ويمكن استخدام هذا النظام السابق في مجال الثقافة الحية لتحديد الآليات الخلوية والجزيئية الجديدة لهجرة الخلايا الدبقية البشرية ويمكن أن تستخدم في اختبار فعالية المخدرات في المختبر. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القدرة على دراسة التفاعلات بين خلايا الورم الأرومي الدبقي البشري ومحور عصبي في الوقت الحقيقي. إثبات الإجراء سيكون جون زيبيكي، طالب دراسات عليا من مختبري.
لتجميع أطباق الاستزراع المجزأة، قم بتخفيف محلول مخزون الكولاجين إلى 500 ميكروغرام لكل ملليلتر في الماء المقطر المعقم واخلطه جيداً. مع ماصة نقل معقمة، تعبئة طبق ثقافة 35 ملليمتر مع مليلتر اثنين من محلول الكولاجين المخفف. ثم إمالة قليلا الطبق وإزالة الحل ترك طبقة رقيقة من الكولاجين وراء.
الاستغناء عن الحل في طبق 35 ملليمتر المقبل. كرر هذه العملية، مضيفا المزيد من الحل الكولاجين حسب الحاجة حتى يتم المغلفة جميع الأطباق. لتبلمر الكولاجين، في غطاء تدفق لارينار، منصات الشاش الرطب مع ثلاثة ملليلتر من هيدروكسيد الأمونيوم المركزة وتغطي الصواني لمدة 15 دقيقة.
إزالة منصات الشاش والسماح لأطباق 35 ملليمتر لتجف. بعد ذلك، استخدم ملف معدني لملف قبالة نقطة إبرة قياس 18 لجعل تلميح حادة. نقع الإبرة في 70٪ الإيثانول لتعقيم.
تطبيق الشحوم سيليكون إلى الجزء السفلي من الغرفة اجزأة. تأكد من وضع الشحوم بدقة وتداخلات في جميع الزوايا. يمكن أن تكون هذه التقنية صعبة للغاية لذلك نقترح عليك أن تأخذ وقتًا إضافيًا لممارسة تطبيق الكمية الصحيحة من الشحوم قبل إنشاء الغرف المجزأة من أجل ضمان نمو ممتاز.
كما أنه من المهم جداً العمل ببطء. إعداد غرف أكثر مما كنت تعتقد أنك سوف تحتاج لذلك لديك إضافات ينبغي أن يحدث شيء خاطئ. إزالة الغطاء من طبق 35 ملليمتر، عكس الطبق ووضع الخدوش على الغرفة.
اضغط لأسفل على الجزء السفلي من الطبق بلطف مع زوج من ملقط. عند تطبيق الحجرات الشحوم على الطبق، لا اضغط من الصعب جدا. خلاف ذلك ، فإن محاور عصبية لن تكون قادرة على النمو تحت في الغرفة المجاورة.
استخدام ملقط hemostatic لقلب بلطف أكثر من الطبق. أطلقوا الـ"ملقط" ضع كومة من الشحوم في قاعدة المقصورة المركزية.
ملء كل غرفة مع الوسط القاعدية العصبية المكملة. تحقق من وجود تسربات وتسرب الختم مع الشحوم السيليكون حسب الحاجة. مواصلة تجميع جميع الأطباق والثقافة وتخزينها بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
تسمح الغرفة المجزأة باستخدام الكواشف الدوائية المختلفة بالإضافة إلى القدرة على مقارنة وتباين النتائج بين بئرين على نفس اللوحة. لبذور الثقافات المعدة التي تحتوي على الغلاف العصبي GBM، أولاً استبدال المتوسطة مع بنك الفجيرة الوطني المكملة التي تحتوي على 10٪ FBS في كل غرفة مجزأة. بعد ذلك ، مع ماصة P20 التي تم تعيينها إلى 10 ميكرولترات ، ارسم جهازًا عصبيًا واحدًا GBM من طبق الثقافة.
ضع طرف الماصات في الغرفة البعيدة الأقرب إلى الغرفة المركزية دون لمس محور الدوران وطرد الغلاف العصبي GBM ببطء بحيث يسقط بلطف على المحاور. اترك الثقافة في خزانة السلامة البيولوجية لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة للسماح للغلاف العصبي GBM بإرفاقها. ويمكن استخدام هذه الطريقة لاختبار المركبات الدوائية لعلاج أورام الدماغ.
ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة على أمراض أخرى في الجهاز العصبي المحيطي والمركزي مثل اعتلال الأعصاب و التصلب المتعدد. في هذا البروتوكول، تم بذر محاور DRG المنقية مع HCGs التي شكلت GFAP وKI67 هياكل تشبه الورم مدمجة ضمن شبكة محور عصبي تشير إليها علامات الورم الأحمر GFAP في حين أن HGCs الفردية التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر المهاجرة إما في ارتباط أو بين محاور عصبية. إضافة HGCs على النخاع DRG oligodendrocyte الثقافات المشتركة أظهرت أن HGCs تهاجر بالاشتراك مع المحاور المصبحة الحمراء الملطخة بعيدا عن كتلة الورم من خلال تشكيل pseudopodia.
وبمجرد أن تم إتقان هذه التقنية، تمكنا من استخدامها لدراسة هجرة الخلايا الجذعية البشرية GBM في الوقت الحقيقي. كنا أيضا قادرا على دراسة الآثار على هجرة الخلايا بعد إضافة مثبطات جزيء صغير علاجي جديد. يظهر هنا مجال GBM الذي يغزو ثقافة المحور المحوري DRG oligodendrocyte النخاعي.
البروتوكول الموصوف هنا يمكن أن يكون بمثابة أساس لأنظمة حيوية أخرى ثلاثية الأبعاد الكائنات الحية السابقة المصممة لتقييم آثار العلاجات الدوائية الجديدة. وينبغي للمرء أن دائماً توخي الحذر عند التعامل مع الخلايا المشتقة من الإنسان. وينبغي ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة وينبغي إكمال التدريب على مسببات الأمراض المنقولة بالدم حتى يفهم المرء مخاطر العمل مع الأنسجة المشتقة من المريض.
يجب التعامل مع هيدروكسيد الأمونيوم بعناية ويجب عليك ارتداء القفازات ، ومعطف المختبر ، والعمل في غطاء محرك السيارة لمنع التعرض لهذه المادة الكيميائية.
