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An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

Alnylam Pharmaceuticals, Inc.

&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027; convertase &#x67AF;&#x8349;/&#x79D1;&#x4FE1;&#x7C7B;&#x578B; 9 &#xFF08;PCSK9&#xFF09; &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; (LDLR) &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;PCSK9 &#x635F;&#x5931;&#x589E;&#x52A0;&#x809D;&#x810F; LDLR &#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5E76;&#x51CF;&#x5C11;&#x8840;&#x6D46;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187; (&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;)&#xFF0C;&#x800C;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684; PCSK9 &#x6D3B;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x809D;&#x810F; LDLR &#x7EA7;&#x522B;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x6D46;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x3001; &#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x3001; &#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; Rna (siRNAs) &#x80FD;&#x591F;&#x7784;&#x51C6;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3001; &#x5927;&#x9F20;&#x3001; &#x975E;&#x4EBA;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269; (NHP) &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; PCSK9&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;PCSK9 &#x548C;&#x63A7;&#x5236; siRNAs &#x662F;&#x5728; lipidoid &#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50; &#xFF08;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8B66;&#x5BDF;&#xFF09; &#x8BA2;&#x5B9A;&#x3002;PCSK9 &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; siRNA &#x6C89;&#x9ED8; PCSK9 mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684; 50-70%&#x3002;PCSK9 &#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x4E2D;&#x51CF;&#x5C11;&#x88AB;&#x5173;&#x8054;&#x5230;&#x8840;&#x6D46;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x6D53;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 60%&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; RNAi &#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; 5&#39;-&#x7ADE;&#x8D5B;&#x3002;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; PCSK9 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;siRNAs &#x538B;&#x5236;&#x4EBA;&#x7C7B; PCSK9 &#x7B54;&#x95EE;&#x5168;&#x6587; &gt; 70%&#xFF0C;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; PCSK9 &#x8840;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5355;&#x4E00;&#x5242;&#x91CF;&#x7684; siRNA &#x9776;&#x5411; PCSK9 &#x5BFC;&#x81F4;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x6301;&#x4E45;&#x548C;&#x53EF;&#x9006;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x6D46; PCSK9&#x3001; &#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D; B&#xFF0C;&#x548C;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187; (HDLc) &#x6216;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F; (TGs)&#x3002;PCSK9 &#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6301;&#x7EED;&#x4E86;&#x5355;&#x4E00;&#x4E38;&#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7528;&#x836F;&#x540E; 3 &#x5468;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x9A8C;&#x8BC1; PCSK9 &#x4E0E; RNAi &#x7597;&#x6CD5;&#x9488;&#x5BF9;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x529E;&#x6CD5;&#x5177;&#x4F53;&#x964D;&#x4F4E;&#x9AD8;&#x8840;&#x538B;&#xFF0C;&#x4E3A; PCSK9 &#x964D;&#x4F4E;&#x4EE3;&#x7406;&#x5546;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6CBB;&#x7597;&#x9AD8;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x8840;&#x75C7;&#x7684;&#x672A;&#x6765;&#x6218;&#x7565;&#x53D1;&#x5C55;&#x94FA;&#x5E73;&#x9053;&#x8DEF;&#x3002;

&#x6CBB;&#x7597; RNAi &#x654F;&#x9510;&#x5730;&#x9488;&#x5BF9; PCSK9 &#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x5728;&#x556E;&#x9F7F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x8840;&#x6D46;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x975E;&#x4EBA;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;

Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) regulates low density lipoprotein receptor (LDLR) protein levels and function. Loss of PCSK9 increases LDLR levels in liver and reduces plasma LDL cholesterol (LDLc), whereas excess PCSK9 activity decreases liver LDLR levels and increases plasma LDLc. Here, we have developed active, cross-species, small interfering RNAs (siRNAs) capable of targeting murine, rat, nonhuman primate (NHP), and human PCSK9. For in vivo studies, PCSK9 and control siRNAs were formulated in a lipidoid nanoparticle (LNP). Liver-specific siRNA silencing of PCSK9 in mice and rats reduced PCSK9 mRNA levels by 50-70%. The reduction in PCSK9 transcript was associated with up to a 60% reduction in plasma cholesterol concentrations. These effects were shown to be mediated by an RNAi mechanism, using 5'-RACE. In transgenic mice expressing human PCSK9, siRNAs silenced the human PCSK9 transcript by >70% and significantly reduced PCSK9 plasma protein levels. In NHP, a single dose of siRNA targeting PCSK9 resulted in a rapid, durable, and reversible lowering of plasma PCSK9, apolipoprotein B, and LDLc, without measurable effects on either HDL cholesterol (HDLc) or triglycerides (TGs). The effects of PCSK9 silencing lasted for 3 weeks after a single bolus i.v. administration. These results validate PCSK9 targeting with RNAi therapeutics as an approach to specifically lower LDLc, paving the way for the development of PCSK9-lowering agents as a future strategy for treatment of hypercholesterolemia.

Therapeutic RNAi targeting PCSK9 acutely lowers plasma cholesterol in rodents and LDL cholesterol in nonhuman primates.

Proprot&eacute;ine convertase subtilisine/kexin type 9 (PCSK9) r&eacute;gule la fonction et des niveaux de prot&eacute;ine de faible densit&eacute; lipoprot&eacute;ine r&eacute;cepteurs (LDLR). Perte de PCSK9 LDLR augmente dans le foie et r&eacute;duit le cholest&eacute;rol plasmatique LDL (LDLc), alors que les activit&eacute; exc&eacute;dentaire de PCSK9 diminue foie LDLR niveaux et augmente le plasma LDLc. Ici, nous avons d&eacute;velopp&eacute; des actifs, intersp&eacute;cifique, petits interf&eacute;rents (siARN) capables de viser murin, rat, primates non-humains (PNH) et PCSK9 humaine. Pour les &eacute;tudes in vivo, ont &eacute;t&eacute; formul&eacute;es siRNAs PCSK9 et contr&ocirc;le une nanoparticule lipidoid (TNL). SiARN sp&eacute;cifiques foie silen&ccedil;age de PCSK9 chez les souris et les rats r&eacute;duit PCSK9 ARNm de 50 &agrave; 70 %. La r&eacute;duction PCSK9 transcription &eacute;tait associ&eacute;e &agrave; une r&eacute;duction de 60 % dans les concentrations plasmatiques de cholest&eacute;rol. Ces effets se sont r&eacute;v&eacute;l&eacute;s &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par un m&eacute;canisme d&#39;ARNi, utilisant 5&#39;-RACE. Chez les souris transg&eacute;niques exprimant la PCSK9 humaine, siRNAs r&eacute;duit au silence la transcription de PCSK9 humaine par &gt; 70 % et significativement r&eacute;duites PCSK9 prot&eacute;ines plasmatiques. Dans PSN, une dose unique de siARN ciblant la PCSK9 conduit &agrave; un abaissement rapide, durable et r&eacute;versible du plasma PCSK9, apolipoprot&eacute;ine B et LDLc, sans entra&icirc;ner d&#39;effets mesurables sur le cholest&eacute;rol HDL (HDLc) ou triglyc&eacute;rides (TGs). Les effets de PCSK9 silence a dur&eacute; 3 semaines apr&egrave;s une administration i.v. de bol. Ces r&eacute;sultats valident la PCSK9 ciblant avec Arni th&eacute;rapeutique comme une approche sp&eacute;cifiquement abaisser LDLc, ouvrant la voie au d&eacute;veloppement d&#39;agents abaissant la PCSK9 comme une strat&eacute;gie future pour le traitement de l&#39;hypercholest&eacute;rol&eacute;mie.

Th&eacute;rapeutique Arni ciblant la PCSK9 aigu&euml; abaisse le cholest&eacute;rol plasmatique chez les rongeurs et le cholest&eacute;rol LDL dans les primates non humains.

Proprotein-Konvertase Subtilisin/Kexin Typ 9 (PCSK9) regelt low-Density-Lipoprotein-Rezeptor (LDLR)-Protein-Ebene und Funktion. Verlust des PCSK9 erh&ouml;ht LDLR-Konzentrationen in Leber und Plasma LDL-Cholesterin (LDLc), verringert, w&auml;hrend &uuml;bersch&uuml;ssiges PCSK9 Aktivit&auml;t Leber sinkt LDLR Ebenen und Plasma LDLc erh&ouml;ht. Hier haben wir aktive, Kreuz-Arten, kleine st&ouml;rende RNAs (SiRNAs) f&auml;hig Murine, Ratte, nichtmenschlichen Primaten (NHP) und menschliche PCSK9 entwickelt. F&uuml;r in-vivo-Untersuchungen wurden PCSK9 und Kontrolle SiRNAs formuliert, in einem Lipidoid-Nanopartikel (LNP). Leber-spezifischen SiRNA Unterdr&uuml;ckender des PCSK9 in M&auml;usen und Ratten reduziert PCSK9 mRNA-Stufen um 50-70 %. Der R&uuml;ckgang der PCSK9 Abschrift wurde mit bis zu 60 % Erm&auml;&szlig;igung im Plasma-Cholesterin-Konzentrationen. Diese Effekte wurden gezeigt, durch einen Mechanismus zur RNAi, 5&#39;-RACE mit vermittelt werden. Bei transgenen M&auml;usen Ausdruck menschlichen PCSK9 SiRNAs zum Schweigen gebracht der menschlichen PCSK9-Abschrift von &gt; 70 % und deutlich reduzierten PCSK9-Plasma-Protein-Ebene. NHP f&uuml;hrte eine Einzeldosis SiRNA PCSK9 Ausrichtung einer raschen, langlebig und reversible Senkung des Plasma PCSK9, Apolipoprotein B und LDLc, ohne messbare Auswirkungen auf HDL-Cholesterin (HDLc) oder Triglyceride (TGs). Die Auswirkungen des PCSK9 zum Schweigen dauerte 3 Wochen nach einer einzigen Bolus i.v. Verabreichung. Diese Ergebnisse best&auml;tigen PCSK9 targeting mit RNAi-Therapeutika als Ansatz, speziell LDLc, ebnet den Weg f&uuml;r die Entwicklung des PCSK9-senkende Mittel als k&uuml;nftige Strategie zur Behandlung der Hypercholesterin&auml;mie zu senken.

Therapeutischen RNAi gezielt PCSK9 akut senkt Plasma-Cholesterin bei Nagern und LDL-Cholesterin in nicht-menschlichen Primaten.

Proprotein convertasi subtilisina/kexin type 9 (PCSK9) regola la funzione e livelli di proteina recettore (LDLR) bassa densit&agrave; delle lipoproteine. Perdita di PCSK9 aumenta i livelli LDLR nel fegato e riduce il colesterolo LDL di plasma (LDLc), mentre in eccesso PCSK9 attivit&agrave; diminuisce fegato LDLR livelli e aumenta al plasma LDLc. Qui, abbiamo sviluppato attivi, cross-specie, piccolo RNAs d&#39;interferenza (siRNAs) capace di targeting murino, ratto, nonhuman primate (NHP) e PCSK9 umana. Per studi in vivo, siRNA PCSK9 e controllo sono stati formulati in una nanoparticella di lipidoid (LNP). Fegato-specifici siRNA silenziamento di PCSK9 in topi e ratti ridotti livelli di mRNA PCSK9 da 50-70%. La riduzione della trascrizione PCSK9 &egrave; stata associata con una riduzione del 60% nelle concentrazioni plasmatiche colesterolo fino al. Questi effetti sono stati indicati per essere mediato da un meccanismo di RNAi, utilizzando 5&#39;-RACE. Nei topi transgenici che esprimono PCSK9 umana, siRNA tacere la trascrizione PCSK9 umana da &amp;gt; 70% e significativamente ridotti livelli di proteine del plasma PCSK9. Nel NHP, una singola dose di siRNA targeting PCSK9 ha comportato un abbassamento rapido, durevole e reversibile di plasma PCSK9, apolipoproteina B e LDLc, senza effetti misurabili sul colesterolo HDL (HDLc) o trigliceridi (TGs). Gli effetti di PCSK9 silenzio durarono per 3 settimane dopo una somministrazione i.v. bolo singolo. Questi risultati convalidano PCSK9 targeting con RNAi therapeutics come un approccio per abbassare in particolare LDLc, spianando la strada per lo sviluppo di agenti PCSK9-abbassamento come una strategia futura per il trattamento dell&#39;ipercolesterolemia.

Terapeutici RNAi targeting PCSK9 acutamente abbassa il colesterolo del plasma nei roditori e colesterolo LDL nei primati.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8EE2;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20;&#x30B5;&#x30C1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;/kexin &#x578B; 9 (PCSK9) &#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (LDLR) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PCSK9 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x3067; LDLR &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;LDLR &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; LDLc &#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x904E;&#x5270; PCSK9 &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; LDL &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; (LDLc) &#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7A2E;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;&#x306E; RNAs (Sirna) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x970A;&#x9577;&#x985E; &#xFF08;NHP&#xFF09;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; PCSK9 &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vivo &#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;PCSK9 &#x3068;&#x5236;&#x5FA1; siRNAs lipidoid &#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50; (LNP) &#x3067;&#x7B56;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PCSK9 &#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x809D;&#x56FA;&#x6709; siRNA &#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; PCSK9 mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F; 50-70% &#x524A;&#x6E1B;&#x3002;&#x524A;&#x6E1B; PCSK9 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x3067;&#x6700;&#x5927; 60% &#x524A;&#x6E1B;&#x8840;&#x6F3F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F; 5&#39; &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;RNAi &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;-&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; PCSK9 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067; siRNAs &#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x305F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; PCSK9 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76EE; 70 &#xFF05; &#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F; PCSK9 &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3002;NHP &#x306E; PCSK9 &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; siRNA &#x306E;&#x5358;&#x56DE;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x8010;&#x4E45;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; PCSK9&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D; B&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; LDLc&#x3001;HDL &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#xFF08;HDLc&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9; (TGs) &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x306A;&#x3057;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x52B9;&#x679C; PCSK9 &#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B9;&#x6295;&#x4E0E;&#x5F8C; 3 &#x9031;&#x9593;&#x7D9A;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PCSK9 RNAi &#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B; LDLc&#x3001;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x8840;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E; PCSK9 &#x4F4E;&#x4E0B;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x9053;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9F67;&#x6B6F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x8840;&#x6F3F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073; LDL &#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PCSK9 &#x3092;&#x92ED;&#x304F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CBB;&#x7642; RNAi &#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Proprotein convertase subtilisin/kexin &#xC720;&#xD615; 9 (PCSK9) &#xC800;&#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (LDLR) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. PCSK9 &#xC190;&#xC2E4; &#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; LDLR &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xACFC; PCSK9 &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC04; LDLR &#xB808;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; LDLc &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; LDL &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; (LDLc)&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xD65C;&#xC131;, &#xAC04; &#xC885;, &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs (siRNAs) murine, &#xC950;, nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958; (NHP), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PCSK9 &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xD560; &#xC218;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. In vivo &#xC5F0;&#xAD6C; PCSK9 &#xBC0F; &#xC81C;&#xC5B4; siRNAs lipidoid &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; (LNP)&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xC2DD;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC04; &#xAD00;&#xB828; siRNA &#xC950; &#xBC0F; &#xC950;&#xC5D0; pcsk9&#xC758; &#xC785;&#xC744; PCSK9 mRNA &#xB808;&#xBCA8; 50-70% &#xAC10;&#xC18C;. PCSK9 &#xAE30;&#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 60%&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 5&#39;-&#xACBD;&#xC8FC; RNAi &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PCSK9 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;, siRNAs &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PCSK9 &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &amp;gt; 70%&#xC640; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; PCSK9 &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xB9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;. NHP, PCSK9 &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; Sirna&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD22C;&#xC5EC; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131;&#xACFC; &#xAC00;&#xC5ED; &#xB0AE;&#xCD94;&#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; PCSK9, apolipoprotein B, &#xBC0F; LDLc, HDL &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; (HDLc) &#xC774;&#xB098; &#xC911;&#xC131; &#xC9C0;&#xBC29; (TGs)&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5C6;&#xC774;. &#xC785;&#xC744; pcsk9&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2E8;&#xC77C; bolus i.v. &#xAD00;&#xB9AC; &#xD6C4; 3 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC9C0;&#xC18D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; PCSK9 &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; RNAi &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xB0AE;&#xC740; LDLc, &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD608; &#xC99D;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBBF8;&#xB798; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; PCSK9 &#xB0AE;&#xCD94;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; pcsk9&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; RNAi &#xC124;&#xCE58;&#xB958;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC0F; LDL &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958;&#xC5D0; &#xB0AE;&#xCD98; &#xB2E4;.

Convertasa proprote&iacute;na subtilisin/kexin tipo 9 (PCSK9) regula la funci&oacute;n y los niveles de prote&iacute;na de receptor (LDLR) de lipoprote&iacute;na de baja densidad. P&eacute;rdida de PCSK9 aumenta los niveles LDLR en h&iacute;gado y reduce el colesterol del plasma LDL (cLDL), mientras que el exceso de actividad PCSK9 disminuye h&iacute;gado LDLR los niveles y aumenta el plasma LDLc. Aqu&iacute;, hemos desarrollado activos, entre especies, peque&ntilde;os interferentes RNAs (siRNAs) capaces de apuntar murino, rata, primates no humanos (NHP) y PCSK9 humana. Para estudios in vivo, siRNAs PCSK9 y control se formularon en una nanopart&iacute;cula de lipidoid (LNP). H&iacute;gado-espec&iacute;fica siRNA silenciamiento de PCSK9 en ratones y ratas redujo los niveles de mRNA de PCSK9 por 50-70%. La reducci&oacute;n en la transcripci&oacute;n de PCSK9 se asoci&oacute; con hasta una 60% de reducci&oacute;n en las concentraciones plasm&aacute;ticas de colesterol. Estos efectos fueron demostrados ser mediado por un mecanismo de RNAi, con 5&#39;-RACE. En ratones transg&eacute;nicos que expresaban humano PCSK9, siRNAs silenciado la transcripci&oacute;n PCSK9 humana por &gt; 70% y redujo significativamente los niveles de prote&iacute;na de PCSK9 plasma. En NHP, una dosis &uacute;nica de siRNA a PCSK9 dio lugar a una reducci&oacute;n r&aacute;pida, duradera y reversible del plasma PCSK9, Apolipoprote&iacute;na B y cLDL, sin efectos mensurables en el colesterol HDL (cHDL) o triglic&eacute;ridos (TGs). Los efectos de PCSK9 silenciamiento duraron 3 semanas despu&eacute;s de una administraci&oacute;n de i.v. bolo &uacute;nico. Estos resultados validan PCSK9 targeting con f&aacute;rmacos basados en RNAi como un enfoque para reducir espec&iacute;ficamente LDLc, allanando el camino para el desarrollo de agentes reductores PCSK9 como una estrategia de futuro para el tratamiento de la hipercolesterolemia.

ARNi terap&eacute;utico dirigidos a PCSK9 agudo disminuye el colesterol plasm&aacute;tico en roedores y el colesterol LDL en primates no humanos.

Nanoparticles are used for delivering therapeutics into cells. However, size, shape, surface chemistry and the presentation of targeting ligands on the surface of nanoparticles can affect circulation half-life and biodistribution, cell-specific internalization, excretion, toxicity and efficacy. A variety of materials have been explored for delivering small interfering RNAs (siRNAs)--a therapeutic agent that suppresses the expression of targeted genes. However, conventional delivery nanoparticles such as liposomes and polymeric systems are heterogeneous in size, composition and surface chemistry, and this can lead to suboptimal performance, a lack of tissue specificity and potential toxicity. Here, we show that self-assembled DNA tetrahedral nanoparticles with a well-defined size can deliver siRNAs into cells and silence target genes in tumours. Monodisperse nanoparticles are prepared through the self-assembly of complementary DNA strands. Because the DNA strands are easily programmable, the size of the nanoparticles and the spatial orientation and density of cancer-targeting ligands (such as peptides and folate) on the nanoparticle surface can be controlled precisely. We show that at least three folate molecules per nanoparticle are required for optimal delivery of the siRNAs into cells and, gene silencing occurs only when the ligands are in the appropriate spatial orientation. In vivo, these nanoparticles showed a longer blood circulation time (t(1/2) ≈ 24.2 min) than the parent siRNA (t(1/2) ≈ 6 min).

Klaus Charisse

Alnylam Pharmaceuticals, Inc.

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment