يساعد هذا البروتوكول في إنشاء نماذج ATC و HNSCC PDX التي تعكس بشكل أفضل عدم تجانس الورم والتنوع الجزيئي والتنبؤ بنتائج العيادة. هذه التقنية سهلة التشغيل ، ولها معدل نجاح مرتفع ، ويمكن أن تكون مناسبة أيضا لنماذج PDX الأخرى. يمكن توسيع هذه التقنية نحو فحص حساسية الأدوية المضادة للسرطان لتوجيه العلاج الشخصي لمريض السرطان.
قد يواجه الفرد الذي لم يقم بهذه التقنية مطلقا بعض الصعوبات ويوصى بالاهتمام بكل تفاصيل المخطط. بعد الحصول على عينات ورم ATC و HNSCC في أنبوب طرد مركزي 50 ملم يحتوي على محلول HTK معقم ، قم بتطهيرها بنسبة 75٪ كحول. استخدم ملقط العيون المعقم لنقل أنسجة الورم إلى طبق بتري طوله ستة سنتيمترات مملوء بالمحلول الملحي ، وقم بتقطيعها إلى قطع صغيرة باستخدام شفرة.
بعد ذلك ، انقل القطع إلى طبق بتري جديد بطول ستة سنتيمترات يحتوي على محلول ملحي ولفه بغشاء مانع للتسرب. ضع الطبق الملفوف في صندوق ثلج ، واحمله إلى غرفة الحيوانات الخالية من مسببات الأمراض بالمقص والملقط وإبر التلقيح. بعد تخدير الماوس ، قم بإزالة الشعر الموجود على الصدر الجانبي الأيمن وقم بتطهير المنطقة بنسبة 75٪ كحول.
استخدم المقص لعمل شق بطول مليمترين في منتصف الصدر الجانبي الأيمن. باستخدام الملقط ، خذ المنديل من طبق بتري وضعه في إبرة المبزل. امسك الماوس وشد الجلد في موقع البزل.
أدخل المبزل مع قطعة الورم في شق إلى الفضاء تحت الجلد ، ثم انتقل إلى الجزء الخلفي من الكتف وادفع قلب المبزل. لحجز الأنسجة المتبقية باستخدام شاش معقم ، قم بإزالة المحلول الملحي من سطح الورم ، وتأكد من أنه ليس رطبا بشكل مفرط. ضع أربع إلى ست قطع من الأنسجة في أنبوب الحفظ بالتبريد للخلايا سعة 2 ملليلتر وأضف ملليلترا واحدا من محلول الحفظ بالتبريد في الأنبوب.
ثم ضع الأنبوب في صندوق تبريد متدرج وقم بتجميده عند 80 درجة مئوية تحت الصفر طوال الليل. أخيرا ، انقله إلى النيتروجين السائل. لإنعاش أورام نموذج PDX ، استخدم ملاقط Vernier لقياس طول وعرض الورم تحت الجلد مرة واحدة في الأسبوع.
حساب حجم الورم ورسم منحنى نمو الورم. ثم ، باستخدام المقص ، قم بقطع جلد الفأر الرحيم المحيط بالورم. إزالة الورم بالملقط ووضعه في طبق بتري.
إجراء عملية زرع الورم حتى الجيل الخامس من الفئران ، كما هو موضح سابقا. حدد نسيج الورم لماوس طراز ATC PDX من الجيل P5. قطعها إلى قطعتين إلى أربع قطع ملليمتر مكعب.
تلقيح هذه القطع تحت الجلد كما هو موضح سابقا ، إلى الجزء الخلفي الأيمن من فأر BALB / c عارية من أربعة إلى ستة أسابيع. عندما ينمو الورم من 50 إلى 150 ملم مكعب ، قسم الفئران إلى ثلاث مجموعات. بعد إعطاء لينفاتينيب ، سيسبلاتين ، والتحكم مرتين في الأسبوع ، قم بقياس وزن جسم الفأر.
أيضا ، قياس حجم الورم. أظهر تحليل الارتباط أن معدل نجاح بناء نموذج ATC PDX لم يكن يعتمد على العمر والجنس وقطر الورم ودرجة الورم والتمايز. أظهر معدل أخذ الورم في بناء نموذج HNSCC PDX أن درجة التمايز كانت مرتبطة بمعدل نجاح النموذج ، في حين أن المعلمات الأخرى لم تؤثر على معدل أخذ الورم.
أوضحت منحنيات نمو الورم لكل نموذج PDX أن عينات ATC تم تمريرها بثبات إلى جيل P3 ، بينما فشلت حالتان من عينات HNSCC في تكوين أورام بعد الانتقال إلى جيل P1. كان معدل نمو الورم لجيل P0 لمعظم نماذج PDX أبطأ نسبيا من المقاطع اللاحقة ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى تكيف البيئة المكروية للفأر. أظهر الفحص النسيجي المرضي أن أورام PDX تحتفظ بالخصائص المورفولوجية للأورام الأولية.
العلاج مع lenvatinib تثبيط نمو الورم بشكل كبير وأظهر انخفاض وزن الورم في نموذج ATC PDX مقارنة بالمجموعة الضابطة. بالإضافة إلى ذلك ، لم تظهر الفئران المعالجة باللينفاتينيب تغييرات ملحوظة في وزنها الإجمالي. أدت جرعة سيسبلاتين المفرطة إلى سمية كبيرة ، كما يتضح من فقدان الوزن وحتى الموت.
يجب غسل الأورام الطازجة عدة مرات بمحلول ملحي طبيعي قبل تقطيعها إلى قطع. من المحتمل أن يؤدي الخلط بواسطة عينات الورم المأخوذة منها وتلقيحها إلى تكوين الورم. يمكن استخدام هذا النموذج لأبحاث بيولوجيا الورم ، وفحص الأدوية ، والعلاج الشخصي.
