تحليل الموجات الاختزالية السائلة غير المستهدفة - قياس الطيف الشامل - Metabolomics من حبوب القمح

ويتأثر هذا المستقلب بعوامل مثل البيئة الوراثية وممارسات الإدارة. ويمكن أن يسمح فهم التفاعلات بين هذه العوامل بالتنبؤ والإدارة الأكثر دقة لغلة المنتج وجودته. ومن خلال دمج مرحلة متنقلة ثالثة، بدلاً من الطورين التقليديين، تتيح هذه التقنية فصل وكشف مجموعة أوسع من الأيضات.

يمكن تطبيق نواتج الأيض على أي مجال من مجالات علم الأحياء. أولاً، تحقيق فهم أعمق للكيمياء الحيوية للكائن الحي، والمساعدة في شرح استجابتها للإجهاد اللاأحيائي أو الحيوي فيما يتعلق بعلم وظائف الأعضاء. ثانياً، ربط المؤشرات الحيوية بالانزعاج الذي يجري دراسته.

كما الكحول الايزوبروبيل هو مذيب لزج، ينبغي أن يتم إدخاله بمعدل توهج منخفض، ووقت التوازن الكافي المستخدمة قبل زيادة التكوين إلى 98٪ هذه الخطوات سوف تمنع نظام الرسومات لوني من الإفراط في الضغط، والعودة خطأ، أو يحتمل أن تضر العمود التحليلي. للبدء في إعداد الحبوب، استخدم خلاط مختبر لطحن الحبوب. تشغيل الخلاط على سرعة عالية لمدة 20 ثانية ثم كرر.

إزالة جرة خلاط من القاعدة. اضغط على جانب جرة الخلاط لجلب أي حبة طحين الأرض الخشنة إلى سطح العينة. يمكن التخلص من الحبوب الخشنة الأرض، أو تخزينها.

نقل الحبوب الأرض ناعما من الخلاط إلى أنبوب جهاز طرد مركزي صغير البلاستيك 2 ملليلتر. في نفس يوم الاستخراج، قم بإعداد المذيبات المستخرجة، كما هو موضح في المخطوطة. بعد ذلك، تزن 200 ملليغرام من الحبوب الأرض ناعما في أنبوب جهاز طرد مركزي صغير مليلتر اثنين.

إضافة 500 ميكرولترات من المذيبات استخراج إلى الحبوب في الأنبوب. وبالإضافة إلى ذلك، وإعداد فارغة بإضافة 500 ميكرولترات من المذيبات استخراج إلى أنبوب فارغ. باستخدام المهيج، تعيين في 6، 500 دورة في الدقيقة، مزيج من المذيبات والحبوب لمدة 20 ثانية.

ثم، كرر لمدة 20 ثانية أخرى. ثم، الطرد المركزي الأنبوب في أربع درجات مئوية و 16، 100 مرة G، لمدة خمس دقائق. نقل فائقة إلى أنبوب بلاستيكي ملليلتر اثنين والاحتفاظ بيليه.

كرر عملية الاستخراج على بيليه مرتين. الجمع بين عظمى ثلاثة، مما أسفر عن حجم استخراج إجمالي من 1.5 ملليلتر تقريبا ومزيج من دوامة. لجعل عينة مجمعة من جميع مقتطفات الحبوب لاستخدامها لمراقبة الجودة، ونقل 55 ميكرولترات من كل استخراج الحبوب إلى أنبوب مليلتر دوامة.

ثم، نقل 50 aliliter نقا من هذه العينة المجمعة إلى قارورة الزجاج. نقل aliquot 50 ميكرولتر من كل استخراج عينة الحبوب إلى قارورة الزجاج. كما هو موضح في المخطوطة المكتوبة، أعد الحلول التي ستكون مطلوبة لقياس الطيف الكتلي اللوني السائل.

في يوم تحليل LCMS، وإعداد 100 ملليلتر من 5٪ الأسيتونتريل، تحتوي على 200 نانوغرام لكل ملليلتر لوسين إنكيفلين. إضافة 950 ميكرولترات من هذا الحل إلى قارورة الزجاج التي تحتوي على 50 ميكرولتر aliquot من استخراج الحبوب. اخلط المحتويات في القارورة عن طريق الدوامة.

أولاً، قم بإعداد معايرة الصكوك كما هو موضح في المخطوطة ودليل المستخدم لدى الشركة المصنعة. بعد ذلك، تطهير ومسح نظام السوائل LC باستخدام المذيبات الصف LCMS، بما في ذلك المرحلة المتنقلة والمذيبات غسل. اكويتبات نظام LC باستخدام طريقة LC بدء الظروف، وضمان أن ضغط العمود قد استقرت.

قم بإعداد جدول تسلسل الأدوات. حقن فور ماتودي في بداية تسلسل العينة للتحقق من معايرة الجهاز. تحليل الفراغات المذيبة والمحض أولاً، تليها عينات مراقبة الجودة المجمعة لتكييف النظام، ثم قائمة العينات العشوائية.

تشغيل نماذج مراقبة الجودة على فترات منتظمة، كما replicates الفنية. تشغيل نموذجين لمراقبة الجودة في نهاية التسلسل. أثناء تشغيل التسلسل، تحقق من جودة البيانات، بما في ذلك دقة الكتلة القياسية الداخلية وإمكانية إعادة إنتاج الإشارة.

للتحقق من إعادة إنتاج الإشارة، ينبغي أن يكون الفحص البصري للأطياف المتراكبة كافياً. وأدرجت أربعة معايير داخلية في الحل المستخدم لإعداد مستخلصات الحبوب. وخلال نظام المقاييس الموحدة، لوحظت دقة الكتلة الجيدة وقابلية التكرار الفردية للمعايير الداخلية بالنسبة لأساليب التأين الإيجابية والسلبية على حد سواء.

واستنادا إلى تحليل الفراغات، تم الحكم على 421 إشارة في الوضع السلبي و 835 إشارة في الوضع الإيجابي على أنها من القطع الأثرية. وكانت هذه الإشارات موجودة في الفراغات بكثافة تساوي أو تزيد على 5٪ من متوسط كثافة واحدة في عينات الحبوب. بعد إزالة القطع الأثرية ومزيد من تصفية البيانات، عاد الوضع السلبي 483 ميزات والوضع الإيجابي عاد 523 ميزات.

وكان ما يقرب من 250 من المعالم ذات الصلة بيولوجيا وتختلف اختلافا كبيرا في كثافة عبر أصناف القمح. ومن المهم أن نتذكر في هذا البروتوكول تدابير مراقبة الجودة، مثل إدراج الفراغات المُعدية والمعايير الداخلية والعينات المجمَّعة.