قدمت هذه الدراسة تلاعبا جراحيا لفضح DRG الصدري في الفئران المخدرة لتصوير الكالسيوم في الجسم الحي جنبا إلى جنب مع تسجيل مخطط كهربية القلب المتزامن. من خلال القيام بذلك ، نحاول الإجابة عما إذا كان الوخز بالإبر في PC6 على الثقبة يمكن أن ينشط الخلايا العصبية DRG وينظم مخطط كهربية القلب في نفس الوقت. تشمل التقنيات المستخدمة حاليا في دراسات الوخز بالإبر الفيزيولوجيا الكهربية في الجسم الحي أو المختبر ، والتتبع العصبي ، والاستراتيجيات المختلفة جنبا إلى جنب مع علم البصريات الوراثي وعلم الكيمياء الوراثي.
يساعد تصوير الكالسيوم في الجسم الحي الذي تم تقديمه في هذه الدراسة على فهم أفضل لأنشطة مجموعات الخلايا العصبية DRG الناجمة عن الوخز بالإبر ، كل ذلك في نماذج حيوانية مختلفة ، عبر التسجيلات الديناميكية وفي الوقت الفعلي. نظرا للانحناء الفسيولوجي للعمود الفقري الصدري في الجزء الصدري من واحد إلى خمسة أجزاء فقرية ، يصعب جدا الكشف عن DRGs الصدري. إلى جانب ذلك ، فإن تأثيرات إيقاعات القلب والرئة تتسبب في أن يكون تثبيت DRGs الصدري أمرا صعبا.
خلاف ذلك ، فإن التخدير التنفسي والحفاظ على حالة الفئران لساعات ليس بالأمر السهل. يكشف تصوير الكالسيوم في الجسم الحي عن نشاط مجموعات عصبية معينة باستخدام فئران الهندسة الوراثية. هذه هي المرة الأولى التي يتم فيها ملاحظة الخلايا العصبية DRG الصدرية في الجسم الحي.
يحقق هذا النهج مراقبة الأنشطة العصبية الناتجة عن التحفيز الجسدي أو الحشوي بالإضافة إلى تداخلها. أنشأ مختبرنا طرقا لتصوير الكالسيوم في الجسم الحي ل DRG الصدري والقطني ، وفي المستقبل ، سنراجع المستقبلات المتعلقة بعوامل بدء الوخز بالإبر ، وفرط حساسية نقاط التآكل ، والتفاعلات بين تحفيز الوخز بالإبر الجسدي والمدخلات الحشوية. بعد إجراء بضع القصبة الهوائية على فأر مخدر ، ضع الماوس في وضع الانبطاح على وسادة ساخنة.
قم بعمل شق طولي بطول سنتيمترين في وسط مؤخرة العنق ، يمتد من فقرات عنق الرحم الستة إلى الفقرات الصدرية الثلاثة. افصل بعناية بين الدهون والغدد السباتية في الجانب الأمامي من الفقرات الصدرية للفأر ، وتجنب الأوعية الدموية الموجودة أسفل الغدد. استخدم مقص زنبركي لقطع طبقات الجلد والعضلات ، بما في ذلك العضلة شبه المنحرفة.
أدخل ضام بين العضلات للمساعدة في مزيد من التعرض. قم بإزالة العضلات المرتبطة بمشبك الرأس والجزء المستقيم من عضلات الرقبة الطويلة ، مما يؤدي إلى تعريض العمليات الشائكة للصدرين. قم بإزاحة عضلات شبه العمود الفقري والعمود الفقري لفضح القوس الفقري من C6 إلى T3. قطع الاتصال بين صفيحة القوس الفقري والعملية المفصلية للصفيحة الصدرية
استخدم ملقطا دقيقا لإزالة العمليات المفصلية اليمنى واليسرى وعمليات الثدي في الصدر. قم بإزالة النسيج الضام الموجود فوقه. قم بتعريض العقدة الجذرية الظهرية أو الصدرية اليسرى أو اليمنى بعناية ، أو DRG ، مما يضمن سلامة epineurium على الجانب المختار.
ضع كرة قطنية صغيرة مبللة بمحلول ملحي دافئ فوق DRG المكشوف للحفاظ على الرطوبة. قم بتوصيل جهاز تخطيط القلب بالقطب السالب في الطرف العلوي الأيمن ، والسلك الأرضي على الطرف السفلي الأيمن ، والقطب الموجب في الطرف السفلي الأيسر. ضع الماوس على مسرح المشبك الشوكي المخصص مع وسادة التدفئة.
قم بتأمين الماوس باستخدام مقطعين متصلين بالعمليات المفصلية لعنق الرحم ستة والصدر الثلاثة. ضع المشبك الشوكي مع الماوس الآمن تحت المجهر متحد البؤر. ضع هدف الهواء لمسافة العمل الطويلة 10x / 0.32 فوق الصدر المكشوف 1 DRG.
اضبط حجم الخطوة على 25 ميكرومتر ودقة 512 × 512 أو 1 ، 024 × 1 ، 024 بكسل. اضبط المحور z للمرحلة لأعلى ولأسفل والتقط الصدر بالكامل 1 DRG. قم بتطبيق تحفيز الفرشاة على الطرف العلوي للفأر وقم بتقييم استجابة الخلايا العصبية DRG المصورة.
قم بإجراء تحفيز الأعصاب الطرفية عند تحفيز PC6 باستخدام محفز. في ظل الظروف الأساسية ، لم تظهر معظم الخلايا العصبية في الصدر 1 DRG مضان GFP. أدى التحفيز الجسدي إلى زيادة سريعة وعابرة في مضان GCaMP مع زيادة في عدد وشدة GFP.
أدت تحفيزات الأعصاب الطرفية عند تطبيق PC6 إلى تغييرات مماثلة في مضان GCaMP مثل التحفيز الجسدي. تم تمييز الخلايا العصبية وترقيمها داخل 1 DRG صدري واحد بعد التتبع باستخدام برنامج التصوير. اعتبرت الخلايا العصبية التي تظهر تغيرات في شدة التألق تتجاوز 130٪ من عتبة F0 استجابات إيجابية.
أظهر الرسم البياني أقطار مختلفة من الخلايا العصبية تستجيب لتحفيز الأعصاب المحيطية في PC6. أظهرت تحفيزات الأعصاب الطرفية عند تحفيز PC6 زيادة في معدل ضربات القلب.
