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Detection of Viral RNA by Fluorescence <em>in situ</em> Hybridization (FISH)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Sir Mortimer B. Davis Jewish General Hospital

McGill University 

Spinozerebell&auml;re Ataxie Typ 3 (SCA3) wird durch den Ausbau der Codierung CAG-Wiederholung im ATXN3-Gen verursacht. Interessanterweise reicht eine-1 Basenpaar Frameshift innerhalb einer (exp) CAG wiederholen Sie fortan &Uuml;bersetzung aus einem GCA-Frame f&uuml;hren w&uuml;rde, Generieren von Polyalanine statt bei Polyglutamin. Unsere Ergebnisse zeigen, dass transgene Ausdruck (exp) CAG ATXN3 zu-1 Frameshifting Veranstaltungen, gef&uuml;hrt, die sch&auml;dlichen in Drosophila und S&auml;ugetier-Neuronen sind. Umgekehrt war transgene Ausdruck bei Polyglutamin-Codierung (exp) CAA ATXN3 nicht giftig. Dar&uuml;ber hinaus (exp) CAG ATXN3 mRNA per se mit der Toxizit&auml;t beobachtet in unseren Modellen tr&auml;gt nicht. Unsere Beobachtungen zeigen, dass bei erweiterten Polyglutamin Landstriche in Drosophila und Maus Neuronen f&uuml;r die Entwicklung von einem Ph&auml;notyp nicht ausreichen. Daher schlagen wir vor,-1, die ribosomal Frameshifting die Toxizit&auml;t zugeordnet (exp) CAG tr&auml;gt wiederholt.

Erweiterte ATXN3 Frameshifting Ereignisse sind giftig in Drosophila und S&auml;ugetier-Neuron-Modelle.

Atassia spino-cerebellare tipo 3 (SCA3) &egrave; causato dall&#39;espansione della ripetizione CAG codifica del gene ATXN3. &Egrave; interessante notare che, un -1 coppia di basi frameshift che si verificano all&#39;interno di un CAG (exp) ripetere d&#39;ora in poi avrebbe portato alla traduzione da una cornice di GCA, generando polyalanine si estende invece delle poliglutamine. I nostri risultati mostrano che la espressione transgenica di (exp) CAG ATXN3 portato a-1 frameshifting eventi, che sono deleteri in Drosophila e neuroni dei mammiferi. Al contrario, espressione transgenica di codifica delle poliglutamine (exp) CAA ATXN3 non era tossico. Inoltre, (exp) CAG ATXN3 mRNA non contribuiscono per s&eacute; alla tossicit&agrave; osservata nei nostri modelli. Nostre osservazioni indicano che tratti delle poliglutamine espansi in neuroni della drosofila e il mouse sono insufficienti per lo sviluppo di un fenotipo. Quindi, noi proponiamo che ripete -1 frameshifting ribosomiale contribuisce alla tossicit&agrave; associata (exp) CAG.

Espansi ATXN3 frameshifting eventi sono tossici in Drosophila e modelli di neurone dei mammiferi.

&#x810A;&#x9AD3;&#x5C0F;&#x8111;&#x5171;&#x6D4E;&#x5931;&#x8C03;&#x7C7B;&#x578B; 3 &#xFF08;SCA3&#xFF09; &#x662F;&#x5728; ATXN3 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; CAG &#x91CD;&#x590D;&#x6269;&#x5C55;&#x6240;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x78B1;&#x57FA;&#x5BF9;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D1;&#x751F;&#x5185; (exp) CAG &#x91CD;&#x590D;&#x67AA;&#x652F;&#x7BA1;&#x5236;&#x6CD5; &#x300B; &#x6846;&#x67B6;&#x5C06;&#x4ECE;&#x6B64;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7FFB;&#x8BD1;-1&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x62C9;&#x4F38;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; polyglutamine&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; (exp) CAG ATXN3 &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;-1 frameshifting &#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6709;&#x5BB3;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;polyglutamine &#x7F16;&#x7801; (exp) &#x521B;&#x65B0;&#x827A;&#x4EBA;&#x7ECF;&#x7EAA;&#x516C;&#x53F8; ATXN3 &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;(exp) CAG ATXN3 mRNA &#x4E0D;&#x5229;&#x4E8E;&#x672C;&#x8EAB;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8868;&#x660E;&#x6269;&#x5927;&#x7684; polyglutamine &#x5927;&#x7247;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5173;&#x8054; (exp) CAG &#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; frameshifting-1 &#x91CD;&#x590D;&#x3002;

&#x6269;&#x5927;&#x7684; ATXN3 frameshifting &#x4E8B;&#x4EF6;&#x662F;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x6709;&#x6BD2;&#x3002;

Spinocerebellar ataxia type 3 (SCA3) is caused by the expansion of the coding CAG repeat in the ATXN3 gene. Interestingly, a -1 base-pair frameshift occurring within an (exp)CAG repeat would henceforth lead to translation from a GCA frame, generating polyalanine stretches instead of polyglutamine. Our results show that transgenic expression of (exp)CAG ATXN3 led to -1 frameshifting events, which are deleterious in Drosophila and mammalian neurons. Conversely, transgenic expression of polyglutamine-encoding (exp)CAA ATXN3 was not toxic. Furthermore, (exp)CAG ATXN3 mRNA does not contribute per se to the toxicity observed in our models. Our observations indicate that expanded polyglutamine tracts in Drosophila and mouse neurons are insufficient for the development of a phenotype. Hence, we propose that -1 ribosomal frameshifting contributes to the toxicity associated with (exp)CAG repeats.

Expanded ATXN3 frameshifting events are toxic in Drosophila and mammalian neuron models.

Ataxie spinoc&#xE9;r&#xE9;belleuse de type 3 (SCA3) est provoqu&#xE9;e par l&#x26;#39;expansion de l&#x26;#39;unit&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;tition CAG dans le g&#xE8;ne codant ATXN3. Fait int&#xE9;ressant, un malus de -1 paires de bases au sein d&#x26;#39;un cadre de lecture survenant r&#xE9;p&#xE9;titions CAG (exp) serait d&#xE9;sormais conduire &#xE0; une traduction d&#x26;#39;un cadre de GCA, g&#xE9;n&#xE9;rant polyalanine s&#x26;#39;&#xE9;tend au lieu de polyglutamine. Nos r&#xE9;sultats montrent que l&#x26;#39;expression transg&#xE9;nique de (exp) ACG ATXN3 conduit &#xE0; -1 &#xE9;v&#xE9;nements frameshifting, qui sont d&#xE9;l&#xE9;t&#xE8;res chez la drosophile et les neurones de mammif&#xE8;res. A l&#x26;#39;inverse, l&#x26;#39;expression transg&#xE9;nique de polyglutamine-encodage (exp) CAA ATXN3 n&#x26;#39;&#xE9;tait pas toxique. En outre, (exp) ACG ATXN3 ARNm ne contribue pas en soi &#xE0; la toxicit&#xE9; observ&#xE9;e dans nos mod&#xE8;les. Nos observations indiquent que les secteurs de polyglutamine expansion chez la drosophile et les neurones de souris ne sont pas suffisantes pour le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un ph&#xE9;notype. Par cons&#xE9;quent, nous proposons que -1 frameshifting ribosomique contribue &#xE0; la toxicit&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; r&#xE9;p&#xE9;titions CAG (exp).

&#xC9;largissement ATXN3 &#xE9;v&#xE9;nements Frameshifting sont toxiques chez la drosophile et les mod&#xE8;les de neurones de mammif&#xE8;res

&#x810A;&#x9AC4;&#x5C0F;&#x8133;&#x5931;&#x8ABF;&#x75C7;3&#x578B;&#xFF08;SCA3&#xFF09;&#x306F;ATXN3&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;CAG&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x200B;&#x200B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;&#x5F0F;&#xFF09;CAG&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;-1&#x5869;&#x57FA;&#x5BFE;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306F;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F38;&#x3073;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;GCA&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x5F0F;&#xFF09;CAG ATXN3&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6709;&#x5BB3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;-1&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;&#x5F0F;&#xFF09;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;CAA ATXN3&#x306F;&#x6709;&#x6BD2;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;&#x5F0F;&#xFF09;CAG ATXN3 mRNA&#x306F;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6BD2;&#x6027;&#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3084;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;-1&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x5F0F;&#xFF09;&#x306E;CAG&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x62E1;&#x5927;ATXN3&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x6709;&#x6BD2;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Spinocerebellar &#xC99D; &#xC720;&#xD615; 3 (SCA3)&#xC740; ATXN3 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCF54;&#xB529; CAG &#xBC18;&#xBCF5; &#xD33D;&#xCC3D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;,-1 (&#xD2B9;&#xAE09;) CAG &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC9C0;-&#xC30D; frameshift &#xBC18;&#xBCF5; &#xC774;&#xC81C;&#xBD80;&#xD130; &#xBC88;&#xC5ED; GCA &#xD504;&#xB808;&#xC784;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0;, polyglutamine &#xB300;&#xC2E0; &#xBED7;&#xC5B4; polyalanine&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; (&#xD2B9;&#xAE09;) CAG atxn3&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD; led&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4;-1 frameshifting &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, CAA ATXN3 polyglutamine &#xC778;&#xCF54;&#xB529; (&#xD2B9;&#xAE09;)&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD; &#xB3C5;&#xC131; &#xC544;&#xB2C8;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, (&#xD2B9;&#xAE09;) CAG ATXN3 Mrna&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB77C;&#xAE30;&#xBCF4;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xB3C5;&#xC131;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC640; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; polyglutamine &#xCC45;&#xC790;&#xB294; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; ribosomal frameshifting (&#xD2B9;&#xAE09;) CAG&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294;-1&#xC744; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; ATXN3 frameshifting &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;.

Ataxia espinocerebelosa tipo 3 (SCA3) es causada por la expansi&#xF3;n de la repetici&#xF3;n CAG en el gen codificante ATXN3. Curiosamente, un -1 de pares de bases del marco de lectura se producen dentro de una repetici&#xF3;n CAG (exp) en adelante dar&#xED;a lugar a la traducci&#xF3;n de un marco de ACG, lo que genera polialanina se extiende en lugar de poliglutamina. Nuestros resultados muestran que la expresi&#xF3;n transg&#xE9;nica de (exp) CAG ATXN3 llev&#xF3; a -1 frameshifting eventos, que son perjudiciales en Drosophila y neuronas de mam&#xED;feros. Por el contrario, la expresi&#xF3;n transg&#xE9;nica de poliglutaminas de codificaci&#xF3;n (exp) ATXN3 CAA no era t&#xF3;xico. Por otra parte, (exp) CAG ATXN3 ARNm no contribuye per se a la toxicidad observada en nuestros modelos. Nuestras observaciones indican que la ampliaci&#xF3;n de v&#xED;as de poliglutaminas en Drosophila y neuronas de rat&#xF3;n son suficientes para el desarrollo de un fenotipo. Por lo tanto, proponemos que frameshifting ribosomal -1 contribuye a la toxicidad asociada con repeticiones de CAG (exp).

Kishanda Vyboh

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