imaging-phluorin-tagged-receptor-insertion-to-plasma-membrane-primary

Imaging pHluorin-tagged Receptor Insertion to the Plasma Membrane in Primary Cultured Mouse Neurons

A better understanding of the mechanisms governing receptor trafficking between the plasma membrane (PM) and intracellular compartments requires an ...

The Jackson Laboratory

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; D&#x2082; &#x53D7;&#x4F53; (DRD2) &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x5956;&#x8D4F;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x4F4E; DRD2 &#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x836F;&#x7269;&#x6EE5;&#x7528;&#x3001; &#x80A5;&#x80D6;&#x3001; &#x6CE8;&#x610F;&#x7F3A;&#x9677;/&#x591A;&#x52A8;&#x969C;&#x788D;&#x3001; &#x6291;&#x90C1;&#x60C5;&#x7EEA;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DRD2 &#x662F;&#x5F53;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x6297;&#x7CBE;&#x795E;&#x75C5;&#x836F;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; DRD2 &#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x5176;&#x8131;&#x654F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x662F;&#x5426; DRD2 &#x662F;&#x56DE;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x56DE;&#x6536;&#x6216;&#x9488;&#x5BF9;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x523A;&#x6FC0;&#x540E;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (TIRFM) &#x5230; superecliptic pHluorin DRD2 &#x56FE;&#x50CF;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8FDB;&#x6B65;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316; DRD2 &#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7B49;&#x591A;&#x523A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x63D2;&#x5165;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684; DRD2 &#x63D2;&#x5165;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3002;&#x6A2A;&#x5411;&#x6269;&#x6563;&#x7684; DRD2 &#x6307;&#x51FA;&#x540E;&#x5176;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; DRD2 &#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#xFF1A; &#x672C;&#x6784;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0E;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5FAA;&#x73AF;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; Rab4 &#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x672C;&#x6784; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#xFF0C;&#x800C; Rab11 &#x662F;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x626E;&#x6F14;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A; DRD2 &#x51FD;&#x6570;&#xFF1A; Rab4 &#x654F;&#x611F;&#x672C;&#x6784; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x786E;&#x5B9A; DRD2&#x3001; &#x7A33;&#x6001;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x800C; Rab11 &#x654F;&#x611F;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56; DRD2 &#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; resensitization &#x7684; DRD2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03; endosomal &#x56DE;&#x6536; DRD2 &#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;

&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; endosomal D&#x2082; &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Dopamine Dâ‚‚ receptor (DRD2) is important for normal function of the brain reward circuit. Lower DRD2 function in the brain increases the risk for substance abuse, obesity, attention deficit/hyperactivity disorder, and depression. Moreover, DRD2 is the target of most antipsychotics currently in use. It is well known that dopamine-induced DRD2 endocytosis is important for its desensitization. However, it remains controversial whether DRD2 is recycled back to the plasma membrane or targeted for degradation following dopamine stimulation. Here, we used total internal reflection fluorescent microscopy (TIRFM) to image DRD2 with a superecliptic pHluorin tagged to its N terminus. With these technical advances, we were able to directly visualize vesicular insertion events of DRD2 in cultured mouse striatal medium spiny neurons. We showed that insertion of DRD2 occurs on neuronal somatic and dendritic surfaces. Lateral diffusion of DRD2 was observed following its insertion. Most importantly, using our new approach, we uncovered two functionally distinct recycling pathways for DRD2: a constitutive recycling pathway and a dopamine activity-dependent recycling pathway. We further demonstrated that Rab4 plays an important role in constitutive DRD2 recycling, while Rab11 is required for dopamine activity-dependent DRD2 recycling. Finally, we demonstrated that the two DRD2 recycling pathways play distinct roles in determining DRD2 function: the Rab4-sensitive constitutive DRD2 recycling pathway determines steady-state surface expression levels of DRD2, whereas the Rab11-sensitive dopamine activity-dependent DRD2 recycling pathway is important for functional resensitization of DRD2. Our findings underscore the significance of endosomal recycling in regulation of DRD2 function.

Identification of two functionally distinct endosomal recycling pathways for dopamine Dâ‚‚ receptor.

R&eacute;cepteur de dopamine D2 (DRD2) est important pour la fonction normale du circuit de la r&eacute;compense du cerveau. Fonction DRD2 inf&eacute;rieur dans le cerveau augmente le risque de toxicomanie, l&#39;ob&eacute;sit&eacute;, trouble hyperactivit&eacute; avec d&eacute;ficit de l&#39;attention et la d&eacute;pression. En outre, DRD2 est la cible de la plupart des antipsychotiques en cours d&#39;utilisation. Il est bien connu que l&#39;endocytose DRD2 induite par la dopamine est important pour sa d&eacute;sensibilisation. Cependant, il reste controvers&eacute; DRD2 est recycl&eacute; vers la membrane plasmique ou cibl&eacute;es pour d&eacute;gradation suite &agrave; la stimulation de la dopamine. Ici, nous avons utilis&eacute; une r&eacute;flexion interne totale microscopie fluorescente (TIRFM) image DRD2 avec un pHluorin superecliptic tag &agrave; son terminus de N. Avec ces progr&egrave;s techniques, nous avons pu visualiser directement les &eacute;v&eacute;nements d&#39;insertion v&eacute;siculaire de DRD2 dans les neurones &eacute;pineux moyen striataux cultiv&eacute;s de souris. Nous avons montr&eacute; qu&#39;insertion de DRD2 se produit sur des surfaces neuronales somatiques et dendritiques. Diffusion lat&eacute;rale de DRD2 a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e apr&egrave;s son insertion. Surtout, &agrave; l&#39;aide de notre nouvelle approche, nous avons d&eacute;couvert deux fonctionnellement distincts de voies de recyclage pour DRD2 : une voie de recyclage constitutive et une voie recyclage activit&eacute; d&eacute;pendante de la dopamine. De plus, nous avons d&eacute;montr&eacute; que Rab4 joue un r&ocirc;le important dans le recyclage de DRD2 constitutive, tandis que Rab11 est n&eacute;cessaire pour l&#39;activit&eacute; d&eacute;pendante de la dopamine DRD2 recyclage. Enfin, nous avons d&eacute;montr&eacute; que les deux voies de recyclage DRD2 jouent des r&ocirc;les distincts pour d&eacute;terminer la fonction de DRD2 : la voie recyclage de Rab4 sensible sur DRD2 constitutive d&eacute;termine des niveaux d&#39;expression de surface stationnaire de DRD2, tandis que la voie de recyclage Rab11 sensible dopamine activit&eacute; d&eacute;pendante DRD2 est importante pour la resensibilisation fonctionnelle de DRD2. Nos r&eacute;sultats soulignent l&#39;importance des endosomes de recyclage dans la r&eacute;gulation de la fonction DRD2.

Identification des deux voies de recyclage endosomal fonctionnellement distinctes pour les r&eacute;cepteurs D2 de la dopamine.

Dopamin-D&#x2082;-Rezeptors (DRD2) ist wichtig f&uuml;r die normale Funktion des Gehirns Belohnung Stromkreises. Untere DRD2-Funktion im Gehirn erh&ouml;ht das Risiko f&uuml;r Substanzmissbrauch, Adipositas, Aufmerksamkeits-Defizit/Hyperaktivit&auml;t-St&ouml;rung und Depression. Dar&uuml;ber hinaus ist DRD2 das Ziel von den meisten Antipsychotika derzeit im Einsatz. Es ist bekannt, dass Dopamin-induzierten DRD2 Endozytose ist wichtig f&uuml;r die Desensibilisierung. Jedoch bleibt jedoch umstritten, ob DRD2 zur&uuml;ck zu der Plasmamembran Recycling oder f&uuml;r Abbau gezielt, nach Anregung von Dopamin. Hier verwendeten wir Totalreflexion Fluoreszenz-Mikroskopie (TIRFM) DRD2-Bild mit einem Superecliptic-pHluorin auf ihren N-Endpunkt markiert. Mit dieser technischen Fortschritte konnten wir vesikul&auml;ren Einf&uuml;gung Ereignisse des DRD2 in Kulturen von M&auml;use-Striatale mittlere stachelige Neuronen direkt sichtbar zu machen. Wir zeigten, dass die Einf&uuml;gung des DRD2 auf neuronale somatischen und dendritischen Fl&auml;chen auftritt. Laterale Diffusion des DRD2 wurde beobachtet, nach seiner einsetzen. Am wichtigsten ist, mit unseren neuen Ansatz, wir zwei funktionell unterschiedlichen recycling Wege f&uuml;r DRD2 entdeckt: einer konstitutiven Wiederverwertung und Dopamin leistungsabh&auml;ngige Wiederverwertung Weg. Wir zeigten weiter, dass Rab4 eine wichtige Rolle in der konstitutiven DRD2-recycling, spielt w&auml;hrend Rab11 f&uuml;r Dopamin leistungsabh&auml;ngige DRD2 recycling erforderlich ist. Schlie&szlig;lich haben wir bewiesen, dass die zwei DRD2-recycling-Bahnen unterschiedliche Rollen spielen bei der Bestimmung der DRD2-Funktion: die Rab4-Sensitive konstitutive DRD2 Wiederverwertung Pathway bestimmt station&auml;ren Oberfl&auml;che Ausdruck Niveaus des DRD2, die Rab11-Sensitive Dopamin leistungsabh&auml;ngige DRD2 Wiederverwertung Pathway ist wichtig f&uuml;r die funktionelle Resensitization der DRD2. Unsere Ergebnisse unterstreichen die Bedeutung der Endosomen recycling in der Regulierung der DRD2-Funktion.

Ermittlung von zwei funktionell unterschiedlichen Endosomen Wiederverwertung Wege f&uuml;r Dopamin-D&#x2082;-Rezeptors.

Recettore D&#x2082; di dopamina (DRD2) &egrave; importante per la normale funzione del circuito di ricompensa del cervello. DRD2 inferiore funzione nel cervello aumenta il rischio di abuso di sostanze, obesit&agrave;, deficit di attenzione/iperattivit&agrave; e depressione. Inoltre, DRD2 &egrave; la destinazione della maggior parte dei antipsicotici attualmente in uso. &Egrave; ben noto che endocitosi DRD2 indotta da dopamina sono importante per la desensibilizzazione. Tuttavia, resta controverso se DRD2 &egrave; riciclato al membrana del plasma o mirati per degradazione dopo stimolazione della dopamina. Qui, abbiamo utilizzato la riflessione interna totale microscopia fluorescente (TIRFM) all&#39;immagine DRD2 con un pHluorin superecliptic messo al suo capolinea N. Con questi progressi tecnici, siamo stati in grado di visualizzare direttamente gli eventi di inserimento vescicolare di DRD2 nei neuroni spinosi medi di topo colto striatal. Abbiamo mostrato che inserimento di DRD2 si verifica sulle superfici somatiche e dendritiche neuronale. Diffusione laterale di DRD2 &egrave; stata osservata dopo il suo inserimento. Soprattutto, utilizzando il nostro nuovo approccio, abbiamo scoperto due funzionalmente distinti percorsi di riciclaggio per DRD2: un percorso di riciclaggio costitutivo e un percorso di riciclaggio di attivit&agrave;-dipendente della dopamina. Abbiamo ulteriormente dimostrato che Rab4 svolge un ruolo importante nel riciclaggio di DRD2 costitutiva, mentre Rab11 &egrave; richiesto per la dopamina attivit&agrave;-dipendente DRD2 riciclaggio. Infine, abbiamo dimostrato che le due vie di riciclaggio DRD2 svolgono ruoli distinti nella determinazione DRD2 funzione: il sensibile Rab4 costitutivo DRD2 riciclaggio pathway determina i livelli di steady-state espressione superficiale di DRD2, considerando che il riciclaggio via di DRD2 attivit&agrave;-dipendente della dopamina Rab11-sensibile &egrave; importante per resensitization funzionale di DRD2. I nostri risultati sottolineano l&#39;importanza del riciclaggio nel regolamento della funzione di DRD2 endosomal.

Identificazione di due percorsi riciclaggio endosomal funzionalmente distinti per il recettore D&#x2082; della dopamina.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; D&#x2082; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;DRD2&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x306E;&#x5831;&#x916C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4F4E;&#x3044; DRD2 &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x8133;&#x5185;&#x7269;&#x8CEA;&#x4E71;&#x7528;&#x3001;&#x80A5;&#x6E80;&#x3001;&#x6CE8;&#x610F;&#x6B20;&#x9665;/&#x591A;&#x52D5;&#x6027;&#x969C;&#x5BB3;&#x3001;&#x3046;&#x3064;&#x75C5;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;DRD2 &#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x6297;&#x7CBE;&#x795E;&#x75C5;&#x85AC;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3088;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x8A98;&#x8D77; DRD2 &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;DRD2 &#x3092;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F8C;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x8AD6;&#x4E89;&#x304C;&#x6B8B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (TIRFM) &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8; DRD2 superecliptic pHluorin &#x3068;&#x305D;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x30BF;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x57F9;&#x990A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x4E2D;&#x306E;&#x3068;&#x3052;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DRD2 &#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x633F;&#x5165; DRD2 &#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DRD2 &#x306E;&#x5074;&#x65B9;&#x62E1;&#x6563;&#x305D;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; DRD2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x767A;&#x898B;: &#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; Rab11 &#x306F;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; DRD2 &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;Rab4 &#x69CB;&#x6210; DRD2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 2 &#x3064;&#x306E; DRD2 &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF; DRD2 &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;: Rab11 &#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58; DRD2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A; resensitization DRD2 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; Rab4 &#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x69CB;&#x6210; DRD2 &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; DRD2&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E; DRD2 &#x6A5F;&#x80FD;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; D&#x2082; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; D&#x2082; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (DRD2) &#xB1CC; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xD68C;&#xB85C;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; DRD2 &#xAE30;&#xB2A5; &#xC8FC;&#xC758; &#xACB0;&#xD54D;/&#xACFC;&#xC789; &#xD589;&#xB3D9; &#xC7A5;&#xC560;, &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0A8;&#xC6A9;, &#xBE44;&#xB9CC;, &#xC6B0;&#xC6B8;&#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC704;&#xD5D8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, drd2&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC911;&#xC778; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC815;&#xC2E0;&#xBCD1;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC720;&#xB3C4; DRD2 endocytosis &#xADF8;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB454;&#xAC10;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; DRD2 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB610;&#xB294; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xBD80; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC804;&#xCCB4; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TIRFM) DRD2 superecliptic pHluorin &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD0DC;&#xADF8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC801; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC9C1;&#xC811; &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; striatal &#xC911;&#xAC04; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; drd2&#xC758; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC0BD;&#xC785; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; DRD2 &#xC0BD;&#xC785; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Drd2&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xD655;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; drd2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC1D;&#xD600; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;: &#xC81C;&#xC815; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD1B5;&#xB85C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; rab11&#xB294; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; DRD2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; Rab4 &#xC81C;&#xC815; DRD2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; DRD2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xACBD;&#xB85C; DRD2 &#xAE30;&#xB2A5; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xC2DC;&#xC5F0;: Rab4 &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC81C;&#xC815; DRD2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD1B5;&#xB85C; Rab11 &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; DRD2 &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD1B5;&#xB85C; DRD2 &#xAE30;&#xB2A5; resensitization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC758; DRD2, &#xACB0;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; endosomal DRD2 &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBC11;&#xC904;.

2 &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; endosomal &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xACBD;&#xB85C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; D&#x2082; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Receptor D&#x2082; de dopamina (DRD2) es importante para la funci&oacute;n normal del circuito de recompensa del cerebro. Funci&oacute;n DRD2 inferior en el cerebro aumenta el riesgo de abuso de sustancias, obesidad, d&eacute;ficit de atenci&oacute;n/hiperactividad y la depresi&oacute;n. Por otra parte, DRD2 es el objetivo de antipsic&oacute;ticos m&aacute;s actualmente en uso. Es bien sabido que endocitosis DRD2 inducida por la dopamina es importante para su desensibilizaci&oacute;n. Sin embargo, sigue siendo pol&eacute;mico DRD2 es reciclado a la membrana plasm&aacute;tica o destinados a la degradaci&oacute;n despu&eacute;s del est&iacute;mulo dopamina. Aqu&iacute;, utilizamos la reflexi&oacute;n interna total microscop&iacute;a fluorescente (TIRFM) a imagen DRD2 con un pHluorin de superecliptic con la etiqueta a su N-terminal. Con estos avances t&eacute;cnicos, hemos sido capaces de visualizar directamente eventos de inserci&oacute;n vesicular de DRD2 en neuronas espinosas medio de rat&oacute;n cultivadas estriado. Demostramos que inserci&oacute;n de DRD2 ocurre en superficies som&aacute;ticas y dendr&iacute;ticas neuronales. Difusi&oacute;n lateral de DRD2 observ&oacute; tras su inserci&oacute;n. Lo m&aacute;s importante, con nuestro nuevo enfoque, destapamos funcionalmente diferentes v&iacute;as de reciclaje para DRD2: un camino de reciclaje constitutivo y una v&iacute;a de reciclaje de dependientes de actividad de dopamina. Adem&aacute;s, demostramos que Rab4 desempe&ntilde;a un papel importante en el reciclaje de DRD2 constitutiva, mientras que Rab11 se requiere para el reciclaje de dopamina dependientes de actividad DRD2. Finalmente, demostramos que las dos v&iacute;as de reciclaje DRD2 jugar diferentes roles en la determinaci&oacute;n de la funci&oacute;n DRD2: la v&iacute;a sensible Rab4 constitutiva DRD2 reciclaje determina los niveles de la expresi&oacute;n superficial de estado estacionario de DRD2, mientras que la Rab11 sensible dopamina dependientes de actividad DRD2 v&iacute;a reciclaje es importante para resensitization funcional de DRD2. Nuestros resultados subrayan la importancia de endosomal reciclaje en regulaci&oacute;n de la funci&oacute;n DRD2.

Brittany D. Roy

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