells may endure under standard cell culture conditions are precipitous changes in the levels of carbon dioxide and oxygen concentrations3,4. This occurs when the cells are moved from the incubator to the biosafety cabinet and/or microscope which may not be optimal for the cells. Previous studies have confirmed the advantages of culturing both pluripotent and neural stem cells in hypoxic conditions4,11, and for best results, these conditions need to be continuous. Moreover, risks of cellular contamination are higher as the laboratory environment and personnel impinge upon the cells at almost every step of their culture and manipulation. Traditional clean rooms comprise one effective method to greatly decrease contamination risks but they are expensive, have a large footprint and fail to address stressors related to carbon dioxide and oxygen concentrations. 
A cell production facility that can address both contamination risks and gas concentrations and that can be qualified to meet cGMP criteria9 provides high quality cells for basic science research as well as clinical applications1,6,7. Such a cell production facility consists, at a minimum, of the following components: a process chamber, which acts as a heated workspace for the feeding and manipulation of cell cultures; a laminar flow hood, for the initial sterilization of reagents, tubes, and tools; two buffering airlock chambers in between the hood and the process chamber; two cell culture incubators accessible from the process chamber; a microscope chamber adjacent to the process chamber; and finally, computer software to set and monitor the conditions within these modules. Using this basic infrastructure, a wide variety of tasks can be performed, such as standard feeding and passaging of pluripotent stem cells and multipotent neural stem cells, as well as more specialized methods like Sendai virus-based reprogramming, in vitro migration studies, and differentiation of neural stem cells for electrophysiological characterization.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;i&gt;Xvivo System&lt;/i&gt;</td><td>Biospherix</td><td>custom made</td><td></td></tr><tr><td>&lt;i&gt;Xvivo&lt;/i&gt; Software</td><td>Biospherix</td><td>version i.o.2.1.2.1</td><td></td></tr><tr><td>O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Manifold</td><td>Amico</td><td>P-M2H-C3-S-U-OXY</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Manifold</td><td>Amico</td><td>M2H-C3-D-U-CO2</td><td></td></tr><tr><td>N&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Manifold</td><td>Western Innovator</td><td>CTM75-7-2-2-BM</td><td></td></tr><tr><td>Microscope with DP21 camera and fluorescence</td><td>Olympus Corporation</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 Glutamax</td><td>Life Technologies</td><td>10565-018</td><td></td></tr><tr><td>StemPro hESC Supplement</td><td>Life Technologies</td><td>A100006-01</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Millipore</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Sodium</td><td>Hyclone</td><td>9236</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblast Growth Factor 2</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>AFL233</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Protide</td><td>PP1130</td><td></td></tr><tr><td>Hank&#039;s-based Cell dissociation Buffer</td><td>Life Technologies</td><td>13150-016</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Life Technologies</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Epidermal Growth Factor</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>AFL236</td><td></td></tr><tr><td>Oct-3/4 Antibody</td><td>Millipore</td><td>AB3209</td><td></td></tr><tr><td>TRA-1-60 Antibody</td><td>Millipore</td><td>MAB4260</td><td></td></tr><tr><td>SSEA4 Antibody</td><td>Millipore</td><td>MAB4304</td><td></td></tr><tr><td>BIT-9500 Serum Supplement</td><td>Stemcell Technologies</td><td>9500</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Consumable Supplies&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 ml Serological pipet</td><td>VWR</td><td>89130-894</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Serological pipet</td><td>Olympus Plastics</td><td>12-102</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Serological pipet</td><td>Olympus Plastics</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Serological pipet</td><td>Olympus Plastics</td><td>12-106</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Serological pipet</td><td>Olympus Plastics</td><td>12-107</td><td></td></tr><tr><td>6-well plate</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Corning</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>T25 flask</td><td>TPP</td><td>90026</td><td></td></tr><tr><td>T-75 flask</td><td>TPP</td><td>90076</td><td></td></tr><tr><td>20 &amp;micro;l pipet tips</td><td>Eppendorf</td><td>22491130</td><td></td></tr><tr><td>200 &amp;micro;l pipet tips</td><td>Eppendorf</td><td>22491148</td><td></td></tr><tr><td>1,000 pipet tips</td><td>Eppendorf</td><td>22491156</td><td></td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Thermo Scientific</td><td>5000.102</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>BDH</td><td>BDH1164-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Sanimaster 4</td><td>Ecolab</td><td>65332960</td><td></td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Clorox</td><td>A714239</td><td></td></tr></tbody></table>

culturing human pluripotent and neural stem cells in an enclosed cell culture system for basic and preclinical research

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety cabinets (BSCs) and incubators have long been the standard for culturing and expanding cell lines for basic and preclinical research. However, as the focus of many stem cell laboratories shifts from basic research to clinical translation, additional requirements are needed of the cell culturing system. All processes must be well documented and have exceptional requirements for sterility and reproducibility. In traditional incubators, gas concentrations and temperatures widely fluctuate anytime the cells are removed for feeding, passaging, or other manipulations. Such interruptions contribute to an environment that is not the standard for cGMP and GLP guidelines. These interruptions must be minimized especially when cells are utilized for therapeutic purposes. The motivation to move from the standard BSC and incubator system to a closed system is that such interruptions can be made negligible. Closed systems provide a work space to feed and manipulate cell cultures and maintain them in a controlled environment where temperature and gas concentrations are consistent. This way, pluripotent and multipotent stem cells can be maintained at optimum health from the moment of their derivation all the way to their eventual use in therapy.

توضح هذه المخطوطة في بعض التفاصيل منشأة لانتاج الخلية، والجوانب الفريدة لزراعة الخلايا داخل نظام مغلق. الجزء الأكبر من منشأة لانتاج الخلية يتكون جهاز حسب الطلب، المغلقة، ثقافة الخليوي الذي لديه بصمة صغيرة، ويمكن أن يضم بسهولة ضمن 6 × 7.5 م 2 غرفة (الشكل 2). في أي وقت من الأوقات هي الخلايا داخل جهاز تتعرض لموظفي المختبر أو البيئة. يتكون الجهاز من عدة وحدات: غرفة العملية، غطاء تدفق الصفحي، 2 غرف التخزين المؤقت غرفة معادلة الضغط في فترة ما بين غطاء المحرك وغرفة العملية، وهما حاضنات ثقافة الخلية، وغرفة المجهر المجاورة لغرفة العمليات (الشكل 3). يتم التحكم في النظام عن طريق برنامج يسمح المتغيرات البيئية أن يكون للرقابة ومراقبة (الشكل 1). الكمبيوتر تشغيل هذا البرنامج على توفير إمدادات الطاقة غير المنقطعة. ويتم تغذية الغازات في النظام البريد من قبل مجموعة من الفتحات للالأوكسجين والنيتروجين وثاني أكسيد الكربون (الشكل 4). يتم تزويد الغازات للجهاز من قبل أنظمة المتعددة التي لديها مجموعتين من الدبابات كل - مجموعة نشطة ومجموعة الاحتياطي. عندما يتم رسمها مجموعة نشطة أسفل، مشعب مفاتيح تلقائيا إلى وضع الاحتياط والموظفين الدبابات طلب الاستبدال. انقطاع التيار الكهربائي في نظام مولد كهربائي احتياطي. المحفزة والخلايا الجذعية العصبية يمكن زراعتها في ظروف نقص الأوكسجين في هذا المرفق باستخدام بروتوكولات التي سبق وضعها 9، مع مضاعفات وأضاف الملازمة لمعدات الرواية. يمكن استخلاص الخلايا الجذعية المحفزة باستخدام فيروس سينداي، وذلك باستخدام الأجسام المضادة تعدد القدرات المحددة لتحديد المستعمرات transfected بالكامل، وبعد ذلك يتم عزل وتوسيع نطاقها. (الشكل 5A وباء)، من هذه iPSCs، والخلايا الجذعية العصبية والخلايا العصبية يمكن استخلاصها باستخدام مزدوج تثبيط حدثت لوملامحهم التحقق باليود<html> نانوغرام الأجسام المضادة NSC-محددة (الشكل 5C وD). <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/53685/53685fig1.jpg" /> الشكل 1. واجهة رسومية لمرفق إنتاج الخلية. (أ) تمثيل رسومي للCPF هي الشاشة الافتراضية ويطابق CAD الرسم هو مبين في الشكل (3). وبنقرة من الفأرة على وحدة العازلة 1 (2F في الشكل 1) يفتح شاشة سيطرتها (B) حيث يتم تعيين O 2 القيم لتتناسب مع غرفة المعالجة (3 في الشكل 3). وبالمثل، والنقر على عملية غرفة أو حاضنة 1 إحضار شاشات مراقبة كل منها (C و D، على التوالي)، حيث يمكن تغيير القيم أو مراقبتها حسب الاقتضاء.<html> r يمكنك الحصول = &quot;_ فارغة&quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/53685/53685fig2.jpg" /> الشكل 2. مرفق إنتاج الخلية. (A) نظام كما يرى من وجهة نظر الأمامي الأيمن. لاحظ صلات الكهرباء والغاز في السقف وعربة مع الملحقات المجهر والكمبيوتر إلى اليمين. (ب) تدفق غطاء محرك السيارة الصفحي مع أبواب الوصول إلى وحدات عازلة ينظر في الحق. (C) وغرفة العملية مع اثنين من الحاضنات (الأبواب السوداء) ينظر في العمق. (D) وجهة نظر من خلال الجانب الأيمن من نظام تبين المجهر ومراقبة مع الأبواب إلى غرف عازلة ينظر في المسافة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53685/53685fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> ر &quot;FO: المحافظة على together.within الصفحات =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53685/53685fig3.jpg" /> الشكل 3. رسم CAD مرفق إنتاج الخلية. يتم محو جميع العناصر التي تدخل الجهاز أولا إلى أسفل مع الكحول والهواء المجفف في غطاء تدفق الصفحي (1). ثم انتقلت المواد في الغلاف الجوي المناسب في وحدة عازلة الأمامية (2F) قبل أن تنتقل إلى وحدة UCPC، أو عملية الغرفة (3). الخلايا المستزرعة في اثنين من الحاضنات (4، 5). تلطيخ الخلية الحية، مستعمرة قطف، وتقييم التشكل الخلوي العام وتحليل الهجرة تجري في وحدة اتحاد الوطنيين الكونغوليين، أو غرفة مجهر (6). وأخيرا، والنفايات يخرج النظام من خلال وحدة عازلة الخلفي (2R). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53685/53685fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> &lt;<html> / P&gt; <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/53685/53685fig4.jpg" /> الشكل 4. مصادر الغازات والطاقة. (A) ومشعب CO 2 هو الإعداد 4 × 4، حيث أنها تورد جميع حاضنات للمختبر. (ب) المتعددة O 2 هو الإعداد واللوازم فقط منشأة لانتاج الخلايا 2 × 2. يتم إنشاء النيتروجين للنظام في المرذاذ (C، أقل بقليل من علامة خروج) تعلق على مشعب النيتروجين السائل (إلى اليمين) التي أيضا يملأ تلقائيا cryofreezers (أسفل اليسار). مشعب هو الإعداد 2 × 2 يتم توريدها من قبل اثنين من أزواج من 160 L الدبابات النيتروجين السائل. يتم تزويد CO 2، O 2، وN 2 من السقف من خلال shutoffs (D). يتم توفير فراغ المنزل أيضا في هذا الموقع. رأيت للتو وراء shutoffs إمدادات الغاز هي زوج من الكابلات الكهربائية التي توفر الطاقة للنظام.و = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/53685/53685fig4large.jpg&quot; الهدف = &quot;_ فارغة&quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/53685/53685fig5.jpg" /> الرقم 5. متعددة القدرات الخلايا الجذعية المشتقة في نقص الأكسجة مع فيروس سينداي. (A) SC187-SF4-2I0-E3 iPSCs iPSCs (التسميات الموجودة في ستوفر وآخرون. 9)، النقيض من المرحلة 10X. (ب) SC88.1-UH1-2I0 iPSCs الملون يعيش مع-594 المسمى AF ترا-1-60، 1: 100 التخفيف في وسائل الإعلام. تم transduced كل iPSCs في منشأة لانتاج خلية في 5٪ O 2 مع فيروس سينداي. (C) على النقيض المرحلة من NSCs-UH0-2I0-M0S13-N2G6 SC68.1 IPSC المشتقة، ونمت بنسبة 5٪ O 2 في الشرائح غرفة. ثم تم إصلاح الخلايا في 4٪ امتصاص العرق وملطخة الأجسام المضادة الأولية Nestin مكافحة الإنسان، وأليكس-488 الضد الثانوية. جميع الحانات على نطاق وفي 1001؛ م <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53685/53685fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research at JoVE.com

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Here is a protocol to grow pluripotent stem cells (PSC) and neural stem cells (NSC) in an enclosed cell culture system that permits maximum sterility and reproducibility, replacing the traditional biosafety cabinet and incubator. This equipment meets clinical good manufacturing practice (cGMP) and clinical good lab practice (cGLP) guidelines.

زراعة متعددة القدرات البشرية والعصبية الخلايا الجذعية في نظام زراعة الخلايا المغلقة للبحوث الأساسية وقبل السريرية

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

culturing-human-pluripotent-neural-stem-cells-an-enclosed-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

10.2K Views.  Childrens Hospital of Orange County Research Institute. Here is a protocol to grow pluripotent stem cells (PSC) and neural stem cells (NSC) in an enclosed cell culture system that permits maximum sterility and reproducibility, replacing the traditional biosafety cabinet and incubator. This equipment meets clinical good manufacturing practice (cGMP) and clinical good lab practice (cGLP) guidelines.

Video: Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

A Novel Culture Model for Human Pluripotent Stem Cell Propagation on Gelatin in Placenta-conditioned Media

The propagation of human pluripotent stem cells (hPSCs) in conditioned medium derived from human cells in feeder-free culture conditions has been of interest. Nevertheless, an ideal humanized ex vivo feeder-free propagation method for hPSCs has not been developed; currently, additional exogenous substrates including basic fibroblast growth factor (bFGF), a master hPSC-sustaining factor, is added to all of culture media and synthetic substrata such as Matrigel or laminin are used in all feeder-free cultures. Recently, our group developed a simple and efficient protocol for the propagation of hPSCs using only conditioned media derived from the human placenta on a gelatin-coated dish without additional exogenous supplementation or synthetic substrata specific to hPSCs. This protocol has not been reported previously and might enable researchers to propagate hPSCs efficiently in humanized culture conditions. Additionally, this model obviates hPSC contamination risks by animal products such as viruses or unknown proteins. Furthermore, this system facilitates easy mass production of hPSCs using the gelatin coating, which is simple to handle, dramatically decreases the overall costs of ex vivo hPSC maintenance.

This protocol provides a simple and efficient way to propagate human pluripotent stem cells (hPSCs) using only conditioned media derived from the human placenta in a gelatin-coated dish without additional exogenous supplementation or hPSC-specific synthetic substrata.

ثقافة نموذج رواية لالمحفزة الإنسان الجذعية نشر خلية على الجيلاتين في وسائل الإعلام مكيفة المشيمة-

The propagation of human pluripotent stem cells (hPSCs) in conditioned medium derived from human cells in feeder-free culture conditions has been of ...

Passaging Human Neural Stem Cells

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for therapeutic purposes as well as to explore many fundamental processes of human neural development and pathology.  This protocol presents a simple method of culturing and passaging hNSPCs in hopes of standardizing this technique and increasing reproducibility of human stem cell research.  The hNSPCs we use were isolated from cadaveric postnatal brain cortices by the National Human Neural Stem Cell Resource and grown as adherent cultures on flasks coated with fibronectin (Palmer et al., 2001; Schwartz et al., 2003).  We culture our hNSPCs in a DMEM:F12 serum-free media supplemented with EGF, FGF, and PDGF and passage them 1:2 approximately every seven days.  Using these conditions, the majority of the cells in the culture maintain a bipolar morphology and express markers of undifferentiated neural stem cells (such as nestin and sox2).

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro allows to investigate their utility as cell transplants for therapeutic purposes and to explore human neural development. This protocol presents a method of culturing and passaging hNSPCs in hopes of increasing reproducibility of human stem cell research.

الركض الخلايا الجذعية العصبية البشرية

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Biology

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ultimately give rise to intermediate progenitors and later, the various neuronal and glial cell subtypes that form the cerebral cortex. The capacity to generate and expand human NSCs (so called neurospheres) from discarded normal fetal tissue provides a means with which to directly study the functional aspects of normal human NSC development 1-5. This approach can also be directed toward the generation of NSCs from known neurological disorders, thereby affording the opportunity to identify disease processes that alter progenitor proliferation, migration and differentiation 6-9. We have focused on identifying pathological mechanisms in human Down syndrome NSCs that might contribute to the accelerated Alzheimer's disease phenotype 10,11. Neither in vivo nor in vitro mouse models can replicate the identical repertoire of genes located on human chromosome 21. 
Here we use a simple and reliable method to isolate Down syndrome NSCs from aborted human fetal cortices and grow them in culture. The methodology provides specific aspects of harvesting the tissue, dissection with limited anatomical landmarks, cell sorting, plating and passaging of human NSCs. We also provide some basic protocols for inducing differentiation of human NSCs into more selective cell subtypes.

A simple and reliable method on isolation and culture of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue is described. Cultures derived from known human neurological disorders can be used for characterization of pathological cellular and molecular processes, as well as provide a platform to assess pharmacological efficacy.

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Neuroscience

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system (CNS) structure and circuitry in today's healthcare industry. Cell-based therapies hold great promise to restore the lost nerve tissue and function for CNS disorders. However, cell therapies based on CNS-derived neural stem cells have encountered supply restriction and difficulty to use in the clinical setting due to their limited expansion ability in culture and failing plasticity after extensive passaging1-3. Despite some beneficial outcomes, the CNS-derived human neural stem cells (hNSCs) appear to exert their therapeutic effects primarily by their non-neuronal progenies through producing trophic and neuroprotective molecules to rescue the endogenous cells1-3. Alternatively, pluripotent human embryonic stem cells (hESCs) proffer cures for a wide range of neurological disorders by supplying the diversity of human neuronal cell types in the developing CNS for regeneration1,4-7. However, how to channel the wide differentiation potential of pluripotent hESCs efficiently and predictably to a desired phenotype has been a major challenge for both developmental study and clinical translation. Conventional approaches rely on multi-lineage inclination of pluripotent cells through spontaneous germ layer differentiation, resulting in inefficient and uncontrollable lineage-commitment that is often followed by phenotypic heterogeneity and instability, hence, a high risk of tumorigenicity7-10. In addition, undefined foreign/animal biological supplements and/or feeders that have typically been used for the isolation, expansion, and differentiation of hESCs may make direct use of such cell-specialized grafts in patients problematic11-13. To overcome these obstacles, we have resolved the elements of a defined culture system necessary and sufficient for sustaining the epiblast pluripotence of hESCs, serving as a platform for de novo derivation of clinically-suitable hESCs and effectively directing such hESCs uniformly towards clinically-relevant lineages by small molecules14 (please see a schematic in Fig. 1). Retinoic acid (RA) does not induce neuronal differentiation of undifferentiated hESCs maintained on feeders1, 14. And unlike mouse ESCs, treating hESC-differentiated embryoid bodies (EBs) only slightly increases the low yield of neurons1, 14, 15. However, after screening a variety of small molecules and growth factors, we found that such defined conditions rendered retinoic acid (RA) sufficient to induce the specification of neuroectoderm direct from pluripotent hESCs that further progressed to neuroblasts that generated human neuronal progenitors and neurons in the developing CNS with high efficiency (Fig. 2). We defined conditions for induction of neuroblasts direct from pluripotent hESCs without an intervening multi-lineage embryoid body stage, enabling well-controlled efficient derivation of a large supply of human neuronal cells across the spectrum of developmental stages for cell-based therapeutics.

We have established a protocol for induction of neuroblasts direct from pluripotent human embryonic stem cells maintained under defined conditions with small molecules, which enables derivation of a large supply of human neuronal progenitors and neuronal cell types in the developing CNS for neural repair.

كفاءة اشتقاق أسلاف الإنسان متعلق بالخلايا العصبية والخلايا العصبية من افرة القوة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Efficient Neural Differentiation using Single-Cell Culture of Human Embryonic Stem Cells

In vitro differentiation of human embryonic stem cells (hESCs) has transformed the ability to study human development on both biological and molecular levels and provided cells for use in regenerative applications. Standard approaches for hESC culture using colony type culture to maintain undifferentiated hESCs and embryoid body (EB) and rosette formation for differentiation into different germ layers are inefficient and time-consuming. Presented here is a single-cell culture method using hESCs instead of a colony-type culture. This method allows maintenance of the characteristic features of undifferentiated hESCs, including expression of hESC markers at levels comparable to colony type hESCs. In addition, the protocol presents an efficient method for neural progenitor cell (NPC) generation from single-cell type hESCs that produces NPCs within 1 week. These cells highly express several NPC marker genes and can differentiate into various neural cell types, including dopaminergic neurons and astrocytes. This single-cell culture system for hESCs will be useful in investigating the molecular mechanisms of these processes, studies of certain diseases, and drug discovery screens.

Presented here is a protocol for the generation of a single-cell culture of human embryonic stem cells and their subsequent differentiation into neural progenitor cells. The protocol is simple, robust, scalable, and suitable for drug screening and regenerative medicine applications.

كفاءه التمايز العصبي باستخدام ثقافة خليه واحده من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

In vitro differentiation of human embryonic stem cells (hESCs) has transformed the ability to study human development on both biological and molecular ...

تمايز الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات باستخدام نظام استزراع آلي

An Automated Culture System for Maintaining and Differentiating Human-Induced Pluripotent Stem Cells

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) with infinite self-proliferating ability have been expected to have applications in numerous fields, including the elucidation of rare disease pathologies, the development of new medicines, and regenerative medicine aiming to restore damaged organs. Despite this, the social implementation of hiPSCs is still limited. This is partly because of the difficulty of reproducing differentiation in culture, even with advanced knowledge and sophisticated technical skills, due to the high sensitivity of iPSCs to minute environmental changes. The application of an automated culture system can solve this issue. Experiments with high reproducibility independent of a researcher's skill can be expected according to a shared procedure across various institutes. Although several automated culture systems that can maintain iPSC cultures and induce differentiation have been developed previously, these systems are heavy, large, and costly because they make use of humanized, multi-articulated robotic arms. To improve on the above issues, we developed a new system using a simple x-y-z axis slide rail system, allowing it to be more compact, lighter, and cheaper. Furthermore, the user can easily modify parameters in the new system to develop new handling tasks. Once a task is established, all the user needs to do is prepare the iPSC, supply the reagents and consumables needed for the desired task in advance, select the task number, and specify the time. We confirmed that the system could maintain iPSCs in an undifferentiated state through several passages without feeder cells and differentiate into various cell types, including cardiomyocytes, hepatocytes, neural progenitors, and keratinocytes. The system will enable highly reproducible experiments across institutions without the need for skilled researchers and will facilitate the social implementation of hiPSCs in a wider range of research fields by diminishing the obstacles for new entries.

تسليط الضوء على المؤلف: أتمتة ثقافة iPSC لتحسين قابلية التكرار 

Here, we present a protocol for an automated cell culture system. This automated culture system reduces labor and benefits the users, including researchers unfamiliar with handling induced pluripotent stem (iPS) cells, from the maintenance of iPS cells to differentiation into various types of cells.

نظام استزراع آلي للحفاظ على الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان وتمييزها

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) with infinite self-proliferating ability have been expected to have applications in numerous fields, ...

Alternative Cultures for Human Pluripotent Stem Cell Production, Maintenance, and Genetic Analysis

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and efficient expansion of large amounts of clinical-grade hPSCs are critical issues in hPSC-based therapies. Conventionally, hPSCs are propagated as colonies on both feeder and feeder-free culture systems. However, these methods have several major limitations, including low cell yields and generation of heterogeneously differentiated cells. To improve current hPSC culture methods, we have recently developed a new method, which is based on non-colony type monolayer (NCM) culture of dissociated single cells. Here, we present detailed NCM protocols based on the Rho-associated kinase (ROCK) inhibitor Y-27632. We also provide new information regarding NCM culture with different small molecules such as Y-39983 (ROCK I inhibitor), phenylbenzodioxane (ROCK II inhibitor), and thiazovivin (a novel ROCK inhibitor). We further extend our basic protocol to cultivate hPSCs on defined extracellular proteins such as the laminin isoform 521 (LN-521) without the use of ROCK inhibitors. Moreover, based on NCM, we have demonstrated efficient transfection or transduction of plasmid DNAs, lentiviral particles, and oligonucleotide-based microRNAs into hPSCs in order to genetically modify these cells for molecular analyses and drug discovery. The NCM-based methods overcome the major shortcomings of colony-type culture, and thus may be suitable for producing large amounts of homogeneous hPSCs for future clinical therapies, stem cell research, and drug discovery.

Here, we present human pluripotent stem cell (hPSC) culture protocols, based on non-colony type monolayer (NCM) growth of dissociated single cells. This new method, utilizing Rho-associated kinase inhibitors or the laminin isoform 521 (LN-521), is suitable for producing large amounts of homogeneous hPSCs, genetic manipulation, and drug discovery.

الثقافات البديلة لافرة القوة البشرية الجذعية إنتاج الخلية، الصيانة، والتحليل الوراثي

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...

مزارع الخلايا المختلطة لدماغ الفأر الجنيني لدراسة العدوى والمناعة الفطرية

Establishing Mixed Neuronal and Glial Cell Cultures from Embryonic Mouse Brains to Study Infection and Innate Immunity

Models of the central nervous system (CNS) must recapitulate the complex network of interconnected cells found in vivo. The CNS consists primarily of neurons, astrocytes, oligodendrocytes, and microglia. Due to increasing efforts to replace and reduce animal use, a variety of in vitro cell culture systems have been developed to explore innate cell properties, which allow the development of therapeutics for CNS infections and pathologies. Whilst certain research questions can be addressed by human-based cell culture systems, such as (induced) pluripotent stem cells, working with human cells has its own limitations with regard to availability, costs, and ethics. Here, we describe a unique protocol for isolating and culturing cells from embryonic mouse brains. The resulting mixed neural cell cultures mimic several cell populations and interactions found in the brain in vivo. Compared to current equivalent methods, this protocol more closely mimics the characteristics of the brain and also garners more cells, thus allowing for more experimental conditions to be investigated from one pregnant mouse. Further, the protocol is relatively easy and highly reproducible. These cultures have been optimized for use at various scales, including 96-well based high throughput screens, 24-well microscopy analysis, and 6-well cultures for flow cytometry and reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) analysis. This culture method is a powerful tool to investigate infection and immunity within the context of some of the complexity of the CNS with the convenience of in vitro methods.

تسليط الضوء على المؤلف: إنشاء مزارع مختلطة للخلايا العصبية والدبقية من أدمغة الفئران الجنينية لدراسة العدوى والمناعة الفطرية  

This protocol presents a unique way of generating central nervous system cell cultures from embryonic day 17 mouse brains for neuro(immuno)logy research. This model can be analyzed using various experimental techniques, including RT-qPCR, microscopy, ELISA, and flow cytometry.

إنشاء مزارع مختلطة للخلايا العصبية والدبقية من أدمغة الفئران الجنينية لدراسة العدوى والمناعة الفطرية

Models of the central nervous system (CNS) must recapitulate the complex network of interconnected cells found in vivo. The CNS consists primarily of ...

زراعة متعددة القدرات البشرية والعصبية الخلايا الجذعية في نظام زراعة الخلايا المغلقة للبحوث الأساسية وقبل السريرية

Summary

Explore More Videos

PLAYLIST