وفقا للمعايير التشخيصية الدولية الأخيرة لاضطرابات الطيف التهاب النخاع العصبي، المضادة ل AQP4 IgG يعتبر أن تكون المؤشرات الحيوية التشخيصية الأساسية. يمكن أن يؤدي اكتشاف مضاد AQP4 IgG عن طريق الفحص القائم على الخلايا إلى تسهيل التشخيص السريري. لذلك، فإن الفحص القائم على الخلايا أكثر حساسية وتحديدا من أساليب الكشف الأخرى.
ويمكن تطبيقه على كل من التشخيص السريري والدراسات العلمية. أولاً، إحضار عينات مصل المريض، شريحة الـ biochip، مسحوق PBS، و TWEEN 20 من عدة التشخيض المبردة القائمة على الخلايا إلى درجة حرارة الغرفة. ثم، وإعداد أكثر من 200 ملليلتر من برنامج تلفزيوني غسل العازلة التي تحتوي على 0.2 في المئة TWEEN 20 لكل شريحة رقاقة حيوية.
استخدام المخزن المؤقت للغسيل لجعل 10 أضعاف التخفيفات التسلسلية لكل عينة مصل. إعداد ضوابط إيجابية وسلبية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. أضف 30 ميكرولترات من 10 أضعاف التخفيفات التسلسلية للعينة، والسيطرة الإيجابية، والسيطرة السلبية، إلى خمسة حقول رد فعل الفردية على علبة الكاشف.
أمسك الشريحة الحيوية من خلال شرائحها وأزل غطاءها الواقي دون لمس حقول التفاعل الخاصة به. ضع الشريحة فوق الدرج الكاشف وحضن الإعداد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. شطف بلطف الشريحة biochip مع العازلة غسل.
ثم غمره في منقار 500 ملليلتر مملوء بـ 100 ملليلتر من مخزن الغسيل، واتركه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. أخرج شريحة الـ biochip من مخزن الغسيل. استخدام منشفة ورقية لمسح بعناية بعيدا أي المخزن المؤقت المتبقية من خارج حقول رد الفعل.
اترك الشريحة تجف لمدة دقيقة إلى دقيقتين. في الغرفة المظلمة، أضف 25 ميكرولترات من الأجسام المضادة الثانوية الفلورية لكل مجال تفاعل في علبة الكاشف. ضع الشريحة فوق الدرج الكاشف وحضن الإعداد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
شطف بلطف الشريحة biochip مع العازلة غسل. ثم غمره في منبر 500 ملليلتر مملوء بـ 100 ملليلتر من عازل الغسيل الطازج، واتركه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. أخرج شريحة الـ biochip من مخزن الغسيل.
استخدام منشفة ورقية لمسح بعناية بعيدا أي المخزن المؤقت المتبقية من خارج حقول رد الفعل. اترك الشريحة تجف لمدة دقيقة إلى دقيقتين. إضافة بعناية قطرة واحدة من الوسط التضمين لكل حقل رد فعل على شريحة الـ biochip.
وأخيراً، قم بختم الشريحة الحيوية بزجاج غطاء مع تجنب فقاعات الهواء والمضي قدماً في التصوير. تشير شدة الفلورس الضعيفة للرقابة السلبية التي لوحظت في المنطقة المصابة إلى الربط غير المحدد للجسم المضاد الثانوي. تشير المقارنة بين شدة الفلورس التي تم اكتشافها من المكافحة الإيجابية في المناطق المصابة وغير المصابة إلى الربط المحدد للIgG المضادة AQP4 إلى AQP4M1 في الخلايا المصابة.
المصل السلبي المضاد AQP4 IgG يظهر أنماط ملزمة مماثلة للرقابة السلبية في كل من المناطق المصابة وغير المصابة. المصل الإيجابي يظهر أنماط ملزمة مماثلة للرقابة الإيجابية في كل من المناطق المصابة وغير المصابة. وتعتبر العينات المضادة AQP4 IgG إيجابية عندما الفلوريسانس غير متجانسة يزيد في المنطقة المصابة.
وترتبط شدة الفلوريسنس إلى AQP4 Titer المضادة للجيل الرابع في المصل. وتعتبر العينات إيجابية على الأرجح عندما لا يظهر سوى عدد قليل من الخلايا في المنطقة المصابة كثافة الفلورس يمكن اكتشافها. وينبغي اعتبار العينة المضادة AQP4 IgG السلبية عندما تكون شدتها في المنطقة المصابة فقط بشكل متجانس أقوى مما كانت عليه في المنطقة غير المصابة.
تجنب فقاعات الهواء أمر حيوي وصعب. للقضاء على فقاعات الهواء، استخدم أولا ماصة لتجنب فقاعات الهواء في قطرات. ثانياً، أثناء تطبيق الشريحة الحيوية على الدرج الكاشف، أولاً السماح لأحد جانبي الشريحة بلمس القطرات، ثم قم بتسوية الشريحة ببطء.
بالإضافة إلى ذلك، لا تلمس حقول التفاعل طوال التجربة.
