MG, MO'C and PC thank the Molecular Medicine Research Group at WSU for Research Seed Funding, as well as Michele Mason (WSU), Richard Wuhrer (Advanced Materials Characterisation Facility, AMCF, WSU) and Herv&#233; Cottet (Montpellier) for discussions.

1. إعداد الشيتوزان الأفلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 2 غرام من حامض الخليك الجليدي، الكامل إلى 100 مل مع الماء عالى النقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 1.7 غرام من مسحوق الشيتوزان، إضافة 100 مل من 2٪ م / م الخليك محلول مائي الحمضية. يحرك المزيج لمدة 5 أيام مع شريط التحريك ولوحة التحريك المغناطيسي في درجة حرارة الغرفة إما مغطاة بورق الألمنيوم أو في الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي تشتت الشيتوزان في 1076 x ج في 23 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. جمع طاف مع حقنة وتجاهل راسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل فيلم، قسامة 10 مل من تعليق الشيتوزان إلى 9 سم البلاستيك طبق بيتري في درجة حرارة الغرفة. ترك الأفلام تغطيتها لتجف لمدة 7 أيام على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع باستخدام مقص الأفلام الجافة إلى 1 × 1 سم الساحات. ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتا التجربة في هذه المرحلة. </li></ol> 2. إعداد المالحة الفوسفات مخزنة (PBS) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 8 ز كلوريد الصوديوم، 0.2 غرام كلوريد البوتاسيوم، 1.44 ز فوس ثنائي الصوديوم الهيدروجينيةphate و 0.24 جم هيدروجين فوسفات البوتاسيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل هذه المواد الكيميائية وزنه في 800 مل من الماء عالى النقاء ويعاير الحل مع حمض الهيدروكلوريك المركز لدرجة الحموضة 7.4. ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتا التجربة في هذه المرحلة. </li></ol> 3. إعداد 75 ملم الصوديوم بورات العازلة في درجة الحموضة 9.2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 3.0915 غرام من حمض البوريك. حله في 75 مل من الماء عالى النقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عاير محلول حمض البوريك إلى الرقم الهيدروجيني من 9.2 بمحلول هيدروكسيد الصوديوم بتركيز 10 M أو أعلى. الحذر: تتركز حلول هيدروكسيد الصوديوم هي للتآكل، وينبغي التعامل معها قفازات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كاملة مع الماء عالى النقاء للحصول على 100 مل من محلول. هذا ينتج العازلة بورات الصوديوم 500 ملي في درجة الحموضة 9.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 500 ملي العازلة بورات الصوديوم مع الماء عالى النقاء إلى 75 ملي العازلة بورات الصوديوم. ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتا التجربة في هذه المرحلة. </li></ol> 4. إعداد الشيتوزان فايLMS للتفاعل التطعيم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف 10 الأفلام الشيتوزان مربع (1 × 1 سم) في 5 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 2 ساعة في طبق بيتري في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال هذا الوقت، وإعداد والتحقق من صحة الصك الشعرية الكهربائي (الخطوة 5). </li></ol> 5. إعداد والتحقق من شعري الكهربائي صك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 43.5 سم عارية تنصهر السيليكا الشعرية التي يبلغ قطرها الداخلي 50 ميكرون (43.5 سم هو الطول الكلي، الطول الفعلي إلى إطار الكشف عادة 35 سم) عن طريق إضعاف الطلاء الخارجي البوليمر من شعري في طول مجموعة مع إناء حادة ثم يقبلون الشعرية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء إطار للالشعرية باستخدام ولاعة لحرق طلاء البوليمر في 8.5 سم من مدخل وبعد أن يبرد القضاء عليها نظيفة مع الايثانول. حرق طلاء الشعرية في نهاية كل لبضعة ملليمترات مع أخف وزنا، وبعد أن يبرد القضاء عليها نظيفة مع الايثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الشعرية الإعلامييننافذة كشف دي وتثبيته في الكاسيت الشعرية عن طريق وضعها في أطوال متساوية في مدخل ومخرج ولف حولها ومغزل من الكاسيت. ثم تثبيت الكاسيت في الصك الشعرية الكهربائي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين معلمات الأسلوب لكل فصل. في قائمة البرامج حدد &quot;طريقة&quot; ثم &quot;تحرير طريقة بأكمله&quot;. ضبط درجة الحرارة والوقت والجهد، وقوارير تستخدم لفصل (على سبيل المثال 25 درجة مئوية، 10 دقيقة، 30 كيلو فولت). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قسم ما قبل تكييف، تعيين الإحمرار على التوالي: 10 دقيقة مع 1 م هيدروكسيد الصوديوم (في الماء)، 5 دقائق مع 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم (في الماء)، 5 دقائق مع الماء عالى النقاء و 5 دقائق مع 75 ملي العازلة بورات الصوديوم في الرقم الهيدروجيني 9.2 للأسلوب الأول من سلسلة من التحليلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأساليب اللاحقة، تعيين مجموعة الإحمرار متتالية في قسم ما قبل تكييف: 1 دقيقة مع 1 م هيدروكسيد الصوديوم (في الماء)، 5 دقائق مع 75 ملي العازلة بورات الصوديوم في الرقم الهيدروجيني 9.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قسم الحقن، ووضع معايير لحقن الهيدروديناميكية مع الضغط 30 مليبار لمدة 10 ثانية لجميع الأساليب. في قسم الانفصال، تهيئة الظروف الفصل إلى 30 كيلو فولت عند 25 درجة مئوية لمدة 9 دقائق لجميع الأساليب. ملاحظة: راجع دليل المستخدم لأداة CE محدد وإجراءات تشغيل أداة CE قد تختلف بين المصنعين. تحضير محلول هيدروكسيد الصوديوم 1 م في اليوم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن وفصل معيار داخلي محايد (10 ميكرولتر من 10٪ ت / ت ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)، في الماء المخفف إلى 450 ميكرولتر من 75 ملي العازلة بورات الصوديوم). ثم حقن وفصل بالطريقة نفسها معيارا oligoacrylate (المذاب في الماء عالى النقاء في 10 ز ∙ L -1، انظر قائمة من المواد) للتحقق من صحة الشعيرات الدموية. وقفة تسلسل هنا حتى رد فعل التطعيم هو على استعداد للبدء. </li></ol> 6. مسمار RGDS على الشيتوزان السينمائي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن خارج الببتيد (1 RGDS ملغ)وكلاء اقتران (3 ملغ EDC، حمض الهيدروكلوريك و 2 ملغ NHS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 ساعة بعد بداية تمرغ فيلم الشيتوزان في برنامج تلفزيوني، حل الببتيد وكلاء اقتران في 5 مل من برنامج تلفزيوني. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ قسامة 50 ميكرولتر من هذا الحل. إضافة 2 ميكرولتر من 10٪ ت / ت DMSO في الماء كمعيار محايد الداخلي للقسامة. تحليل قسامة مع اوربا (راجع الخطوة 7). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة 5 مل من برنامج تلفزيوني تستخدم لشطف الأفلام الشيتوزان من طبق بيتري. إضافة محلول 5 مل من الببتيد واقتران وكلاء لطبق بتري تحتوي على الأفلام الشيتوزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية طبق بيتري مع فيلم البارافين ووضعه على شاكر المداري في درجة حرارة الغرفة. خذ 50 مكل من ردود فعل الإعلام في أوقات معينة. ملاحظة: الساعة التحليل الكلي مع CE هو 15 دقيقة، وبالتالي قسامة يمكن أن تؤخذ كل 15 دقيقة (أو كل 30 دقيقة إذا تم رصد اثنين من ردود الفعل في موازاة ذلك، وما إلى ذلك). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 ميكرولتر من 10٪ ت / ت DMSO في الماء كمعيار محايد الداخلي لكل آلiquot. ملاحظة: يجب أن تحلل أجزاء مأخوذة مع CE حالما يتم نقلهم (راجع الخطوة 7). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 4 ساعات من الهز وإزالة قسامة، وإزالة طبق بيتري من شاكر. إزالة المتوسطة رد فعل من طبق بيتري. إضافة 5 مل من برنامج تلفزيوني لشطف الأفلام الشيتوزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة برنامج تلفزيوني من طبق بيتري، وشطف فيلم الشيتوزان مع الماء عالى النقاء والسماح لهم لتجف بين عشية وضحاها. إزالة الماء عالى النقاء وتخزين الأفلام في -20 درجة مئوية في البلاستيك طبق بتري. </li></ol> 7. رصد رد الفعل التطعيم عن طريق م <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن وقسامات منفصلة من ردود فعل الإعلام مباشرة بعد إزالة من طبق بيتري باستخدام الظروف التحليل كما في القسم 5.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند الانتهاء من فصل شطف الشعرية مع الماء عالى النقاء لمدة 10 دقيقة. جففه من خلال مطاردة مع قارورة فارغة (الهواء) لمدة 10 دقيقة. ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتا التجربة في هذه المرحلة. </li></ol> 8. Trea البيانات<html> tment لCE <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من صحة كل فصل، من خلال التأكد من أن كل من التيار خلال فصل ووقت الهجرة من علامة التنقل electroosmotic ([دمس] في هذه الحالة) هي مماثلة لتلك التي لوحظت في الفصل القياسية oligoacrylate. ملاحظة: ما يصل إلى 10-15٪ الاختلاف هو مقبول من القيمة الحالية المتوقعة من حوالي 50 أمبير والهجرة قيمة الوقت 1.3 دقيقة (يجب أن تستخدم القيم التنقل الكهربي بدلا من مرة الهجرة إذا كنت بحاجة لتكرار أعلى). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل فصل ناجحة، تصدير البيانات الخام من برنامج الكهربائي الشعرية من خلال اختيار مجموعة بيانات محددة، والنقر فوق الحق على الصادرات واختيار إشارة المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل البيانات الخام التي سجلتها م (كما عرضت امتصاص الأشعة فوق البنفسجية بوصفها وظيفة من الوقت الهجرة). تحويل المحور السيني (الهجرة وقت ر م) إلى μ التنقل الكهربي التالية المعادلة 1: ن 1 &quot;SRC =&quot; / ملفات / ftp_upload / 54549 / 54549eq1.jpg &quot;/&gt; (1) حيث L d هو طول لكاشف، L ر هو الطول الكلي للالشعرية، والخامس هو الجهد، ور EO هو الوقت المناسب هجرة مسكوكة محايد (المعيار الداخلي DMSO في هذه الحالة) 27. تحويل العمودي من البيانات الخام (الامتصاصية في الاتحاد الافريقي) لتوزيع التنقلات الكهربي W (μ) التالية المعادلة 2: 28 <img alt="المعادلة 2" src="/files/ftp_upload/54549/54549eq2.jpg" /> (2) </li></ol> 9. توصيف إضافية من الأفلام-المطعمة الببتيد 18 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج الأفلام الشيتوزان-المطعمة الببتيد، وتوالت حول نفسها، في 4 مم الحالة الصلبة الرنين المغناطيسي الدوار. ملء الدوار مع الفوسفات مخزنة المالحة إلى تضخم الأفلام، وإغلاق الدوار. الانتظار لبضع ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل الفيلم مع 13 &lt;/ سوب&gt; C NMR الطيفي 18. </li></ol>

<ol>
	<li>Muthukumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+of+electrophoretic+mobility+of+a+polyelectrolyte+in+semidilute+solutions+of+neutral+polymers.">Theory of electrophoretic mobility of a polyelectrolyte in semidilute solutions of neutral polymers.</a> Electrophoresis. 17, 1167-1172 (1996).</li><li>Barrat, J. L., Joanny, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Advances in Chemical Physics, Vol Xciv Vol. 94 Advances in Chemical Physics. , 1-66 (1996).</li><li>Fu, S. L., Lucy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+electrophoretic+mobilities.+1.+Monoamines.">Prediction of electrophoretic mobilities. 1. Monoamines.</a> Anal. Chem. 70, 173-181 (1998).</li><li>Harvey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Modern Analytical Chemistry. , (2000).</li><li>Oliver, J. D., Gaborieau, M., Hilder, E. F., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+robust+determination+of+monosaccharides+in+plant+fibers+in+complex+mixtures+by+capillary+electrophoresis+and+high+performance+liquid+chromatography.">Simple and robust determination of monosaccharides in plant fibers in complex mixtures by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1291, 179-186 (2013).</li><li>Oliver, J. D., Sutton, A. T., Karu, N., Phillips, M., Markham, J., Peiris, P., Hilder, E. F., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+robust+monitoring+of+ethanol+fermentations+by+capillary+electrophoresis.">Simple and robust monitoring of ethanol fermentations by capillary electrophoresis.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 62, 329-342 (2015).</li><li>Thevarajah, J. J., Sutton, A. T., Maniego, A. R., Whitty, E. G., Harrisson, S., Cottet, H., Castignolles, P., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+the+Heterogeneity+of+Chemical+Structures+in+Complex+Charged+Polymers+through+the+Dispersity+of+Their+Distributions+of+Electrophoretic+Mobilities+or+of+Compositions.">Quantifying the Heterogeneity of Chemical Structures in Complex Charged Polymers through the Dispersity of Their Distributions of Electrophoretic Mobilities or of Compositions.</a> Anal. Chem. 88, 1674-1681 (2016).</li><li>Toutounji, M. R., Van Leeuwen, M. P., Oliver, J. D., Shrestha, A. K., Castignolles, P., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+sugars+in+breakfast+cereals+using+capillary+electrophoresis.">Quantification of sugars in breakfast cereals using capillary electrophoresis.</a> Carbohydr. Res. 408, 134-141 (2015).</li><li>Miramon, H., Cavelier, F., Martinez, J., Cottet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Resolutive+Separations+of+Hardly+Soluble+Synthetic+Polypeptides+by+Capillary+Electrophoresis.">Highly Resolutive Separations of Hardly Soluble Synthetic Polypeptides by Capillary Electrophoresis.</a> Anal. Chem. 82, 394-399 (2010).</li><li>Mnatsakanyan, M., Thevarajah, J. J., Roi, R. S., Lauto, A., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+chitosan+by+degree+of+acetylation+using+simple+free+solution+capillary+electrophoresis.">Separation of chitosan by degree of acetylation using simple free solution capillary electrophoresis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 6873-6877 (2013).</li><li>Taylor, D. L., Ferris, C. J., Maniego, A. R., Castignolles, P., in het Panhuis, M., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Gellan+Gum+by+Capillary+Electrophoresis.">Characterization of Gellan Gum by Capillary Electrophoresis.</a> Australian Journal of Chemistry. 65, 1156-1164 (2012).</li><li>Thevarajah, J. J., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+and+characterization+of+synthetic+polyelectrolytes+and+polysaccharides+with+capillary+electrophoresis.">Separation and characterization of synthetic polyelectrolytes and polysaccharides with capillary electrophoresis.</a> Adv. Chem. 2014, 798503 (2014).</li><li>Sutton, A. T., Read, E., Maniego, A. R., Thevarajah, J., Marty, J. -. D., Destarac, M., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purity+of+double+hydrophilic+block+copolymers+revealed+by+capillary+electrophoresis+in+the+critical+conditions.">Purity of double hydrophilic block copolymers revealed by capillary electrophoresis in the critical conditions.</a> J. Chromatogr. A. 1372, 187-195 (2014).</li><li>Righetti, P. G., Sebastiano, R., Citterio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+electrophoresis+and+isoelectric+focusing+in+peptide+and+protein+analysis.">Capillary electrophoresis and isoelectric focusing in peptide and protein analysis.</a> Proteomics. 13, 325-340 (2013).</li><li>Ali, I., Al-Othman, Z. A., Al-Warthan, A., Asnin, L., Chudinov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+chiral+separations+of+small+peptides+by+capillary+electrophoresis+and+chromatography.">Advances in chiral separations of small peptides by capillary electrophoresis and chromatography.</a> J. Sep. Sci. 37, 2447-2466 (2014).</li><li>Kasicka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+capillary+and+microchip+electroseparations+of+peptides+(2011-2013).">Recent developments in capillary and microchip electroseparations of peptides (2011-2013).</a> Electrophoresis. 35, 69-95 (2014).</li><li>Taylor, D. L., Thevarajah, J. J., Narayan, D. K., Murphy, P., Mangala, M. M., Lim, S., Wuhrer, R., Lefay, C., O'Connor, M. D., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+monitoring+of+peptide+grafting+onto+chitosan+films+using+capillary+electrophoresis.">Real-time monitoring of peptide grafting onto chitosan films using capillary electrophoresis.</a> Anal. Bioanal. Chem. 407, 2543-2555 (2015).</li><li>Rinaudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitin+and+chitosan:+Properties+and+applications.">Chitin and chitosan: Properties and applications.</a> Prog. Polym. Sci. 31, 603-632 (2006).</li><li>Li, Z., Leung, M., Hopper, R., Ellenbogen, R., Zhang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-free+self-renewal+of+human+embryonic+stem+cells+in+3D+porous+natural+polymer+scaffolds.">Feeder-free self-renewal of human embryonic stem cells in 3D porous natural polymer scaffolds.</a> Biomaterials. 31, 404-412 (2010).</li><li>Domard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+30+years+research+on+chitin+and+chitosan.">A perspective on 30 years research on chitin and chitosan.</a> Carbohydr. Polym. 84, 696-703 (2011).</li><li>Shekaran, A., Garcia, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+engineering+of+extracellular+matrix-mimetic+bioadhesive+surfaces+and+implants+for+tissue+engineering.">Nanoscale engineering of extracellular matrix-mimetic bioadhesive surfaces and implants for tissue engineering.</a> Biochim. Biophys. Acta Gen. Subj. 1810, 350-360 (2011).</li><li>Custodio, C. A., Alves, C. M., Reis, R. L., Mano, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilization+of+fibronectin+in+chitosan+substrates+improves+cell+adhesion+and+proliferation.">Immobilization of fibronectin in chitosan substrates improves cell adhesion and proliferation.</a> J. Tissue Eng. Regen. Med. 4, 316-323 (2010).</li><li>Boateng, S. Y., Lateef, S. S., Mosley, W., Hartman, T. J., Hanley, L., Russell, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RGD+and+YIGSR+synthetic+peptides+facilitate+cellular+adhesion+identical+to+that+of+laminin+and+fibronectin+but+alter+the+physiology+of+neonatal+cardiac+myocytes.">RGD and YIGSR synthetic peptides facilitate cellular adhesion identical to that of laminin and fibronectin but alter the physiology of neonatal cardiac myocytes.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 288, C30-C38 (2005).</li><li>Lefay, C., Guillaneuf, Y., Moreira, G., Thevarajah, J. J., Castignolles, P., Ziarelli, F., Bloch, E., Major, M., Charles, L., Gaborieau, M., Bertin, D., Gigmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+modification+of+chitosan+via+nitroxide-mediated+polymerization.">Heterogeneous modification of chitosan via nitroxide-mediated polymerization.</a> Polym. Chem. 4, 322-328 (2013).</li><li>Gartner, C., Lopez, B. L., Sierra, L., Graf, R., Spiess, H. W., Gaborieau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+Structure+and+Dynamics+in+Chitosan+Films+Investigated+with+Solid-State+NMR,+Dynamic+Mechanical+Analysis,+and+X-ray+Diffraction.">Interplay between Structure and Dynamics in Chitosan Films Investigated with Solid-State NMR, Dynamic Mechanical Analysis, and X-ray Diffraction.</a> Biomacromolecules. 12, 1380-1386 (2011).</li><li>Castignolles, P., Gaborieau, M., Hilder, E. F., Sprong, E., Ferguson, C. J., Gilbert, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+separation+of+oligo(acrylic+acid)+by+capillary+zone+electrophoresis.">High resolution separation of oligo(acrylic acid) by capillary zone electrophoresis.</a> Macromol. Rapid Commun. 27, 42-46 (2006).</li><li>Chamieh, J., Martin, M., Cottet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+in+Capillary+Electrophoresis:+Transformation+of+Raw+Electropherograms+into+Continuous+Distributions.">Quantitative Analysis in Capillary Electrophoresis: Transformation of Raw Electropherograms into Continuous Distributions.</a> Anal. Chem. 87, 1050-1057 (2015).</li><li>Maniego, A. R., Ang, D., Guillaneuf, Y., Lefay, C., Gigmes, D., Aldrich-Wright, J. R., Gaborieau, M., Castignolles, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+poly(acrylic+acid)+salts+according+to+topology+using+capillary+electrophoresis+in+the+critical+conditions.">Separation of poly(acrylic acid) salts according to topology using capillary electrophoresis in the critical conditions.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 9009-9020 (2013).</li><li>Chung, T. W., Lu, Y. F., Wang, S. S., Lin, Y. S., Chu, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+human+endothelial+cells+on+photochemically+grafted+Gly-Arg-Gly-Asp+(GRGD)+chitosans.">Growth of human endothelial cells on photochemically grafted Gly-Arg-Gly-Asp (GRGD) chitosans.</a> Biomaterials. 23, 4803-4809 (2002).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

بساطة بروتوكول صفها هنا يجعل من مناسبة بشكل مثالي لتطبيق على نطاق واسع. ومع ذلك، يحتاج إلى عناية خاصة ليتم دفعها إلى من الخطوات الرئيسية التالية. إعداد الأداة المناسبة CE من المهم أن ?...

حل الحرة الشعرية الكهربائي (م) هو الاسلوب الذي يفصل بين المركبات في الحلول المبنية على من نسبة 1،2 الشحنة للاحتكاك. وكثيرا ما ذكر نسبة الشحنة للحجم في الأدب، ولكن لا ينطبق هذا التبسيط إلى polyelectrolytes، بما في ذلك البروتينية في هذا العمل، وأظهرت أيضا أن لا يكون مناسبا لجزيئات عضوية صغيرة 3. CE يختلف عن تقنيات الفصل الأخرى من حيث أنه لايوجد مرحلة ثابتة، فقط بالكهرباء الخلفية (عادة عازلة). وهذا يسمح للتقنية ليكون قويا في قدرته على تحليل مجموعة كبيرة من العينات مع المصفوفات المعقدة 4 مثل الألياف النباتية 5، التخمير يهيئ 6 مسمار على البوليمرات الاصطناعية 7، عينات المواد الغذائية 8، والببتيدات بالكاد القابلة للذوبان 9 دون تحضير عينة مملة و طهارة. وهذا أمر مهم خاصة بالنسبة للpolyelectrolytes المعقدة التي لديها قضايا الحل (قاوك والشيتوزان 10 و جيلان اللثة 11)، وبالتالي وجود مجمعة كما أو عجلت في حل وتم تحليلها بنجاح دون عينة الترشيح. وعلاوة على ذلك، فإن تحليل السكريات في حبوب الإفطار تشارك حقن عينات مع جزيئات من عينات حبوب الافطار عجلت في الماء 8. هذا يمتد أيضا إلى تحليل polyelectrolytes متفرعة أو بوليمرات 12،13. كما تم الانتهاء من أعمال مكثفة في مجال تطوير تقنيات CE خصيصا لتحليل البروتينات لالبروتينات 14، الفصل انطباقي من الببتيدات الطبيعية أو الاصطناعية 15 و فصل رقاقة من البروتينات والببتيدات 16. منذ الانفصال وتحليل تجري في شعري، وتستخدم كميات صغيرة فقط من العينة، والمذيبات التي تمكن CE لتكلفة تشغيلها أقل من تقنيات الفصل أخرى بما في ذلك 5،6،17 اللوني. منذ الانفصال من قبل CE سريع، لأنها تتيح رصد ومراقبةحلقة من حركية التفاعل. وقد تجلى ذلك في حالة تطعيم الببتيدات على الأفلام الشيتوزان لتحسين التصاق الخلية 18. الشيتوزان هو السكاريد المستمدة من -deacetylation N من الكيتين. الأفلام الشيتوزان يمكن استخدامها لمختلف التطبيقات الطبية الحيوية مثل bioadhesives 19 وركائز نمو الخلايا 18،20، نظرا لتوافق مع الحياة الشيتوزان البالغ عددهم 21. مرفق الخلية البروتينات المصفوفة خارج الخلية المحددة، مثل فبرونيكتين، الكولاجين و laminin، يرتبط ارتباطا مباشرا لبقاء الخلايا 22. وتجدر الإشارة إلى أنواع مختلفة من الخلايا وغالبا ما تتطلب مرفق لمختلف البروتينات المصفوفة خارج الخلية من أجل البقاء وظيفة مناسبة. وقد تبين مرفق الخلية إلى الأفلام الشيتوزان ليتم تعزيزها من خلال تطعيم الفيبرونكتين 23؛ ومع ذلك، وإعداد وتنقية وتطعيم هذه البروتينات كبيرة غير قابلة للتطبيق اقتصاديا. بالتناوب مجموعة من الببتيدات الصغيرة هفثبت ه لتكون قادرة على محاكاة خصائص البروتينات كبيرة المصفوفة خارج الخلية. على سبيل المثال، الببتيدات مثل RGD محاكيات الفيبرونكتين استخدمت لتسهيل وزيادة مرفق الخلية 24 (أرجينين - الجلايسين - حمض الأسبارتيك) وRGDS (سيرين أرجينين - الجلايسين - - حمض الأسبارتيك). أدى التساهمية تطعيم RGDS على الأفلام الشيتوزان في تحسين مرفق الخلية لخلايا المعروف أن نعلق على فبرونيكتين في الجسم الحي 18. استبدال البروتينات أكبر يحب فبرونيكتين مع الببتيدات الصغيرة التي لديها نفس الوظيفة توفر انخفاض كبير في التكاليف. هنا، تم تنفيذ الببتيد تطعيم لالشيتوزان كما نشرت سابقا (18). كما هو موضح سابقا، ويوفر هذا النهج التطعيم بسيطة وفعالة عن طريق استخدام وكلاء اقتران EDC، حمض الهيدروكلوريك (1 إيثيل-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) وNHS (N -hydroxysuccinimide) إلى functionalize الأحماض الكربوكسيلية من RGDS أن يكون تطعم بهفيلم الشيتوزان. اثنين من مزايا هذه الطريقة التطعيم هي أنه لا يتطلب أي تعديل الشيتوزان أو من الببتيد، واضطلعت بها في وسط مائي لتحقيق التوافق مع تطبيقات زراعة الخلايا المستقبلية 18،20. كما يمكن شحن وكلاء اقتران والببتيد، م هي طريقة مناسبة لتحليل حركية التفاعل. الأهم من ذلك، تحليل حركية التفاعل عبر CE يمكن رصد في الوقت الحقيقي من رد فعل التطعيم، وبالتالي تمكن كل من تحسين وقياس درجة التطعيم. في حين أنه ليس من الضروري بشكل روتيني، ونتائج التحليل CE يمكن التحقق من صحة خارج الخط من قبل القياس المباشر من الببتيد تطعيم على الأفلام الشيتوزان باستخدام الحالة الصلبة الرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي) الطيفي 25،26 للتدليل على تطعيم التساهمية من الببتيد على فيلم 18. ومع ذلك، بالمقارنة مع الحالة الصلبة الرنين المغناطيسي الطيفي، في الوقت الحقيقي التحليل الذي قدمهCE تمكن من تقدير حجم استهلاك الببتيد في الوقت الحقيقي، وبالتالي القدرة على تقييم حركية التفاعل. الطريقة المذكورة أعلاه بسيط ويسمح للتحليل في الوقت الحقيقي من الببتيد تطعيم على الأفلام الشيتوزان مع تقدير غير مباشر لمدى التطعيم. ويمكن تمديد الأسلوب هو موضح في التقييم الكمي في الوقت الحقيقي من التفاعلات الكيميائية المختلفة طالما المواد المتفاعلة أو المنتجات التي سيتم تحليلها يمكن توجيه الاتهام.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1124">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Water</td>
			<td style="width:185px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:479px;">All water used in the experiment has to be of Milli-Q quality</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Chitosan powder (medium molecular weight)</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>448877</td>
			<td style="width:479px;">lot MKBH1108V was used. Significant batch-to-batch variations occur with natural products such as polysaccharides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid - Unilab</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td style="width:119px;">2-2.5L GL</td>
			<td>laboratory reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dimethylsulfoxide</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D4540</td>
			<td>laboratory reagent, slightly hazardous to skin, hazardous if ingested</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221465&#160;</td>
			<td>laboratory reagent, corrosive&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RGDS&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Bachem</td>
			<td style="width:119px;">H&#8208;1155</td>
			<td>peptide, bought from Auspep Pty Ltd</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D80002</td>
			<td>Irritant to skin&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimide&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">130672</td>
			<td>Irritant to skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td>466-500G</td>
			<td>laboratory reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium chloride - Univar</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td>384-500G</td>
			<td>analytical reagent, slight skin irritant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disodium hydrogen phosphate - Unilab</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td>1234-500G</td>
			<td>laboratory reagent, slight skin irritant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium dihydrogen phosphate - Univar</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td>4745-500G</td>
			<td>analytical reagent, slight skin irritant</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Oligoacrylate standard</td>
			<td style="width:185px;">custom made</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:479px;">See reference for synthetic protocol: Castignolles, P.; Gaborieau, M.; Hilder, E. F.; Sprong, E.; Ferguson, C. J.; Gilbert, R. G. Macromol. Rapid Commun. 2006, 27, 42-46</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:185px;">BDH AnalR, Merck Pty Ltd</td>
			<td style="width:119px;">10058</td>
			<td>Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrochloric acid - Unilab</td>
			<td style="width:185px;">Ajax Finechem</td>
			<td style="width:119px;">A1367-2.5L</td>
			<td>laboratory reagent, corrosivie</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Fused silica tubing</td>
			<td style="width:185px;">Polymicro (Molex)</td>
			<td style="width:119px;">TSP050375</td>
			<td style="width:479px;">Flexible fused silica capillary tubing with standard polyimide coating, 50 &#181;m internal diameter, 363 &#181;m outer diameter&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agilent 7100 CE</td>
			<td style="width:185px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:119px;">G7100CE</td>
			<td>Capillary electrophoresis instrument</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Orbital shaker&#160;</td>
			<td style="width:185px;">IKA</td>
			<td style="width:119px;">KS260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Electronic balance</td>
			<td style="width:185px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:119px;">MS204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Milli-Q Synthesis&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">ZMQS5VF01</td>
			<td>Ultrapure water filtration system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Parafilm&#160;</td>
			<td style="width:185px;">Labtek</td>
			<td style="width:119px;">PM966</td>
			<td>Parrafin wax</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capillary electrophoresis to monitor peptide grafting onto chitosan films in real time

خالية من حل الشعرية الكهربائي (CE) يفصل التحاليل والمركبات اتهم عموما في حل من خلال تطبيق مجال كهربائي. بالمقارنة مع تقنيات الفصل التحليلية الأخرى، مثل اللوني، CE رخيصة وقوية ويتطلب أي تحضير العينة (لعدد من المصفوفات الطبيعية المعقدة أو عينات البوليمر) على نحو فعال. CE سريع، ويمكن استخدامها لمتابعة تطور مخاليط في الوقت الحقيقي (على سبيل المثال، حركية التفاعل الكيميائي)، وإشارات لوحظت في المركبات فصل ويتناسب طرديا مع كمية في الحل. هنا، وأثبت كفاءة CE لرصد تطعيم التساهمية من الببتيدات على الأفلام الشيتوزان للتطبيقات الطبية اللاحقة. الخصائص المضادة للميكروبات وحيويا الشيتوزان تجعل من مادة جذابة للتطبيقات الطبية الحيوية مثل ركائز نمو الخلايا. تطعيم تساهمي في RGDS الببتيد (أرجينين - الجلايسين -ويهدف سيرين) على سطح الأفلام الشيتوزان في تحسين مرفق الخلية - حمض الأسبارتيك. تاريخيا، تم استخدام اللوني وتحليل الحمض الأميني لتوفير قياس مباشر من مبلغ الببتيد المطعمة. ومع ذلك، فإن فصل سريع وغياب إعداد العينات المقدمة من قبل CE يمكن رصد في الوقت الحقيقي على قدم المساواة دقيقة بعد عملية ترقيع الببتيد. CE غير قادرة على فصل وتحديد مختلف مكونات خليط التفاعل: (عدم المطعمة) الببتيد وكلاء اقتران الكيميائية. في هذه الطريقة استخدام CE النتائج في تحسين الأفلام لتطبيقات المصب. وتميزت الأفلام الشيتوزان من خلال الحالة الصلبة الرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي) الطيفي. هذا الأسلوب هو أكثر استهلاكا للوقت، ولا يمكن أن تطبق في الوقت الحقيقي، ولكن غلة القياس المباشر من الببتيد، وبالتالي بالتحقق من صحة تقنية CE.

م هي مناسبة تماما لمراقبة التطعيم من الببتيدات (على سبيل المثال، RGDS) على الأفلام الشيتوزان. تشمل وكلاء اقتران مناسبة EDC، حمض الهيدروكلوريك وNHS التي تنشط الببتيد إلى أن تطعم به الشيتوزان (الشكل 1). CE قادر على فصل جزيئات مختلفة من الاهتمام ...

Watch this Scientific Journal Video about Capillary Electrophoresis to Monitor Peptide Grafting onto Chitosan Films in Real Time at JoVE.com

Capillary Electrophoresis to Monitor Peptide Grafting onto Chitosan Films in Real Time

Free solution capillary electrophoresis is a fast, cheap and robust analytical method that enables the quantitative monitoring of chemical reactions in real time. Its utility for rapid, convenient and precise analysis is demonstrated here through analysis of covalent peptide grafting onto chitosan films for improved cell adhesion.

الشعرية الكهربائي لرصد الببتيد مسمار على الأفلام الشيتوزان في الوقت الحقيقي

Free-solution capillary electrophoresis (CE) separates analytes, generally charged compounds in solution through the application of an electric field. ...

capillary-electrophoresis-to-monitor-peptide-grafting-onto-chitosan

Research

JoVE Journal

Chemistry

9.0K Views.  Western Sydney University. Free solution capillary electrophoresis is a fast, cheap and robust analytical method that enables the quantitative monitoring of chemical reactions in real time. Its utility for rapid, convenient and precise analysis is demonstrated here through analysis of covalent peptide grafting onto chitosan films for improved cell adhesion.

Video: Capillary Electrophoresis to Monitor Peptide Grafting onto Chitosan Films in Real Time

A Technique to Functionalize and Self-assemble Macroscopic Nanoparticle-ligand Monolayer Films onto Template-free Substrates

This protocol describes a self-assembly technique to create macroscopic monolayer films composed of ligand-coated nanoparticles1,2. The simple, robust and scalable technique efficiently functionalizes metallic nanoparticles with thiol-ligands in a miscible water/organic solvent mixture allowing for rapid grafting of thiol groups onto the gold nanoparticle surface. The hydrophobic ligands on the nanoparticles then quickly phase separate the nanoparticles from the aqueous based suspension and confine them to the air-fluid interface. This drives the ligand-capped nanoparticles to form monolayer domains at the air-fluid interface.&#160; The use of water-miscible organic solvents is important as it enables the transport of the nanoparticles from the interface onto template-free substrates.&#160; The flow is mediated by a surface tension gradient3,4 and creates macroscopic, high-density, monolayer nanoparticle-ligand films.&#160; This self-assembly technique may be generalized to include the use of particles of different compositions, size, and shape and may lead to an efficient assembly method to produce low-cost, macroscopic, high-density, monolayer nanoparticle films for wide-spread applications.

A simple, robust and scalable technique to functionalize and self-assemble macroscopic nanoparticle-ligand monolayer films onto template-free substrates is described in this protocol.

تقنية لFunctionalize وتجميع الذاتي عياني الجسيمات النانوية يجند أحادي الطبقة أفلام على ركائز خالية من قالب

This protocol describes a self-assembly technique to create macroscopic monolayer films composed of ligand-coated nanoparticles1,2. The simple, robust and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under appropriate conditions. The glycan nanoparticles are useful carriers for protein factors, which facilitate the in vivo delivery of the proteins and sustain their retention in the targeted tissue. The glycan polyelectrolyte complexes are also ideal for protein delivery, as the incorporation is carried out in aqueous solution, which reduces the likelihood of inactivation of the proteins. Proteins with a heparin-binding site adhere to dextran sulfate readily, and are, in turn, stabilized by the binding. These particles are also less inflammatory and toxic when delivered in vivo. In the protocol described below, SDF-1&#945; (Stromal cell-derived factor-1&#945;), a stem cell homing factor, is first mixed and incubated with dextran sulfate. Chitosan is added to the mixture to form polyelectrolyte complexes, followed by zinc sulfate to stabilize the complexes with zinc bridges. The resultant SDF-1&#945;-DS-CS particles are measured for size (diameter) and surface charge (zeta potential). The amount of the incorporated SDF-1&#945; is determined, followed by measurements of its in vitro release rate and its chemotactic activity in a particle-bound form.

The objective of this protocol is to incorporate SDF-1&#945;, a stem cell homing factor, into dextran sulfate-chitosan nanoparticles. The resultant particles are measured for their size and zeta potential, as well as the content, activity, and in vitro release rate of SDF-1&#945; from the nanoparticles.

إعداد وتوصيف SDF-1α-الشيتوزان-ديكستران سلفات النانوية

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Cooling Rate Dependent Ellipsometry Measurements to Determine the Dynamics of Thin Glassy Films

This report aims to fully describe the experimental technique of using ellipsometry for cooling rate dependent Tg (CR-Tg) experiments. These measurements are simple high-throughput characterization experiments, which can determine the glass transition temperature (Tg), average dynamics, fragility and the expansion coefficient of the super-cooled liquid and glassy states for a variety of glassy materials. This technique allows for these parameters to be measured in a single experiment, while other methods must combine a variety of different techniques to investigate all of these properties. Measurements of dynamics close to Tg are particularly challenging. The advantage of cooling rate dependent Tg measurements over other methods which directly probe bulk and surface relaxation dynamics is that they are relatively quick and simple experiments, which do not utilize fluorophores or other complicated experimental techniques. Furthermore, this technique probes the average dynamics of technologically relevant thin films in temperature and relaxation time (&#964;&#945;) regimes relevant to the glass transition (&#964;&#945; &#62; 100 sec). The limitation to using ellipsometry for cooling rate dependent Tg experiments is that it cannot probe relaxation times relevant to measurements of viscosity (&#964;&#945; &#60;&#60; 1 sec). Other cooling rate dependent Tg measurement techniques, however, can extend the CR-Tg method to faster relaxation times. Furthermore, this technique can be used for any glassy system so long as the integrity of the film remains throughout the experiment.

Here, we present a protocol for cooling rate dependent ellipsometry experiments, which can determine the glass transition temperature (Tg), average dynamics, fragility and the expansion coefficient of the super-cooled liquid and glass for a variety of glassy materials.

تبريد أسعار التابعة القياسات Ellipsometry لتحديد ديناميات رقيقة زجاجية أفلام

This report aims to fully describe the experimental technique of using ellipsometry for cooling rate dependent Tg (CR-Tg) experiments. These measurements ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, and that these chemical fingerprints can be used for plant species identification. The mass spectral data can be acquired rapidly and in a high throughput manner without the need for sample extraction, derivatization or pH adjustment steps. The use of this technique bypasses challenges presented by more conventional techniques including lengthy chromatography analysis times and resource intensive methods. The high throughput capabilities of the direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry protocol, coupled with multivariate statistical analysis processing of the data, provide not only class characterization of plants, but also yield species and varietal information. Here, the technique is demonstrated with two psychoactive plant products, Mitragyna speciosa (Kratom) and Datura (Jimsonweed), which were subjected to direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry followed by statistical analysis processing of the mass spectral data. The application of these tools in tandem enabled the plant materials to be rapidly identified at the level of variety and species.

A method for species identification of botanical material by direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry and multivariate statistical analysis is presented.

سريع سرعة عالية الإنتاجية الأنواع النباتية تحديد المواد عن طريق تحليل المباشر في الوقت الحقيقي عالية الدقة قياس الطيف الكتلي

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

باستخدام شعري الكهربائي لقياس الأحماض العضوية من الأنسجة النباتية: حالة اختبار فحص<em&gt; كافيا ارابيكا</em&gt; بذور

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Grafting Multiwalled Carbon Nanotubes with Polystyrene to Enable Self-Assembly and Anisotropic Patchiness

We demonstrate a straightforward protocol to graft pristine multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs) with polystyrene (PS) chains at the sidewalls through a free-radical polymerization strategy to enable the modulation of the nanotube surface properties and produce supramolecular self-assembly of the nanostructures. First, a selective hydroxylation of the pristine nanotubes through a biphasic catalytically mediated oxidation reaction creates superficially distributed reactive sites at the sidewalls. The latter reactive sites are subsequently modified with methacrylic moieties using a silylated methacrylic precursor to create polymerizable sites. Those polymerizable groups can address further polymerization of styrene to produce a hybrid nanomaterial containing PS chains grafted to the nanotube sidewalls. The polymer-graft content, amount of silylated methacrylic moieties introduced and hydroxylation modification of the nanotubes are identified and quantified by Thermogravimetric Analysis (TGA). The presence of reactive functional groups hydroxyl and silylated methacrylate are confirmed by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Polystyrene-grafted carbon nanotube solutions in tetrahydrofuran (THF) provide wall-to-wall collinearly self-assembled nanotubes when cast samples are analyzed by transmission electron microscopy (TEM). Those self-assemblies are not obtained when suitable blanks are similarly cast from analogous solutions containing non-grafted counterparts. Therefore, this method enables the modification of the nanotube anisotropic patchiness at the sidewalls which results into spontaneous auto-organization at the nanoscale.

A procedure for the synthesis of polystyrene-grafted multiwalled carbon nanotubes using successive chemical modification steps to selectively introduce the polymer chains to the sidewalls and their self-assembly via anisotropic patchiness is presented.

تطعيم الأنابيب النانوية الكربونية مولتيواليد مع البوليستيرين لتمكين التجميع الذاتي والرقع متباين

We demonstrate a straightforward protocol to graft pristine multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs) with polystyrene (PS) chains at the sidewalls through a ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental exposure in a non-invasive manner. In this work, we present a protocol to characterize the exhaled VOCs in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry (Sec-nanoESI-HRMS). The homemade Sec-nanoESI source was readily set up based on a commercial nanoESI source. Hundreds of peaks were observed in the background-subtracted mass spectra of exhaled breath, and the mass accuracy values are -4.0-13.5 ppm and -20.3-1.3 ppm in the positive and negative ion detection modes, respectively. The peaks were assigned with accurate elemental composition according to the accurate mass and isotopic pattern. Less than 30 s is used for one exhalation measurement, and it takes approximately 7 min for six replicated measurements.

A protocol for characterizing chemical composition of exhaled breath in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry is demonstrated.

تحليل التنفس في الوقت الحقيقي باستخدام التأين نانوليكتروسبراي الثانوية بالإضافة إلى دقة عالية الطيف الكتلي

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic development. To enable single-cell investigations directly in live embryos, new analytical approaches are needed, particularly those that are sensitive, selective, quantitative, robust, and scalable to different cell sizes. Here, we present a protocol that enables the in situ analysis of metabolism in single cells in freely developing embryos of the South African clawed frog (Xenopus laevis), a powerful model in cell and developmental biology. This approach uses a capillary microprobe to aspirate a defined portion from single identified cells in the embryo, leaving neighboring cells intact for subsequent analysis. The collected cell content is analyzed by a microscale capillary electrophoresis electrospray ionization (CE-ESI) interface coupled to a high-resolution tandem mass spectrometer. This approach is scalable to various cell sizes and compatible with the complex three-dimensional structure of the developing embryo. As an example, we demonstrate that microprobe single-cell CE-ESI-MS enables the elucidation of metabolic cell heterogeneity that unfolds as a progenitor cell gives rise to descendants during development of the embryo. Besides cell and developmental biology, the single-cell analysis protocols described here are amenable to other cell sizes, cell types, or animal models.

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog Xenopus laevis Embryos

We describe steps that enable fast in situ sampling of a small portion of an individual cell with high precision and minimal invasion using capillary-based micro-sampling, to facilitate chemical characterization of a snapshot of metabolic activity in live embryos using a custom-built single cell capillary electrophoresis and mass spectrometry platform.

ميكروبروبي الشعرية التفريد قياس الطيف الكتلي لجميع الخلايا المفردة في أجنة "الضفادع يعيش" (ليفيس النمو)

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

Large-scale Top-down Proteomics Using Capillary Zone Electrophoresis Tandem Mass Spectrometry

Capillary zone electrophoresis-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (CZE-ESI-MS/MS) has been recognized as a useful tool for top-down proteomics that aims to characterize proteoforms in complex proteomes. However, the application of CZE-MS/MS for large-scale top-down proteomics has been impeded by the low sample-loading capacity and narrow separation window of CZE. Here, a protocol is described using CZE-MS/MS with a microliter-scale sample-loading volume and a 90-min separation window for large-scale top-down proteomics. The CZE-MS/MS platform is based on a linear polyacrylamide (LPA)-coated separation capillary with extremely low electroosmotic flow, a dynamic pH-junction-based online sample concentration method with a high efficiency for protein stacking, an electro-kinetically pumped sheath flow CE-MS interface with extremely high sensitivity, and an ion trap mass spectrometer with high mass resolution and scan speed. The platform can be used for the high-resolution characterization of simple intact protein samples and the large-scale characterization of proteoforms in various complex proteomes. As an example, a highly efficient separation of a standard protein mixture and a highly sensitive detection of many impurities using the platform is demonstrated. As another example, this platform can produce over 500 proteoform and 190 protein identifications from an Escherichia coli proteome in a single CZE-MS/MS run.

A detailed protocol is described for the separation, identification, and characterization of proteoforms in protein samples using capillary zone electrophoresis-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (CZE-ESI-MS/MS). The protocol can be used for the high-resolution characterization of proteoforms in simple protein samples and the large-scale identification of proteoforms in complex proteome samples.

البروتيوميات من أعلى إلى أسفل على نطاق واسع باستخدام المنطقة الشعرية التفريد جنبا إلى جنب الكتلي

Capillary zone electrophoresis-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (CZE-ESI-MS/MS) has been recognized as a useful tool for top-down ...

High-throughput and Comprehensive Drug Surveillance Using Multisegment Injection-Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry

New analytical methods are urgently needed to enable high-throughput, yet comprehensive drug screening, given an alarming opioid and prescription drug crisis in public health. Conventional urine drug testing based on a two-tier immunoassay screen followed by a gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) or liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method are expensive and prone to bias while being limited to targeted panels of known drugs of abuse (DoA). Herein, we outline an improved method for drug surveillance that allows for the resolution and detection of an expanded panel of DoA and their metabolites when using multisegment injection-capillary electrophoresis-mass spectrometry (MSI-CE-MS). Multiplexed separations of ten urine samples with a quality control by CE (&lt; 3 min/sample) in conjunction with full-scan data acquisition using a time-of-flight mass spectrometer (TOF-MS) under positive ion mode detection allows for the identification and quantification of DoA above recommended cut-off levels. An excellent resolution of drug isomers and isobars, including background interferences, are achieved when using MSI-CE-MS with an electrokinetic spacer between sample segments, where accurate mass/molecular formula together with the comigration of a matching deuterated internal standard and the detection of one or more bio-transformed metabolites facilitate DoA identification over a wider detection window. Additionally, urine samples can be analyzed directly without enzyme deconjugation for the rapid screening without complicated sample workup. MSI-CE-MS enables the surveillance of a broad spectrum of DoA that is required for the treatment monitoring of high-risk patients, including confirming prescribed drug adherence, revealing illicit drug use/substitution, and evaluating optimal dosage regimes as required for new advances in precision medicine.

Here we describe a high-throughput method for comprehensive drug surveillance that allows for the improved resolution and detection of large panels of drugs of abuse and their metabolites, with quality control based on multisegment injection-capillary electrophoresis-mass spectrometry.

مراقبة المخدرات الفائق وشاملة باستخدام مولتيسيجمينت الشعرية حقن التفريد الكتلي

New analytical methods are urgently needed to enable high-throughput, yet comprehensive drug screening, given an alarming opioid and prescription drug ...

الشعرية الكهربائي لرصد الببتيد مسمار على الأفلام الشيتوزان في الوقت الحقيقي

PLAYLIST