يستخدم التصوير المقطعي للتماسك البصري على نطاق واسع في التشخيص السريري لأمراض الشبكية المختلفة ، ولكن لا يزال من الصعب تطبيقه في نماذج الفئران. يصف هذا البروتوكول كيفية إدارة تقنية OCT في الحيوانات. يمكن تطبيق هذه التقنية على الحيوانات ذات أحجام مقلة العين المختلفة.
إنه يتيح التصوير المقطعي لشبكية العين غير الجراحي وعالي الدقة وفي الوقت الفعلي ، إلى جانب القياسات الكمية لسمك الشبكية. يساعد OCT في تشخيص اعتلال الشبكية من خلال تحديد ميزات الآفة مثل موقع الآفات ونطاقها وشكلها وحجمها ، بالإضافة إلى جميع تشوهات الشبكية المشتبه بها مثل الأوعية الدموية في شبكية العين. ينطبق هذا البروتوكول على الدراسات على الحيوانات أو أمراض قاع العين ، بما في ذلك أمراض الشبكية.
قبل البدء في الإجراء ، كن مستعدا واتبع البروتوكول خطوة بخطوة. قم بإجراء التجربة عندما يتم تخدير الحيوان. يجب أن يكون المرء قادرا على الحصول على صور OCT ذات نوعية جيدة بعد بعض الممارسة.
للبدء ، قم بتشغيل الكمبيوتر وبدء تشغيل البرنامج. انقر فوق زر برنامج الاختبار لإكمال برنامج الاختبار. بعد ذلك ، قم بتشغيل منظم الحرارة وتسخينه مسبقا إلى 37 درجة مئوية.
بعد اختبار البرنامج ، ابدأ إجراء وحدة OCT. قم بإنشاء موضوع جديد واملأ معلومات الماوس. ثم سخن البطانية الكهربائية وقم بتغطيتها بمناشف جراحية.
ضع الفأر المخدر على منصة البطانية الكهربائية وقم بتغطية كلتا العينين على الفور بجل هيالورونات الصوديوم الطبي. بعد ذلك ، ضع عدسة لاصقة 100D على قرنية الفأر مع ملامسة الجانب المقعر لهلام هيالورونات الصوديوم على سطح القرنية. بعد ذلك ، ضع الماوس على منصة الحيوانات الصغيرة ذات درجة الحرارة الثابتة لجهاز cSLO.
اضبط زاوية العدسة اللاصقة بالملقط لإبقاء بؤبؤ العين في وسط العدسة. قم بضبط التعديلات على الرأس لجعل وجه العين مستقيما للأمام. انقر فوق الزر OCT ، واختر وحدة الماوس ، وابدأ برنامج cSLO.
بعد ذلك ، استخدم ذراع التشغيل لتحريك العدسة المحددة مسبقا ببطء نحو العدسة اللاصقة. قم بإجراء المزيد من التعديلات لمحاذاة صورة القطب الأمامي الخلفي ، مع توسيطها عند رأس العصب البصري. بعد ذلك ، ابدأ برنامج OCT وانقر فوق شريط التقدم لأعلى ولأسفل حتى تظهر صورة OCT.
اضبط النطاق الأدنى بين 0 إلى 20 والحد الأقصى للنطاق بين 40 إلى 60. بعد ذلك ، اضبط مسافة العدسة المحددة مسبقا واتجاه الموضع حتى يتم الحصول على صورة OCT مثالية. حدد موضع المسح عن طريق تحريك الخط القياسي في cSLO.
ثم ، انقر فوق المتوسط لتراكب إشارة صورة cSLO و OCT وانقر فوق زر اللقطة للحصول على صورة SLO OCT. بعد التجربة ، قم بإزالة العدسة اللاصقة 100D وتطبيق هلام العين ليفوفلوكساسين لحماية القرنية. لتصحيح التقسيم الطبقي للشبكية ، انقر فوق فحص الحمل على واجهة OCT واستدعي صور OCT من نافذة منبثقة.
ثم انقر نقرا مزدوجا فوق الصورة في حاوية الوسائط لعرضها على الشاشة. بعد ذلك ، انقر فوق اكتشاف الطبقة لإكمال الطبقات التلقائية على شبكية العين. بعد تحديد الخط الفاصل على جانبي الطبقة المعدة للتحليل، انقر فوق تحرير الطبقة لضبط التباعد ونطاق الحد.
ثم قم بتعديل الخط عن طريق تحريك الدائرة الحمراء. لقياس سمك تصفيح الشبكية ، انقر فوق زر علامة القياس وحدد الخط الفاصل للطبقة المراد تحليلها لعرض حدود الطبقة على صورة OCT. ثم حدد الاتصال بالطبقة وابق على اتصال أثناء التنقل.
بعد ذلك ، حدد المنطقة لعرض النتائج وانقر فوق الموضع المراد تحليله على صورة OCT لإظهار خط القياس. انقر فوق العمود التالي للحصول على القياسات اللاحقة وللكشف عن البيانات السابقة. لقياس سمك الشبكية الكامل ، حدد السطر الأول والسطر السابع في القائمة في الزاوية اليمنى العليا.
ثم ، من ظهور بنية شبكية العين على حافة الحليمة البصرية ، قم بقياس أربع قيم على فترات تباعد 200 ميكرومتر على المسطرة الأفقية. أظهرت صور OCT لفئران C57BL / 6 طبقات شبكية مختلفة مع ترسيم واضح. في المقابل ، أظهرت فئران Vldlr بالضربة القاضية آفات غير طبيعية مفرطة الانعكاس.
أظهرت صور OCT بعض العصابات العاكسة الوسطى على أسطح شبكية العين لفئران Vldlr بالضربة القاضية. تلتصق هذه العصابات بوعاء الشبكية ، بما يتفق مع خصائص OCT للانفصال الزجاجي غير الكامل. ظهرت آفة واحدة مفرطة الانعكاس على الفضاء تحت الشبكية وانتشرت إلى الطبقة النووية الخارجية ، لكنها لم تخترق الطبقة الضفيرية الخارجية.
كان ظهور OCT لهذه الآفة متسقا مع النتائج المرضية. أظهر القسم المرضي أن الأوعية الدموية الجديدة اخترقت طبقة ظهارة الصباغ الشبكية ، والأجزاء الداخلية الخارجية للمستقبلات الضوئية ، والغشاء الخارجي المحدد ، مما أدى إلى غزو الطبقة النووية الخارجية ، ولكن ليس الطبقة الضفيرية الخارجية. شريط آخر من الآفة شديدة الانعكاس ، يقع في الفضاء تحت الشبكية ، لم يشمل الطبقة النووية الخارجية.
تمشيا مع النتائج المرضية ، لم يخترق هذا الأوعية الدموية تحت الشبكية الغشاء الخارجي المحدد. كشفت مقارنة سمك الشبكية للعين اليمنى في الاتجاهات الصدغية والأنفية والعلوية والسفلية للقطبية الخلفية بين المجموعتين أن سمك الشبكية لفئران Vldlr بالضربة القاضية كان أقل بكثير من سمك الفئران C57BL / 6J. عند تنفيذ البروتوكول ، ضع عدسة لاصقة 100D بشكل صحيح على القرنية ، ثم اضبط موضع الصورة.
حدد موقع المسح الضوئي وقم بتراكب الصورة قبل التصوير. بعد هذا الإجراء ، يكون الجزء الأمامي OCT ممكنا ، مما يتطلب تغيير المسافة بين العدسة المحددة مسبقا والقرنية. يمكن أن تظهر القرنية والغرفة الأمامية والقزحية والجسم الهدبي والعدسة.
توفر هذه التقنية أداة مهمة لأبحاث اعتلال الشبكية في نماذج الحيوانات الصغيرة ، مما يعزز الكشف غير الجراحي وقياس اعتلال الشبكية في البحوث الأساسية.
