Development of a Negative Selectable Marker for <em>Entamoeba histolytica</em>

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

University of Virginia Health System

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&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5143;&#x7D20; GAAC &#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x590D;&#x6742;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

Transcriptional control of the hgl5 gene of Entamoeba histolytica is mediated through an unusual core promoter composed of TATA, GAAC and Initiator elements. In the hgl5 promoter the GAAC element (AATGAACT) determines the site and rate of transcription initiation. Here we tested the role of the GAAC element in transcription activation from upstream regulatory elements (UREs) in the hgl5 promoter. We also examined the function of the GAAC element in the ferredoxin (fdx) promoter and characterized the protein binding to the GAAC element. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) demonstrated that the GAAC region is necessary for higher-order nuclear protein complex assembly. The function of the GAAC element in transcription activation mediated by UREs revealed that mutation of the GAAC element did not affect transcription activation mediated by the hgl5 URE4 but abrogated activation by the hgl5 URE3. We compared the role of the GAAC elements in the hgl5 and fdx promoters. Competitive gel shift assays were consistent with the same nuclear protein binding to the GAAC elements in both genes. Mutation of the GAAC element in the fdx gene decreased reporter gene expression, however, in contrast to hgl5 gene, had no effect on the site of transcription initiation. These results support a role for the GAAC element in assembly of nuclear proteins at the core promoter and in transcription activation mediated by URE3. The differing effect on transcription initiation in the hgl5 and fdx genes upon mutation of the GAAC element suggests a context-dependence of the GAAC-binding protein in gene expression.

Context-dependent roles of the Entamoeba histolytica core promoter element GAAC in transcriptional activation and protein complex assembly.

R&eacute;gulation transcriptionnelle du g&egrave;ne hgl5 de Entamoeba histolytica est m&eacute;di&eacute;e par un promoteur du core inhabituel compos&eacute; d&#39;&eacute;l&eacute;ments TATA, GAAC et initiateur. Dans le hgl5 promoteur du GAAC &eacute;l&eacute;ment (AATGAACT) d&eacute;termine le site et le taux d&#39;initiation de la transcription. Ici, nous avons test&eacute; le r&ocirc;le de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC dans activation de la transcription des &eacute;l&eacute;ments de r&eacute;gulation en amont (res) dans le promoteur hgl5. Aussi, nous avons examin&eacute; le fonctionnement de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC dans le promoteur de la ferr&eacute;doxine (fdx) et caract&eacute;ris&eacute; la liaison aux prot&eacute;ines de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC. Analyses de d&eacute;calage de mobilit&eacute; &eacute;lectrophor&eacute;tique (EMSA) a d&eacute;montr&eacute; que la r&eacute;gion GAAC est n&eacute;cessaire pour l&#39;assemblage des complexes prot&eacute;ine nucl&eacute;aire d&#39;ordre sup&eacute;rieur. La fonction de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC dans activation de la transcription par UREs a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la mutation de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC n&#39;affecte pas activation de la transcription m&eacute;di&eacute;e par le URE4 de hgl5 mais activation abrog&eacute;e par le URE3 de hgl5. Nous avons compar&eacute; le r&ocirc;le des &eacute;l&eacute;ments dans les promoteurs hgl5 et fdx GAAC. Analyses de d&eacute;calage de gel concurrentiels &eacute;taient conformes &agrave; la m&ecirc;me liaison de prot&eacute;ines nucl&eacute;aires aux &eacute;l&eacute;ments GAAC dans les deux g&egrave;nes. Mutation de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC dans l&#39;expression du g&egrave;ne rapporteur fdx g&egrave;ne diminue, cependant, contrairement au g&egrave;ne de la hgl5, a eu aucun effet sur le site d&#39;initiation de la transcription. Ces r&eacute;sultats appuient un r&ocirc;le pour l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC dans l&#39;assemblage des prot&eacute;ines nucl&eacute;aires dans le promoteur du core et activation de la transcription par URE3. Les effets diff&eacute;rents sur l&#39;initiation de la transcription des g&egrave;nes hgl5 et fdx sur la mutation de l&#39;&eacute;l&eacute;ment GAAC sugg&egrave;rent une d&eacute;pendance en contexte de la prot&eacute;ine liant le GAAC dans l&#39;expression des g&egrave;nes.

R&ocirc;les d&eacute;pend du contexte de l&#39;Entamoeba histolytica promoteur &eacute;l&eacute;ment central GAAC transcriptional activation et prot&eacute;ines complexes d&#39;assemblage.

Kontext-abh&#xE4;ngige Rollen der Entamoeba histolytica Kern Promotorelement GAAC in Transkriptionsaktivierung und Protein-Komplex Montage.

Controllo trascrizionale del gene hgl5 di Entamoeba histolytica &egrave; mediata attraverso un insolito nucleo promotore composto da elementi TATA, GAAC e iniziatore. In hgl5 promotore della GAAC elemento (AATGAACT) determina il sito e il tasso di iniziazione della trascrizione. Qui abbiamo testato il ruolo dell&#39;elemento GAAC nell&#39;attivazione della trascrizione da elementi normativi a Monte (UREs) nel promotore hgl5. Abbiamo anche esaminato la funzione dell&#39;elemento GAAC nel promotore ferredossina (fdx) e caratterizzato il legame con le proteine all&#39;elemento GAAC. Analisi di spostamento di mobilit&agrave; elettroforetica (EMSA) ha dimostrato che la regione GAAC &egrave; necessaria per l&#39;assemblaggio di complessi proteina nucleare di ordine superiore. La funzione dell&#39;elemento GAAC in attivazione trascrizione mediata da UREs ha rivelato che la mutazione dell&#39;elemento GAAC non influisce sulla attivazione trascrizione mediata dalla URE4 hgl5 ma attivazione abrogata dalla URE3 hgl5. Abbiamo confrontato il ruolo degli elementi GAAC in hgl5 e fdx promotori. Competitivo gel shift dosaggi erano coerenti con lo stesso binding proteina nucleare agli elementi GAAC in entrambi i geni. Mutazione dell&#39;elemento GAAC nell&#39;espressione gene reporter gene diminuito fdx, tuttavia, in contrasto con il gene hgl5, ha avuto alcun effetto sul sito di iniziazione della trascrizione. Questi risultati supportano un ruolo per l&#39;elemento GAAC nell&#39;assemblaggio delle proteine nucleari presso il promotore di nucleo e nell&#39;attivazione di trascrizione mediata da URE3. L&#39;effetto di differente su iniziazione della trascrizione dei geni hgl5 e fdx sulla mutazione dell&#39;elemento GAAC suggerisce una contesto-dipendenza della GAAC-binding protein nell&#39;espressione genica.

Dipendente dal contesto ruoli dell&#39;Entamoeba histolytica nucleo promotore elemento GAAC Assemblea transcriptional attivazione e proteine complessa.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E; hgl5 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x30BF;&#x30BF;&#x3001;GAAC&#x3001;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30B3;&#x30A2; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;.Hgl5 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;GAAC &#x8981;&#x7D20; (AATGAACT) &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x7387;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x304B;&#x3089;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; (&#x4E26;) hgl5 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#xFF08;fdx&#xFF09; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;.&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x8A66;&#x91D1; (EMSA) GAAC &#x5730;&#x57DF;&#x304C;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9AD8;&#x6B21;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6CBB;&#x308B;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6539;&#x5EC3;&#x306B;&#x4F34;&#x3044;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; hgl5 URE3 &#x304C; hgl5 URE4 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Hgl5 &#x3068; fdx &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB; &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5185;&#x306E; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x306E;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;GAAC &#x8981;&#x7D20; fdx &#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;hgl5 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5F79;&#x5272; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30A2; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068; URE3 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hgl5 &#x3068; fdx &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5909;&#x7570; GAAC &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; GAAC &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8981;&#x7D20; GAAC &#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x5185;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;

Entamoeba histolytica&#xC758; hgl5 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; transcriptional &#xC81C;&#xC5B4; &#xD0C0; &#xD0C0;, GAAC &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xCF54;&#xC5B4; &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hgl5 &#xBAA8;&#xD130;&#xB294; GAAC &#xC694;&#xC18C; (AATGAACT) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; hgl5 &#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; (UREs)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xB610;&#xD55C; ferredoxin (fdx) &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; GAAC &#xC694;&#xC18C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; (EMSA) GAAC &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB192;&#xC740; &#xC21C;&#xC11C; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; UREs &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACF5;&#xAC1C; GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; hgl5 URE4 hgl5 URE3 abrogated &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; hgl5 &#xBC0F; fdx &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; GAAC &#xC694;&#xC18C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBE44;&#xAD50;. &#xACBD;&#xC7C1;&#xB825; &#xC824; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAC19;&#xC740; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB450; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; GAAC &#xC694;&#xC18C; fdx &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC904; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, hgl5 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; GAAC &#xC694;&#xC18C; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; URE3 &#xC911;&#xC7AC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GAAC &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB530;&#xB77C; hgl5 &#xBC0F; fdx &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xAC01;&#xAE30; &#xB2E4;&#xB978; &#xD6A8;&#xACFC; GAAC &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC758;&#xC874; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xC694;&#xC18C;&#xC758; Entamoeba histolytica &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; GAAC transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;.

Control transcripcional del gen hgl5 de Entamoeba histolytica es mediada a trav&eacute;s de un promotor de inusual base compuesto por elementos TATA, el autob&uacute;s y el iniciador. En el promotor de hgl5 el autob&uacute;s elemento (AATGAACT) determina el sitio y la tasa de iniciaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n. Aqu&iacute; probamos el papel del elemento autob&uacute;s en activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de los elementos reguladores aguas arriba (UREs) en el promotor de hgl5. Tambi&eacute;n examinamos la funci&oacute;n del elemento en el promotor de la ferredoxina (fdx) autob&uacute;s y caracteriza las prote&iacute;nas de uni&oacute;n al elemento de autob&uacute;s. An&aacute;lisis de cambio de movilidad electrofor&eacute;tica (EMSA) demostraron que la regi&oacute;n de autob&uacute;s es necesaria para el montaje complejo de prote&iacute;na nuclear de orden superior. La funci&oacute;n del elemento en la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n mediada por UREs autob&uacute;s revel&oacute; que la mutaci&oacute;n del elemento autob&uacute;s no afect&oacute; la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n mediada por la URE4 de la hgl5 pero la activaci&oacute;n derogada por el URE3 de hgl5. Comparamos el papel de los elementos del autob&uacute;s de los promotores hgl5 y fdx. Gel competitivo cambio ensayos eran constantes con el mismo enlace de la prote&iacute;na nuclear a los elementos del autob&uacute;s en ambos genes. Mutaci&oacute;n del elemento autob&uacute;s en la expresi&oacute;n de gene fdx disminuida del gen reportero, sin embargo, en contraste con el gen de la hgl5, no tuvo efecto en el sitio de iniciaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n. Estos resultados apoyan un papel para el elemento de autob&uacute;s en el ensamblaje de las prote&iacute;nas nucleares en el promotor de la base y en la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n mediada por URE3. El efecto diferente en la iniciaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de los genes hgl5 y fdx sobre mutaci&oacute;n del elemento autob&uacute;s sugiere una contexto-dependencia de la prote&iacute;na de uni&oacute;n a autob&uacute;s en la expresi&oacute;n g&eacute;nica.

Papeles de contextual del Entamoeba histolytica n&uacute;cleo promotor elemento autob&uacute;s en conjunto complejo transcripcional de activaci&oacute;n y prote&iacute;na.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x4E0A;&#x6E38;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6; 3-&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (URE3-BP) &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684; Gal/&#x591A;-inhibitable &#x51DD;&#x96C6;&#x7D20; hgl5 &#x548C;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D; 1 (fdx) &#x5E8F;&#x5217; URE3 &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x3002;&#x6B64;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x88AB;&#x52A0;&#x9499;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A; EF &#x624B;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9499;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; URE3 BP.&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; EF &#x624B;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E2D; URE3 BP &#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x9499;&#x6291;&#x5236; DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x6240;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x7535;&#x6CF3;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0;&#x5316;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A; URE3 BP &#x7269;&#x7406;&#x4E0A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; hgl5 &#x548C; fdx &#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6;&#x6539;&#x53D8;&#x7531;&#x80DE;&#x5916;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x80DE;&#x5916;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x5750;&#x6807;&#x589E;&#x52A0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5165;&#x4F4F;&#x5DF2;&#x4E22;&#x5931;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4; URE3 BP mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8;&#x80DE;&#x5916;&#x9499; URE3 BP mRNA &#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x542B;&#x6709; URE3 &#x7684;&#x521B;&#x529E;&#x4EBA; URE3 BP &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x53D1;&#x751F;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;URE3 BP &#x7531;&#x9499;&#x8C03;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x5360;&#x7528;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; Ca2 +-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; URE3 BP&#x3002;

The Entamoeba histolytica upstream regulatory element 3-binding protein (URE3-BP) binds to the URE3 sequence of the Gal/GalNAc-inhibitable lectin hgl5 and ferredoxin 1 (fdx) gene promoters. This binding can be inhibited in vitro by addition of calcium. Two EF-hand motifs, which are associated with the ability to bind calcium, are present in the amino acid sequence of URE3-BP. Mutation of the second EF-hand motif in URE3-BP resulted in the loss of calcium inhibition of DNA binding as monitored by electrophoretic mobility shift assay. Chromatin immunoprecipitation assays revealed that URE3-BP was physically bound to the hgl5 and fdx promoters in vivo. Parasite intracellular calcium concentrations were altered by changes in extracellular calcium. Promoter occupancy was lost when intracellular calcium levels were increased by coordinate increases in extracellular calcium. Increased intracellular calcium also resulted in decreased levels of URE3-BP mRNA. Together these results demonstrate that changes in extracellular calcium result in changes in URE3-BP mRNA and in the ability of URE3-BP to bind to URE3-containing promoters. Modulation of URE3-BP by calcium may represent an important mechanism of control of gene expression in E. histolytica.

Calcium modulates promoter occupancy by the Entamoeba histolytica Ca2+-binding transcription factor URE3-BP.

La prot&eacute;ine de liaison 3 d&#39;Entamoeba histolytica &eacute;l&eacute;ment r&eacute;gulateur en amont (URE3-BP) lie &agrave; la s&eacute;quence URE3 du Gal/GalNAc-&ecirc;tre inhib&eacute;e par lectine hgl5 et ferr&eacute;doxine 1 (fdx) promoteurs de g&egrave;nes. Cette liaison peut &ecirc;tre inhib&eacute;e in vitro par l&#39;ajout de calcium. Deux motifs de main EF, qui sont associ&eacute;s &agrave; la capacit&eacute; de lier le calcium, sont pr&eacute;sents dans les acides amin&eacute;s s&eacute;quence de URE3-BP. Mutation du deuxi&egrave;me motif main EF URE3-BP a provoqu&eacute; la perte de l&#39;inhibition de calcium de l&#39;attache d&#39;ADN sous la supervision de l&#39;analyse de d&eacute;calage de mobilit&eacute; &eacute;lectrophor&eacute;tique. Essais d&#39;immunopr&eacute;cipitation de la chromatine a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la URE3-BP &eacute;tait physiquement li&eacute;e aux promoteurs hgl5 et fdx in vivo. Les concentrations de calcium intracellulaire parasite ont &eacute;t&eacute; alt&eacute;r&eacute;es par des changements de calcium extracellulaire. Occupation du promoteur a &eacute;t&eacute; perdue lorsque le taux de calcium intracellulaire ont &eacute;t&eacute; augment&eacute;s de coordination augmente en calcium extracellulaire. Une augmentation de calcium intracellulaire ont &eacute;galement entra&icirc;n&eacute; une baisse des taux d&#39;ARNm de URE3-BP. Ensemble, ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que les changements dans entra&icirc;nent des changements dans URE3-BP ARNm et la capacit&eacute; de URE3-BP pour lier &agrave; URE3 contenant les promoteurs calcium extracellulaire. Modulation de URE3-BP par le calcium peut repr&eacute;senter un important m&eacute;canisme de contr&ocirc;le de l&#39;expression g&eacute;nique &agrave; Entamoeba histolytica.

Calcium module l&#39;occupation promoteur par l&#39;Entamoeba histolytica Ca2 +-facteur de transcription de liaison URE3-BP.

Calcium moduliert Promoter Belegung durch die Entamoeba histolytica Ca2 +-bindende Transkriptionsfaktor URE3-BP.

L&#39;Entamoeba histolytica elemento normativo a Monte 3-binding protein (URE3-BP) si lega alla sequenza URE3 di Gal/GalNAc-inhibitable hgl5 lectina e ferredossina 1 (fdx) promotori del gene. Questa associazione pu&ograve; essere inibita in vitro da aggiunta di calcio. Due motivi EF-mano, che sono associati con la capacit&agrave; di legarsi al calcio, sono presenti nell&#39;amminoacido sequenza della mutazione URE3-BP del secondo motivo EF-mano in URE3-BP ha provocato la perdita di inibizione del calcio di associazione del DNA come monitorata mediante analisi shift mobilit&agrave; elettroforetica. Analisi di immunoprecipitazione della cromatina ha rivelato che URE3-BP era fisicamente legata ai promotori hgl5 e fdx in vivo. Concentrazioni di calcio intracellulare del parassita sono state alterate dai cambiamenti nel calcio extracellulare. Occupazione del promotore &egrave; stato perso quando i livelli di calcio intracellulare sono stati aumentati da coordinate aumenta di calcio extracellulare. Aumento di calcio intracellulare ha portato anche nella diminuzione dei livelli di mRNA URE3-BP. Insieme, questi risultati dimostrano che cambia nel risultato calcio extracellulare in cambiamenti in mRNA URE3-BP e la capacit&agrave; di legarsi ai promotori contenenti URE3 URE3-BP. Modulazione di URE3-BP di calcio pu&ograve; rappresentare un importante meccanismo di controllo dell&#39;espressione genica in E. histolytica.

Calcio modula occupancy promotore da Entamoeba histolytica Ca2 +-fattore di trascrizione associazione URE3-BP.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x4E0A;&#x6D41;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; 3 &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (URE3 BP) &#x30AE;&#x30E3;&#x30EB;/GalNAc-inhibitable &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; hgl5 &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x306E; URE3 &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#xFF08;fdx&#xFF09; &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F; in vitro &#x3067;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6291;&#x5236;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E; EF &#x30CF;&#x30F3;&#x30C9; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x5B58;&#x5728; URE3 BP &#x306E; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E; ef-&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E; URE3 &#x8DEA;&#x304F;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x7D50;&#x679C; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3067;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x8A66;&#x91D1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1; URE3 BP &#x304C; in vivo &#x3067;&#x306E; hgl5 &#x3068; fdx &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x9023;&#x7D50;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5EA7;&#x6A19;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5360;&#x6709;&#x7387;&#x304C;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x305F; URE3 BP &#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; URE3 BP mRNA &#x3068; URE3 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; URE3 BP &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;URE3 BP &#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5360;&#x6709;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; ca 2 +-&#x7D50;&#x5408;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; URE3 BP&#x3002;

Entamoeba histolytica &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; 3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (URE3-BP) &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; (fdx) Gal/GalNAc-inhibitable lectin hgl5 ferredoxin 1&#xC758; URE3 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC740; &#xCCB4; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; EF &#xC190;&#xC744; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xB97C; &#xD568;&#xC720;&#xD55C; &#xC0B0; &#xC131; URE3 BP&#xC5D0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; EF &#xC190;&#xC744; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; URE3-bp. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC5B5;&#xC81C; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418;. Chromatin immunoprecipitation &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; URE3 BP vivo&#xC5D0;&#xC11C; hgl5 &#xBC0F; fdx &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC778; &#xC190;&#xC2E4; &#xB54C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xC218;&#xC900; &#xC88C;&#xD45C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB610;&#xD55C; URE3 BP Mrna&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xC218;&#xC900; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;&#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298; URE3 BP mRNA &#xBC0F; URE3 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; URE3 BP&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; URE3 BP&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; E. histolytica&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; Entamoeba histolytica Ca2 +&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC778; &#xBCC0;&#xC870;-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; URE3 &#xD608;&#xC555;.

La prote&iacute;na de uni&oacute;n a 3 del elemento regulador upstream Entamoeba histolytica (URE3-BP) une a la secuencia URE3 de la hgl5 de lectinas Gal/GalNAc-inhibitable y ferredoxina 1 (fdx) promotores de genes. Este enlace puede ser inhibida in vitro por la adici&oacute;n de calcio. Dos motivos de EF-hand, que est&aacute;n asociados con la capacidad de enlazar calcio, est&aacute;n presentes en el amino&aacute;cido de la secuencia de URE3-BP. mutaci&oacute;n del segundo motivo EF-mano en URE3-BP dio lugar a la p&eacute;rdida de la inhibici&oacute;n de calcio de uni&oacute;n de ADN como monitoreados por el an&aacute;lisis del cambio de movilidad electrofor&eacute;tica. Ensayos de inmunoprecipitaci&oacute;n de cromatina revelaron que URE3-BP f&iacute;sicamente estaba vinculado a los promotores hgl5 y fdx in vivo. Las concentraciones de calcio intracelular del par&aacute;sito fueron alteradas por los cambios en el calcio extracelular. Ocupaci&oacute;n del promotor se perdi&oacute; cuando los niveles de calcio intracelular se incrementaron en coordenadas aumentos de calcio extracelular. Incremento del calcio intracelular tambi&eacute;n dio lugar a la disminuci&oacute;n de los niveles de mRNA de URE3-BP. Juntos, estos resultados demuestran que los cambios en el resultado de calcio extracelular en cambios en el mRNA de URE3-BP y en la capacidad de URE3-BP para enlazar a los promotores que contienen URE3. Modulaci&oacute;n de URE3-BP por calcio puede representar un importante mecanismo de control de la expresi&oacute;n g&eacute;nica en E. histolytica.

Calcio modula la ocupaci&oacute;n del promotor por la Entamoeba histolytica Ca2 +-factor de transcripci&oacute;n de Uni&oacute;n URE3-BP.

&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x52AA;&#x529B;&#x7406;&#x89E3;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5982;&#x679C;&#x6B64;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6709;&#x4FDD;&#x5B88;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x8868;&#x793A;&#x57FA;&#x672C;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728; 16-23 kDa &#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x8303;&#x56F4;&#x4E59;&#x9170;&#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x3002;E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5355;&#x4E00;&#x4EE3;&#x8868;&#x5C0F;&#x868A;&#x5B50;&#x548C; MYST &#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170; &#xFF08;&#x5E3D;&#x5B50;&#xFF09; &#x548C;&#x53CD;&#x5411;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (RT-PCR) &#x9075;&#x5FAA;&#x7531;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5168;&#x957F;&#x91CD;&#x7EC4; EhMYST &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5E3D;&#x5B50;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x725B;&#x80F8;&#x817A;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x503E;&#x5411;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H4&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD; MYST &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Esa1&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;ehMYST &#x4E0D;&#x8865;&#x5145;&#x9175;&#x6BCD; esa1 &#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176; (HDAC) &#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x6838;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF0C;&#x5178;&#x578B;&#x5730;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x66F2;&#x53E4;&#x6291;&#x83CC;&#x7D20; A (TSA)&#x3002;&#x4E0E; HDAC &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;RT-PCR &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; hdac1 &#x540C;&#x6E90; (ehHDAC) &#x662F;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9002;&#x5F53;&#x5730;&#x62FC;&#x63A5;&#x5728; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x673A;&#x5236; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x4E1A;&#x52A1;&#x3002;

&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x548C;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x3002;

In our efforts to understand how transcription may be regulated in Entamoeba histolytica, we have examined if this parasite has conserved enzymatic mechanisms for targeted acetylation and deacetylation of histones. Western blotting indicated that basic nuclear proteins in the size range of 16-23 kDa were acetylated in amebic trophozoites, suggesting histone acetylation. Single representatives of the GNAT and MYST family of histone acetyltransferases (HATs) were identified in the E. histolytica genome and their expression in amebic trophozoites was detected by reverse transcription of RNA followed by the polymerase chain reaction (RT-PCR). Full-length recombinant EhMYST protein demonstrated HAT activity with calf thymus histones and showed a preference for histone H4, similar to the yeast MYST protein, Esa1. However, ehMYST did not complement a yeast esa1 mutation. Histone deacetylase (HDAC) activity was detected in nuclear extracts from E. histolytica, and characteristically, was inhibited by trichostatin A (TSA). Consistent with the observation of HDAC activity, RT-PCR analysis demonstrated that an amebic hdac1 homolog (ehHDAC) is expressed and appropriately spliced in E. histolytica trophozoites. Our results suggest that mechanisms for histone acetylation and deacetylation are operational in E. histolytica.

Histone acetyltransferases and deacetylase in Entamoeba histolytica.

Dans nos efforts pour comprendre comment la transcription peut &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;e &agrave; Entamoeba histolytica, nous avons examin&eacute; si ce parasite a conserv&eacute; des m&eacute;canismes enzymatiques pour l&#39;ac&eacute;tylation cibl&eacute;e et d&eacute;sac&eacute;tylation des histones. &Eacute;ponger occidental a indiqu&eacute; que des prot&eacute;ines nucl&eacute;aires basiques dans la gamme de tailles de 16-23 kDa ont &eacute;t&eacute; ac&eacute;tyl&eacute;s en trophozo&iuml;tes amibiens, sugg&eacute;rant l&#39;ac&eacute;tylation des histones. Unique repr&eacute;sentant la famille GNAT et MYST des histones ac&eacute;tyltransf&eacute;rases (chapeaux) ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es dans le g&eacute;nome d&#39;e. histolytica et leur expression en trophozo&iuml;tes amibiens fut d&eacute;tect&eacute;e par transcription inverse de l&#39;ARN, suivie de la r&eacute;action en cha&icirc;ne par polym&eacute;rase (RT-PCR). Une prot&eacute;ine recombinante sur toute la longueur de EhMYST a d&eacute;montr&eacute; une activit&eacute; de chapeau avec les histones de thymus de veau et montre une pr&eacute;f&eacute;rence pour l&#39;histone H4, semblable &agrave; la levure, prot&eacute;ines MYST, Esa1. Cependant, ehMYST ne pas compl&eacute;ter une mutation esa1 de levure. L&#39;activit&eacute; histone d&eacute;sac&eacute;tylase (HDAC) a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e dans les extraits nucl&eacute;aires d&#39;e. histolytica et caract&eacute;ristiquement, est inhib&eacute;e par la trichostatine A (TSA). Conform&eacute;ment &agrave; l&#39;observation de l&#39;activit&eacute; HDAC, analyse RT-PCR a d&eacute;montr&eacute; qu&#39;un homologue hdac1 amibien (ehHDAC) est exprim&eacute; et convenablement raccord&eacute; en trophozo&iuml;tes E. histolytica. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les m&eacute;canismes de l&#39;ac&eacute;tylation des histones et d&eacute;sac&eacute;tylation sont op&eacute;rationnels dans E. histolytica.

Histones ac&eacute;tyltransf&eacute;rases et d&eacute;sac&eacute;tylase &agrave; Entamoeba histolytica.

Histonacetyltransferasen und Deacetylase in Entamoeba histolytica.

Nei nostri sforzi per capire come trascrizione possa essere regolamentata in Entamoeba histolytica, abbiamo esaminato se questo parassita ha conservato i meccanismi enzimatici mirati acetilazione e deacetilazione di istoni. Macchiarsi occidentale ha indicato che le proteine nucleari base nella gamma di dimensioni di 16-23 kDa erano acetilate in trofozoiti amebica, suggerendo acetilazione dell&#39;istone. Solo i rappresentanti della famiglia GNAT e MYST di istone acetiltransferasi (Hat) sono stati identificati nel genoma di E. histolytica e la loro espressione in trofozoiti amebica &egrave; stato rilevato da trascrizione inversa del RNA seguita da reazione a catena della polimerasi (RT-PCR). Full-length della proteina EhMYST ricombinante ha dimostrato attivit&agrave; cappello con gli istoni di timo di vitello e ha mostrato una preferenza per istone H4, simile al lievito proteina di MYST, Esa1. Tuttavia, ehMYST non ha fatto integrare una mutazione esa1 lievito. Attivit&agrave; di istone deacetylase (HDAC) &egrave; stata rilevata negli estratti nucleari da E. histolytica e tipicamente, &egrave; stato inibito da trichostatin A (TSA). Coerente con l&#39;osservazione delle attivit&agrave; HDAC, analisi di RT-PCR ha dimostrato che un omologo amebica hdac1 (ehHDAC) &egrave; espresso e opportunamente giuntato in trofozoiti E. histolytica. I nostri risultati suggeriscono che i meccanismi per acetilazione dell&#39;istone e deacetilazione sono operativi in E. histolytica.

Istone acetiltransferasi e deacetylase di Entamoeba histolytica.

&#x3053;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x306E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x304C;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x897F;&#x90E8;&#x306B;&#x3057;&#x307F;&#x304C;&#x4ED8;&#x304F;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA; 16 23 kDa &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30D6;&#x30E8;&#x3068;&#x30DF;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (&#x5E3D;&#x5B50;) &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x8005; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F0F;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3067;&#x9006;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (RT-PCR) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; EhMYST &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x5B50;&#x725B;&#x306E;&#x80F8;&#x817A;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306B;&#x5E3D;&#x5B50;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H4&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DF;&#x30B9;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;Esa1 &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x597D;&#x307F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;ehMYST &#x306F;&#x9175;&#x6BCD; esa1 &#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; &#xFF08;HDAC&#xFF09; &#x6D3B;&#x52D5; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x7279;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3; A (TSA) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B; HDAC &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;RT-PCR &#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; hdac1 &#x76F8;&#x540C;&#x7269; (ehHDAC) &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3002;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x3067;&#x3002;

&#xC804;&#xC0AC;&#xB294; Entamoeba histolytica&#xC5D0;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;,&#xC774; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC740; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;&#xC758; deacetylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; acetylation &#xD6A8;&#xC18C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xC591; blotting &#xD45C;&#xC2DC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 16-23 kDa &#xD06C;&#xAE30; &#xBC94;&#xC704; histone acetylation &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; amebic trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; acetylated &#xD588;&#xB2E4;. RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (RT-PCR) &#xB4A4;&#xC758; &#xBC18;&#xC804; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; amebic trophozoites&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xAE30; MYST &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferases (&#xBAA8;&#xC790;) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB300;&#xD45C; E. histolytica &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; EhMYST &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0; thymus &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;&#xACFC; &#xBAA8;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H4, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD6A8; &#xBAA8; MYST &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, esa1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, ehMYST &#xD6A8; &#xBAA8; esa1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase (HDAC) &#xD65C;&#xB3D9; E. histolytica &#xD575; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD2B9;&#xC9C8; &#xC0C1;, trichostatin A (TSA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. HDAC &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, RT-PCR &#xBD84;&#xC11D; amebic hdac1 &#xCCB4; (ehHDAC)&#xC740; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC30;&#xC120; E. histolytica trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; histone acetylation &#xBC0F; deacetylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; E. histolytica&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; acetyltransferases &#xBC0F; Entamoeba histolytica&#xC5D0; deacetylase&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En nuestros esfuerzos para comprender c&oacute;mo la transcripci&oacute;n puede regularse en Entamoeba histolytica, hemos examinado si este par&aacute;sito ha conservado mecanismos enzim&aacute;ticos espec&iacute;fica acetilaci&oacute;n y desacetilaci&oacute;n de histonas. Western blot indic&oacute; que fueron acetiladas prote&iacute;nas nucleares b&aacute;sicas en el rango de tama&ntilde;o de 16-23 kDa en trophozoites am&eacute;bicos, sugiriendo la acetilaci&oacute;n de histonas. Solo representantes de la familia GNAT y MYST de histona Acetiltransferasas (sombreros) fueron identificados en el genoma de E. histolytica y su expresi&oacute;n en trophozoites am&eacute;bicos fue detectado por la transcripci&oacute;n inversa del ARN, seguida por la reacci&oacute;n en cadena de polimerasa (RT-PCR). La prote&iacute;na recombinante de cuerpo entero de EhMYST demostr&oacute; actividad de sombrero con las histonas de timo de becerro y mostr&oacute; una preferencia por la histona H4, similar a la levadura prote&iacute;na MYST, Esa1. Sin embargo, ehMYST no complementar una mutaci&oacute;n de esa1 de levadura. Actividad de histona deacetilasa (HDAC) fue detectado en extractos nucleares de E. histolytica y caracter&iacute;stico, fue inhibida por tricostatina A (TSA). Consistente con la observaci&oacute;n de la actividad HDAC, an&aacute;lisis de RT-PCR demostraron que un hom&oacute;logo de hdac1 amebiano (ehHDAC) es expresado y empalmado apropiadamente en trofozoitos de E. histolytica. Nuestros resultados sugieren que los mecanismos para la acetilaci&oacute;n de histonas y desacetilaci&oacute;n est&aacute;n funcionando en E. histolytica.

Histona Acetiltransferasas y deacetilasa en Entamoeba histolytica.

&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7EC4;&#x5408;&#x84DD;&#x6C0F;&#x8D3E;&#x7B2C;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x4EBA;&#x7C7B; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x610F;&#x4E49;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x5355;&#x8239;&#x591A;&#x91CD;&#x5B9E;&#x65F6; PCR &#xFF08;qPCR&#xFF09; &#x6CD5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7EC4;&#x5408; A &#x548C;/&#x6216; B &#x76F4;&#x63A5;&#x4ECE;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x54C1;&#x5230;&#x8D3E;&#x7B2C;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5229;&#x7528;&#x8054;&#x5408;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5F15;&#x7269;&#x7684;&#x874E;&#x5B50;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x548C; 18 rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x63A2;&#x9488;&#x3002;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66; &#x300B; &#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x5C11;&#x5219; 20 &#x6ECB;&#x517B;&#x6BCF;&#x5BF9;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4F7F;&#x7528;&#x5546;&#x4E1A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF; DNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x6216; 1.25 &#x6ECB;&#x517B;&#x6BCF;&#x5BF9;&#x5B64;&#x7ACB;&#x4F7F;&#x7528; G.&#x84DD;&#x6C0F;&#x5BE1;&#x6355;&#x83B7;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF; DNA PCR &#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6807;&#x672C;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x4E0D;&#x548C;&#x800C;&#x5361;&#x4F4F;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x9762;&#x7684;&#x874E;&#x5B50;&#x63A2;&#x5934;&#x4E0E;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x5B5F;&#x52A0;&#x62C9;&#x56FD; 97 &#x4E34;&#x5E8A;&#x6807;&#x672C;&#x88AB;&#x4F7F;&#x7528;&#x65F6;&#xFF0C;&#x591A;&#x91CD; pcr &#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; 95%&#xFF08;22 21) &#x7684;&#x8D3E;&#x7B2C;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x9633;&#x6027;&#x6807;&#x672C;&#x548C;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x9634;&#x6027;&#x6807;&#x672C;&#x7684; 18%(74 13&#xFF09;&#x3002;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x9634;&#x6027;&#x548C;&#x9633;&#x6027; qPCR &#x6807;&#x672C;&#x6709;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x5468;&#x671F;&#x9608;&#x503C;&#x503C;&#x6BD4;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x9633;&#x6027;&#x548C; qPCR &#x9633;&#x6027;&#x6807;&#x672C;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4EE3;&#x8868;&#x771F;&#x6B63;&#x4F4E;&#x8D1F;&#x62C5;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570; (32 35&#xFF09; &#x611F;&#x67D3;&#x4E86;&#x7EC4;&#x5408; B &#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5355;&#x53CD;&#x5E94;&#x591A;&#x91CD; qPCR &#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x533A;&#x5206;&#x4ECE;&#x88C5;&#x914D; B &#x611F;&#x67D3;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BF9;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x672C;&#x7EC4;&#x5408; A &#x8D3E;&#x7B2C;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x63F4;&#x52A9;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x874E;&#x5B50;&#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x5B9E;&#x65F6; pcr &#x63A2;&#x9488;&#x548C; DNA &#x6355;&#x83B7;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x97AD;&#x6BDB;&#x7CAA;&#x4FBF;&#x6837;&#x672C;&#x3002;

Two major genotypic assemblages of Giardia lamblia infect humans; the epidemiologic significance of this phenomenon is poorly understood. We developed a single-vessel multiplex real-time PCR (qPCR) assay that genotypes Giardia infections into assemblages A and/or B directly from fecal samples. The assay utilized Scorpion probes that combined genotype-specific primers and probes for the 18S rRNA gene into the same molecule. The protocol was capable of detecting as few as 20 trophozoites per PCR on fecal DNA isolated using a commercial method or 1.25 trophozoites per PCR on fecal DNA isolated using a G. lamblia-specific oligonucleotide capture technique. The assay was specific for fecal specimens, with no amplification of the discordant genotype with the opposite Scorpion probe. When 97 clinical specimens from Bangladesh were used, the multiplex PCR assay detected 95% (21 of 22) of Giardia microscopy-positive specimens and 18% (13 of 74) of microscopy-negative specimens. Microscopy-negative and qPCR-positive specimens had higher average cycle threshold values than microscopy-positive and qPCR-positive specimens, suggesting that they represented true low-burden infections. Most (32 of 35) infections were assemblage B infections. This single-reaction multiplex qPCR assay distinguishes assemblage A Giardia infections from assemblage B infections directly on fecal samples and may aid epidemiologic investigation.

Multiplex real-time PCR assay using Scorpion probes and DNA capture for genotype-specific detection of Giardia lamblia on fecal samples.

Deux grands assemblages g&eacute;notypiques de Giardia lamblia infectent les humains ; l&#39;importance &eacute;pid&eacute;miologique de ce ph&eacute;nom&egrave;ne est mal comprise. Nous avons d&eacute;velopp&eacute; une single-navire multiplexe (qPCR) PCR en temps r&eacute;el que g&eacute;notypes : infections Giardia dans les assemblages A et/ou B directement &agrave; partir des &eacute;chantillons les. Le test a utilis&eacute; des sondes de Scorpion qui combinait des amorces sp&eacute;cifiques de g&eacute;notype et de sondes pour le g&egrave;ne de l&#39;ARNr 18 s dans la m&ecirc;me mol&eacute;cule. Le protocole a &eacute;t&eacute; capable de d&eacute;tecter aussi peu que 20 trophozo&iuml;tes par PCR sur l&#39;ADN f&eacute;cal isol&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;une m&eacute;thode commerciale ou 1,25 trophozo&iuml;tes par PCR sur l&#39;ADN f&eacute;cal isol&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;une technique de capture de g. lamblia sp&eacute;cifiques oligonucl&eacute;otide. Le test est sp&eacute;cifique pour les &eacute;chantillons f&eacute;caux, avec pas d&#39;amplification du g&eacute;notype discordant avec la sonde Scorpion oppos&eacute;. Lorsque 97 &eacute;chantillons cliniques du Bangladesh ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s, la PCR multiplexe d&eacute;tect&eacute; 95 % (21 sur 22) de sp&eacute;cimens de microscopie positif de Giardia et de 18 % (13 74) des sp&eacute;cimens de microscopie n&eacute;gative. Microscopie n&eacute;gative et positive qPCR sp&eacute;cimens ont des valeurs de seuil cycle moyen plus &eacute;lev&eacute;es que les sp&eacute;cimens de microscopie positive et positive qPCR, sugg&eacute;rant qu&#39;il s&#39;agissait des infections de faible charge vraies. La plupart (32 35) des infections &eacute;taient des infections assemblage B. Ce dosage simple r&eacute;action qPCR multiplex distingue les infections Giardia A assemblage d&#39;infections assemblage B directement sur des &eacute;chantillons de mati&egrave;res f&eacute;cales et peut faciliter l&#39;enqu&ecirc;te &eacute;pid&eacute;miologique.

Sondes de multiplex PCR en temps r&eacute;el &agrave; l&#39;aide de Scorpion et capturer les ADN pour la d&eacute;tection du g&eacute;notype sp&eacute;cifique de Giardia lamblia, sur des &eacute;chantillons de mati&egrave;res f&eacute;cales.

Multiplex real-time PCR Assay unter Verwendung von Scorpion-Sonden und DNA-Erfassung f&#xFC;r Genotyp-spezifischen Nachweis von Giardia lamblia auf Stuhlproben.

Due grandi assemblaggi genotipico di Giardia lamblia infettano gli esseri umani; il significato epidemiologico di questo fenomeno &egrave; scarsamente compreso. Abbiamo sviluppato un dosaggio singolo-nave multiplex Real-Time PCR (qPCR) che genotipi infezioni da Giardia in assemblaggi A e/o B direttamente da campioni fecali. Il dosaggio utilizzato sonde Scorpion che combinati genotipo-specifici primer e sonde per il gene del rRNA 18S nella stessa molecola. Il protocollo &egrave; stato in grado di rilevare come pochi come 20 trofozoiti per PCR su DNA fecale isolato utilizzando un metodo commerciale o 1,25 trofozoiti per PCR su DNA fecale isolato utilizzando una tecnica di cattura di g. lamblia-specific oligonucleotide. Il dosaggio era specifico per campioni fecali, con nessuna amplificazione del genotipo discordante con la sonda Scorpion opposto. Quando 97 campioni clinici dal Bangladesh sono stati usati, il dosaggio PCR multiplex rilevato (21 di 22) il 95% dei campioni positivi per microscopia Giardia e 18% (13 di 74) dei campioni di microscopia-negativo. Microscopia-negativo e positivo di qPCR esemplari erano pi&ugrave; elevati valori di soglia ciclo medio di campioni positivi per microscopia e qPCR-positivo, suggerendo che hanno rappresentato la vera low-onere infezioni. (32 Di 35) la maggior parte delle infezioni sono state infezioni assemblaggio B. Questo dosaggio singolo-reazione multiplex qPCR distingue infezioni A Giardia assemblaggio da infezioni di assemblaggio B direttamente su campioni di feci e pu&ograve; essere di aiuto indagine epidemiologica.

Sonde multiplex test PCR in tempo reale utilizzando Scorpion e acquisizione di DNA per rilevamento di genotipo-specifici di Giardia lamblia su campioni di feci.

2 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x30B8;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2;&#x611F;&#x67D3;&#x7FA4;&#x96C6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x304B;&#x3089;&#x76F4;&#x63A5;&#x306B;&#x5358;&#x4E00;&#x5BB9;&#x5668;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR (qPCR) &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x30B9;&#x30B3;&#x30FC;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; 18S rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x308F;&#x305A;&#x304B; 20 &#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x5546;&#x696D;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x7CDE;&#x4E2D; DNA &#x306E; PCR &#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x307E;&#x305F;&#x306F; G. &#x30E9;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;-&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3; &#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x7CDE;&#x4E2D; dna &#x306E; PCR &#x3042;&#x305F;&#x308A; 1.25 &#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x53CD;&#x5BFE;&#x306E;&#x30B9;&#x30B3;&#x30FC;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x8033;&#x969C;&#x308A;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x306E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30B7;&#x30E5;&#x304B;&#x3089; 97 &#x81E8;&#x5E8A;&#x691C;&#x4F53;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; PCR &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B8;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x967D;&#x6027;&#x691C;&#x4F53;&#x306E; 95 &#xFF05; &#xFF08;22 21&#xFF09; &#x3068; 18% (74 13) &#x8CA0;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6A19;&#x672C;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x8CA0;&#x3068; qPCR &#x967D;&#x6027;&#x691C;&#x4F53;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x771F;&#x306E;&#x4F4E;&#x8CA0;&#x62C5;&#x611F;&#x67D3;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x967D;&#x6027;&#x3068; qPCR &#x6B63;&#x6A19;&#x672C;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x5E73;&#x5747;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x304D;&#x3044;&#x5024;&#x5024;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E; &#xFF08;32&#xFF09; 35 &#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7FA4;&#x96C6; B &#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; qPCR &#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x7FA4;&#x96C6; A &#x30B8;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B8;&#x30A2;&#x611F;&#x67D3;&#x7FA4;&#x96C6; B &#x611F;&#x67D3;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x3066;&#x75AB;&#x5B66;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B9;&#x30B3;&#x30FC;&#x30D4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; DNA &#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3; &#x30E9;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x97AD;&#x6BDB;&#x866B;&#x306E;&#x7CDE;&#x4FBF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x591A;&#x578B;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

Giardia lamblia&#xC758; &#xB450; &#xC8FC;&#xC694; genotypic assemblages &#xAC10;&#xC5FC; &#xC778;&#xAC04;; &#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; genotypes assemblages A/B &#xB610;&#xB294; &#xBD84; &#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC73C;&#xB85C; Giardia &#xAC10;&#xC5FC;&#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC120;&#xBC15; &#xB2E4;&#xC911; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR (qPCR) &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xB1CC;&#xAD00;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xAC08; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; 18S rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC808;&#xC5F0; &#xBD84; &#xBCC0; DNA&#xC5D0;&#xC11C; PCR &#xB2F9; 20 trophozoites &#xB610;&#xB294; PCR &#xBD84; &#xBCC0; DNA G. lamblia &#xD2B9;&#xC815; oligonucleotide &#xCEA1;&#xCC98; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC808;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xB2F9; 1.25 trophozoites&#xB85C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2A5;&#xB825;. &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC804;&#xAC08; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC640; &#xADC0;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC2AC;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615;&#xC758; &#xC544;&#xBB34; &#xD655;&#xB300;&#xC640; &#xC9C0;&#xC800;&#xBD84;&#xD55C; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815;. &#xBC29;&#xAE00;&#xB77C;&#xB370;&#xC2DC;&#xC5D0;&#xC11C; 97 &#xC784;&#xC0C1; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; Giardia &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC591;&#xC131; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC758; 95% (21 / 22)&#xC640; &#xC74C;&#xC774; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC758; 18% (13 / 74) &#xBA40;&#xD2F0;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4; PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0C9;. &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;-&#xBD80;&#xC815;&#xACFC; &#xAE0D;&#xC815; qPCR &#xD45C;&#xBCF8; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC591;&#xC218;&#xC640; qPCR &#xC591;&#xC131; &#xD45C;&#xBCF8;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC9C4;&#xC815;&#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBD80;&#xB2F4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC81C;&#xC548; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xAC12;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; (32 35) &#xAC10;&#xC5FC; &#xC870;&#xB9BD; B &#xAC10;&#xC5FC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC18;&#xC751; &#xBA40;&#xD2F0;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4; qPCR &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC870;&#xB9BD; A Giardia &#xAC10;&#xC5FC;&#xC774; &#xBC30;&#xC124;&#xBB3C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC870;&#xB9BD; B &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xC870;&#xC0AC; &#xC6D0;&#xC870; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xAC08;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC911; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; DNA&#xC5D0; &#xBD84; &#xBCC0; &#xC0D8;&#xD50C; Giardia lamblia&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615; &#xAD00;&#xB828; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCEA1;&#xCC98;.

Dos grandes ensamblajes genot&iacute;picas de Giardia lamblia infectan a los seres humanos; la importancia epidemiol&oacute;gica de este fen&oacute;meno es mal entendida. Hemos desarrollado un ensayo PCR (qPCR) en tiempo real del m&uacute;ltiplex de solo-recipiente genotipos infecciones Giardia en ensamblajes A y/o B directamente en muestras de heces. El an&aacute;lisis utiliza sondas de escorpi&oacute;n que combinan iniciadores espec&iacute;ficos de genotipo y sondas para el gene del rRNA 18S en la misma mol&eacute;cula. El protocolo fue capaz de detectar tan s&oacute;lo 20 trofozoitos por PCR en fecal DNA aislado usando un m&eacute;todo comercial o 1,25 trofozoitos por PCR en fecal DNA aislado usando una t&eacute;cnica de captura de oligonucle&oacute;tidos de g. lamblia espec&iacute;ficos. El ensayo fue espec&iacute;fico para muestras fecales, con ninguna amplificaci&oacute;n del genotipo discordante con la sonda opuesto de escorpi&oacute;n. Cuando se utilizaron 97 muestras cl&iacute;nicas de Bangladesh, el ensayo PCR m&uacute;ltiplex hab&iacute;a detectado 95% (21 de 22) de muestras de Giardia positivo para microscopia y 18% (13 de 74) de espec&iacute;menes de microscop&iacute;a-negativo. Microscop&iacute;a-negativo y qPCR-positivo las muestras ten&iacute;an valores de umbral de ciclo medio mayores que muestras de microscop&iacute;a-positivo y qPCR-positivo, sugiriendo que representaron cierto infecciones bajo carga. La mayor&iacute;a (32 de 35) infecciones eran conjunto B infecciones. Este ensayo solo reacci&oacute;n multiplex qPCR distingue infecciones A Giardia de ensamblaje de infecciones del conjunto B directamente en muestras fecales y puede ayudar a la investigaci&oacute;n epidemiol&oacute;gica.

Sondas de m&uacute;ltiplex ensayo de PCR en tiempo real utilizando escorpi&oacute;n y captura de ADN para la detecci&oacute;n de genotipo espec&iacute;fico de Giardia lamblia en muestras de heces.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5206;&#x6790;&#x6267;&#x884C;&#x5728;&#x9694;&#x79BB;&#x6765;&#x81EA;&#x516D;&#x4E2A;&#x611F;&#x67D3;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7ED3;&#x80A0;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x6ECB;&#x517B;&#x3002;9435 &#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; &#xFF08;ORFs&#xFF09; &#x548C; 9066 5&#39; &#x548C; 3&#39; &#x4FA7;&#x7FFC;&#x5730;&#x533A;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x5E73;&#x53F0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x9635;&#x5217;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x63A2;&#x9488;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x597D;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;&#x8A8A;&#x672C;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x6240;&#x6709; ORFs &gt; 80%&#x3002;&#x5171; 523 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355; (&#x6240;&#x6709; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; 5.2%) &#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x5728; amebae &#x5929; 1 &#x548C; 29 &#x80A0;&#x9053;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;&#x5206;&#x79BB;&#xFF1A; 326 &#x548C;&#x9760;&#x5929; 1&#x3001; 29&#x3001; 109 &#x548C; 88 &#x4E24;&#x5929;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5B9E;&#x65F6;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316; 11/12 &#x57FA;&#x56E0;&#x4F7F;&#x7528;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x5206;&#x79BB;&#x7684; mRNA &#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x5BF9;&#x80A0;&#x9053;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x88AB;&#x4F34;&#x968F;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5305;&#x62EC;&#x8DE8;&#x819C;&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; ras &#x548C; rho &#x5BB6;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x9499;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; mRNA &#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x8DCC;&#x5E45;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9176;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x5347;&#x5E45;&#x5206;&#x522B;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x80FD;&#x91CF;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;&#x9632;&#x5FA1;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x80A0;&#x9053; &#xFF08;&#x4F46;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4ECE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#xFF09; &#x63D0;&#x51FA;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; AIG1 &#x690D;&#x7269;&#x6297;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6C27;&#x89E3;&#x6BD2;&#x9014;&#x5F84;&#x8DCC;&#x5E45;&#x5728;&#x538C;&#x6C27;&#x7ED3;&#x80A0;&#x5185;&#x8154;&#x4E2D;&#x6309;&#x9884;&#x671F;&#x3002;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6700;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x589E;&#x52A0; 20-35-&#x500D;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x56DB;&#x6837;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x7684; Gal/&#x591A;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x5149;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x4E3A; 2-3 &#x500D;&#x3002;&#x63A7;&#x5236;&#x80A0;&#x9053; mRNA &#x4E30;&#x5EA6;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5230;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x56DB;&#x4E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x4E0B;&#x8C03; 6-16 &#x500D;&#x80A0;&#x9053;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x4F11;&#x606F;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E2D;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x6B64;&#x4E3B;&#x673A;&#x4E2D;&#x80A0;&#x6ECB;&#x517B;&#x6539;&#x52A8;&#x5206;&#x6CCC;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3001; &#x6C27;&#x9632;&#x5FA1;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3001; &#x6BD2;&#x529B;&#x3001; &#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x53CA; DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x53D7;&#x7275;&#x8FDE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x80A0;&#x9053;&#x5B9A;&#x690D;&#x548C;&#x5165;&#x4FB5;&#x5BF9;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

A genome-wide transcriptional analysis of Entamoeba histolytica was performed on trophozoites isolated from the colon of six infected mice and from in vitro culture. An Affymetrix platform gene expression array was designed for this analysis that included probe sets for 9435 open reading frames (ORFs) and 9066 5' and 3' flanking regions. Transcripts were detected for > 80% of all ORFs. A total of 523 transcripts (5.2% of all E. histolytica genes) were significantly changed in amebae isolated from the intestine on Days 1 and 29 after infection: 326 and 109 solely on Days 1 and 29, and 88 on both days. Quantitative real-time reverse transcriptase PCR confirmed these changes in 11/12 genes tested using mRNA isolated from an additional six mice. Adaptation to the intestinal environment was accompanied by increases in a subset of cell signaling genes including transmembrane kinases, ras and rho family GTPases, and calcium binding proteins. Significant decreases in mRNA abundance for genes involved in glycolysis and concomitant increases in lipases were consistent with a change in energy metabolism. Defense against bacteria present in the intestine (but lacking from in vitro culture) was suggested by alterations in mRNA levels of genes similar to the AIG1 plant antibacterial proteins. Decreases in oxygen detoxification pathways were observed as expected in the anaerobic colonic lumen. Of the known virulence factors the most remarkable changes were a 20-35-fold increase in a cysteine proteinase four-like gene, and a 2-3-fold decrease in two members of the Gal/GalNAc lectin light subunit family. Control of the observed changes in mRNA abundance in the intestine might potentially rest with four related proteins with DNA binding domains that were down-regulated 6-16-fold in the intestinal environment. In conclusion, the first genome-wide analysis of the transcriptome of E. histolytica demonstrated that the vast majority of genes are transcribed in trophozoites, and that in the host intestine trophozoites altered the expression of mRNAs for genes implicated in metabolism, oxygen defense, cell signaling, virulence, antibacterial activity, and DNA binding.

Impact of intestinal colonization and invasion on the Entamoeba histolytica transcriptome.

Une analyse transcriptionnelle de G&eacute;nome-large d&#39;Entamoeba histolytica a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e sur les trophozo&iuml;tes isol&eacute;es du colon de six souris infect&eacute;es et de culture in vitro. Un alignement tableau plate-forme d&#39;expression des g&egrave;nes a &eacute;t&eacute; con&ccedil;u pour cette analyse qui comprenait la sonde d&eacute;finit pour 9435 open reading cadres (ORF) et 9066 5&#39; et 3&#39; des r&eacute;gions flanquantes. Relev&eacute;s de notes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;es pour &gt; 80 % de tous les ORF. Un total de 523 transcriptions (5,2 % de tous les g&egrave;nes d&#39;Entamoeba histolytica) ont &eacute;t&eacute; significativement modifi&eacute;es dans l&#39;amibiase isol&eacute;e de l&#39;intestin les jours 1 et 29 apr&egrave;s l&#39;infection : 326 et 109 uniquement sur des jours 1 et 29 et 88 sur les deux jours. Quantitative en temps r&eacute;el reverse transcriptase PCR a confirm&eacute; ces changements en 11/12 g&egrave;nes test&eacute;s &agrave; l&#39;aide de mRNA isol&eacute; d&#39;une souris six suppl&eacute;mentaires. Adaptation &agrave; l&#39;environnement intestinal a &eacute;t&eacute; accompagn&eacute;e d&#39;augmentations dans un sous-ensemble de g&egrave;nes, y compris les kinases transmembranaires, ras et famille rho GTPases et prot&eacute;ines liant le calcium de la signalisation cellulaire. Des diminutions significatives en abondance des ARNm de g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans la glycolyse et augmentation concomitante des lipases &eacute;tait conformes &agrave; un changement dans le m&eacute;tabolisme &eacute;nerg&eacute;tique. D&eacute;fense contre les bact&eacute;ries pr&eacute;sentes dans l&#39;intestin (mais il manque de culture in vitro) a &eacute;t&eacute; sugg&eacute;r&eacute;e par les modifications des niveaux d&#39;ARNm de g&egrave;nes semblables aux prot&eacute;ines antibact&eacute;riennes AIG1 plante. Diminutions dans les voies de d&eacute;toxication de l&#39;oxyg&egrave;ne ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;es comme pr&eacute;vu dans la lumi&egrave;re colique ana&eacute;robie. Les facteurs de virulence connus des changements les plus remarquables ont &eacute;t&eacute; une augmentation de 20 &agrave; 35 fois dans un g&egrave;ne de quatre type de cyst&eacute;ine prot&eacute;inase et une diminution de 2-3 fois dans les deux membres de la famille de lumi&egrave;re sous-unit&eacute; Gal/GalNAc lectine. Contr&ocirc;le des changements observ&eacute;s dans l&#39;abondance des ARNm dans l&#39;intestin pourrait potentiellement &ecirc;tre quatre prot&eacute;ines apparent&eacute;es avec les domaines de liaison de l&#39;ADN qui ont &eacute;t&eacute; diminu&eacute;es 6-16-pli dans le milieu intestinal. En conclusion, la premi&egrave;re analyse du transcriptome d&#39;e. histolytica genome-wide ont montr&eacute; que la grande majorit&eacute; des g&egrave;nes est transcrits en trophozo&iuml;tes, et que chez l&#39;h&ocirc;te trophozo&iuml;tes intestins modifiait l&#39;expression des ARNm de g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans le m&eacute;tabolisme, d&eacute;fense de l&#39;oxyg&egrave;ne, signalisation cellulaire, virulence, activit&eacute; antibact&eacute;rienne et l&#39;attache d&#39;ADN.

Impact de la colonisation de l&#39;intestin et l&#39;invasion sur le transcriptome de histolytica d&#39;Entamoeba.

Eine genomweiten transkriptionelle Analyse von Entamoeba Histolytica erfolgte auf Trophozoiten isoliert aus dem Doppelpunkt von sechs infizierten M&auml;usen und in-vitro-Kultur. Ein Affymetrix, die Plattform-Gen-Ausdruck-Array f&uuml;r diese Analyse entwickelt wurde, die Sonde enthalten legt f&uuml;r 9435 Open lesen Frames (ORFs) und 9066 5&#39; und 3&#39; angrenzende Regionen. Abschriften wurden f&uuml;r alle ORFs &gt; 80 % erkannt. Insgesamt 523 Transkripte (5,2 % aller Gene in E. Histolytica) wurden in Amebae isoliert aus dem Darm auf Tage 1 und 29 nach Infektion wesentlich ge&auml;ndert: 326 und 109 ausschlie&szlig;lich am Tage 1 und 29 und 88 an beiden Tagen. Quantitative Echtzeit R&uuml;cktranscriptase PCR best&auml;tigt diese Ver&auml;nderungen im 11/12-Gene mit mRNA isoliert von einer zus&auml;tzlichen sechs M&auml;usen getestet. Anpassung an die intestinale Umwelt wurde durch Zuw&auml;chse in eine Teilmenge der Zelle Signalisierung Transmembran-Kinasen, Ras und Rho Familie GTPasen und Kalzium-bindende Proteine Gene begleitet. Erhebliche R&uuml;ckg&auml;nge in H&uuml;lle und F&uuml;lle der mRNA f&uuml;r Gene beteiligt Glykolyse und damit einhergehenden Anstieg der Lipasen entsprachen einer &Auml;nderung im Energiestoffwechsel. Verteidigung gegen Bakterien im Darm (aber fehlt von in-vitro-Kultur) schlug Ver&auml;nderungen in mRNA-Stufen von Genen, die &auml;hnlich wie die AIG1 Pflanze antibakterielle Proteine. Sauerstoff-Entgiftung-Bahnen wurde festgestellt wie erwartet in die anaerobe Kolon Lumen. Von der bekannten Virulenzfaktoren waren bemerkenswertesten &Auml;nderungen ein 20-35-fach in einem Cystein-Proteinase-vier-wie-gen, und 2-3-fach W&auml;hrungsver&auml;nderungen in zwei Mitglieder der Gal/GalNAc Lektin Licht Untereinheit Familie. Kontrolle &uuml;ber die beobachteten Ver&auml;nderungen in mRNA F&uuml;lle im Darm k&ouml;nnte potenziell mit vier Verwandte Proteine mit DNA-Bindung-Domains ruhen, die unten-geregelt 6-16-fach in der Darm-Umgebung waren. Abschlie&szlig;end zeigte die erste genomweiten Analyse das Transkriptom von E. Histolytica, dass die &uuml;berwiegende Mehrheit der Gene in Trophozoiten transkribiert werden, und im Host Darm Trophozoiten mRNAs f&uuml;r Gene, die im Stoffwechsel, Sauerstoff-Verteidigung, Zelle signalisieren, Virulenz, antibakterielle Wirkung und DNA-Bindung impliziert den Ausdruck ge&auml;ndert.

Auswirkungen der intestinale Kolonisation und Invasion auf die Entamoeba Histolytica Transkriptom.

Su trofozoiti isolati dal colon di sei topi infetti e da coltura in vitro &egrave; stata eseguita un&#39;analisi trascrizionale genome-wide di Entamoeba histolytica. Una matrice di espressione genica platform &egrave; stato progettato per questa analisi che includeva la sonda di Affymetrix imposta per 9435 open reading frame (ORF) e 9066 5&#39; e 3&#39; delle regioni fiancheggianti. Le trascrizioni sono state rilevate &amp;gt; 80% del ORFs tutti. Un totale di 523 trascrizioni (5.2% di tutti i geni di E. histolytica) sono state significativamente modificate nel amebae isolato dall&#39;intestino su giorni 1 e 29 dopo l&#39;infezione: 326 e 109 esclusivamente su giorni 1 e 29 e 88 su entrambi i giorni. Quantitativo in tempo reale il transcriptase PCR ha confermato questi cambiamenti nei geni del 11/12 testati usando mRNA isolato da un ulteriore sei topi. Adattamento all&#39;ambiente intestinale &egrave; stato accompagnato da aumenti in un sottogruppo di geni del transmembrane chinasi, ras e famiglia rho GTPases e proteine leganti il calcio di segnalazione cellulare. Significative diminuzioni in abbondanza di mRNA di geni coinvolti nella glicolisi e concomitante aumento della lipasi era coerenti con un cambiamento nel metabolismo energetico. Difesa contro i batteri presenti nell&#39;intestino (ma mancano da coltura in vitro) &egrave; stato suggerito da alterazioni nei livelli di mRNA di geni simili alle proteine antibatteriche AIG1 pianta. Diminuzioni in percorsi di disintossicazione di ossigeno sono state osservate come previsto nel lume del colon anaerobico. I fattori di virulenza noti i cambiamenti pi&ugrave; notevoli sono stati un aumento di 20-35 volte in un gene di quattro-come cisteina proteinasi e una diminuzione di-2-3 volte in due membri della famiglia Gal/GalNAc lectina subunit&agrave; leggera. Controllo dei cambiamenti osservati in abbondanza di mRNA nell&#39;intestino potrebbe potenzialmente riposo con quattro proteine correlate con domini di legame del DNA che erano gi&ugrave;-regolato 6-16 volte nell&#39;ambiente intestinale. In conclusione, la prima analisi genome-wide transcriptome di E. histolytica ha dimostrato che la stragrande maggioranza dei geni &egrave; trascritti in trofozoiti, e che nell&#39;host di trofozoiti intestino alterato l&#39;espressione del mRNA di geni implicati nel metabolismo, difesa di ossigeno, segnalazione delle cellule, virulenza, attivit&agrave; antibatterica e grippaggio del DNA.

Impatto della colonizzazione intestinale e invasione su transcriptome Entamoeba histolytica.

6 &#x611F;&#x67D3;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D50;&#x8178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x990A;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x89E3;&#x6790;&#x304C;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x7528;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9; &#x30FB; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; (ORFs) &#x3068; 9066 5&#39; 3&#39; &#x4E26;&#x3076;&#x9818;&#x57DF;&#x8AAD;&#x66F8; 9435 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066; ORFs &#x306E;&#x76EE; 80 &#xFF05; &#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;523 &#x306E;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8; &#xFF08;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 5.2 &#xFF05;&#xFF09; &#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x611F;&#x67D3;&#x5F8C;&#x65E5; 1 &#x3068; 29 &#x306E;&#x8178;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; amebae &#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;: 326 &#x3068;&#x3060;&#x3051;&#x3067; 1 &#x65E5;&#x3068; 29 &#x65E5; 109 88 &#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x65E5;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199; PCR 11/12 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; mRNA &#x3092;&#x8FFD;&#x52A0; 6 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8178;&#x5185;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306A;&#x3069; rho &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;ras &#x3068;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x4F34;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; mRNA &#x8C4A;&#x5BCC;&#x89E3;&#x7CD6;&#x7CFB;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5897;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x8178; (&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x990A;&#x304B;&#x3089;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;) &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x5FA1;&#x306F;&#x3001;aig 1 &#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9178;&#x7D20;&#x89E3;&#x6BD2;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x5185;&#x8154;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3069;&#x304A;&#x308A;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5909;&#x5316; 20 35 &#x306E;&#x500D;&#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A3;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 4 &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3068;&#x30AE;&#x30E3;&#x30EB;/GalNAc &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5149;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC; 2 &#x4EBA;&#x306E; 2-3 &#x500D;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;.MRNA &#x8C4A;&#x5BCC;&#x8178;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236; 6-16-&#x500D;&#x8178;&#x5185;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x3057;&#x305F; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 4 &#x3064;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x6B8B;&#x308A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x304C;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x5185;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x8178;&#x6804;&#x990A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x9632;&#x885B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x3001;&#x6297;&#x83CC;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001;DNA &#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; Mrna &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x8178;&#x7BA1;&#x5B9A;&#x7740;&#x3068;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3002;

Entamoeba histolytica&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; transcriptional &#xBD84;&#xC11D; 6 &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC950;&#xC758; &#xCF5C;&#xB860; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; Affymetrix 9435 &#xC624;&#xD508; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; (ORFs) &#xBC0F; 9066 5&#39;&#xACFC; 3&#39; &#xC601;&#xC5ED; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; Orfs&#xC758; &amp;gt; 80% &#xAC80;&#xCD9C; &#xB410;&#xB2E4;. &#xCD1D; 523 &#xC131;&#xC801;&#xD45C; (&#xBAA8;&#xB4E0; E. histolytica &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 5.2%)&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD6C4; &#xC77C; 1&#xACFC; 29&#xC5D0; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; amebae&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC14;&#xB00C;&#xC5C8;&#xB2E4;: 326 &#xACE0; 109 &#xC77C; 1&#xACFC; 29 &#xC77C;&#xC5D0; &#xC720;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xB458; &#xB2E4; &#xC77C; 88. &#xC815;&#xB7C9; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; PCR 11/12 &#xC720;&#xC804;&#xC790; mRNA &#xCD94;&#xAC00; 6 &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC7A5; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xC99D;&#xAC00; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; kinases, ras &#xBC0F; rho &#xAC00;&#xC871; GTPases, &#xCE7C;&#xC298; &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB4F1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; &#xC140;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD574;&#xB2F9; &#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; mRNA &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; lipases&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC18C;&#xC7A5; (&#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC871;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xC5B4;&#xB294; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; AIG1 &#xC2DD;&#xBB3C; &#xD56D;&#xADE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC800; &#xC2B9; &#xB8E8;&#xBA58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC0B0;&#xC18C; &#xD574;&#xB3C5; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; cysteine &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; 4 &#xAC19;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; 20 35 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; Gal/GalNAc lectin &#xBE5B; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB450; &#xBA64;&#xBC84;&#xC5D0; 2-3 &#xBC30; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. MRNA &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xC18C;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC544;&#xB798;&#xB85C; 6-16-&#xBC30; &#xC7A5; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB358; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xD734;&#xC2DD;&#xC744;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, E. histolytica transcriptome &#xCD5C;&#xCD08;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xB294; trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC18C;&#xC7A5; trophozoites &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;, &#xC0B0;&#xC18C; &#xBC29;&#xC5B4;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638;, &#xB3C5;&#xC131;, &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0B4;&#xD3EC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Mrnas&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC7A5; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC640; Entamoeba histolytica transcriptome&#xC5D0; &#xCE68;&#xB7B5;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

Se realiz&oacute; un an&aacute;lisis transcripcional de genoma de Entamoeba histolytica en trofozoitos aislados de los dos puntos de seis ratones infectados y de cultivo in vitro. Una matriz de expresi&oacute;n de genes de plataforma fue dise&ntilde;ada para este an&aacute;lisis que incluy&oacute; sonda de Affymetrix establece 9435 abierto leyendo Marcos (ORFs) y 9066 5&#39; y 3&#39; que flanquean las regiones. Las transcripciones fueron detectadas &gt; 80% de las ORFs todos. Un total de 523 transcripciones (5,2% de todos los genes de E. histolytica) cambiaron significativamente en amebas aislado del intestino en los d&iacute;as 1 y 29 despu&eacute;s de la infecci&oacute;n: 326 y 109 &uacute;nicamente en los d&iacute;as 1 y 29 y 88 en ambos d&iacute;as. La transcriptasa inversa en tiempo real cuantitativa PCR confirm&oacute; estos cambios en 11/12 genes analizados utilizando mRNA aislado de un adicional seis ratones. Adaptaci&oacute;n al ambiente intestinal fue acompa&ntilde;ada por aumentos en un subconjunto de genes incluyendo transmembrana quinasas, ras y familia rho GTPasas y prote&iacute;nas de uni&oacute;n de calcio de la se&ntilde;alizaci&oacute;n de la c&eacute;lula. Disminuciones significativas en la abundancia de mRNA de genes implicados en la glicolisis y aumento concomitante de lipasas era constante con un cambio en el metabolismo energ&eacute;tico. Defensa contra las bacterias presentes en el intestino (pero que carecen de cultivo in vitro) fue sugerido por alteraciones en los niveles de mRNA de genes similares a las prote&iacute;nas antibacterianas de la planta AIG1. Se observaron disminuciones en las v&iacute;as de desintoxicaci&oacute;n de ox&iacute;geno como se esperaba en el lumen col&oacute;nico anaerobio. De los factores de virulencia conocidos los cambios m&aacute;s notables fueron un aumento de 20-35 veces en un gen de cuatro-como ciste&iacute;na proteinasa y una disminuci&oacute;n de 2-3 veces en dos miembros de la familia de luz de la subunidad de lectinas Gal/GalNAc. Control de los cambios observados en la abundancia de mRNA en el intestino puede estar potencialmente con cuatro prote&iacute;nas relacionadas con dominios de uni&oacute;n a ADN que regula 6-16-doblez en el ambiente intestinal. En conclusi&oacute;n, el primer an&aacute;lisis del genoma del transcriptoma de E. histolytica demostr&oacute; que la gran mayor&iacute;a de los genes se transcribe en trofozoitos, y que en la hostia trofozoitos del intestino alteraci&oacute;n la expresi&oacute;n de los mRNAs de genes implicados en el metabolismo, defensa de ox&iacute;geno, se&ntilde;alizaci&oacute;n celular, virulencia, actividad antibacteriana y enlace de ADN.

Impacto de la colonizaci&oacute;n intestinal e invasi&oacute;n en el transcriptoma de Entamoeba histolytica.

&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x514B;&#x9686;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x662F;&#x4EBA;&#x4F53;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6027;&#x75E2;&#x75BE;&#x548C;&#x809D;&#x8113;&#x80BF;&#x3002;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x5B9A;&#x690D;&#x548C;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x8C03;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x7F16;&#x7801;&#x4E00;&#x79CD;&#x63A8;&#x5B9A;&#x9AD8;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7387;&#x65CF;&#x6846; (&#x86CB;&#x767D;) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;EhHMGB1&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E86;&#x5982;&#x679C; EhHMGB1 &#x7F16;&#x7801;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4; EhHMGB1 &#x5F97;&#x4EE5;&#x5F2F;&#x66F2; DNA &#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6838;&#x5FC3;&#x5B88;&#x6052;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5F2F;&#x66F2;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; DNA &#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684; EhHMGB1 &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6F14;&#x793A;&#x4E86;&#x3002;EhHMGB1 &#x4E5F;&#x80FD;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5230;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x5176;&#x540C;&#x6E90; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; p53 &#x9884;&#x8BA1; HMGB1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5176;&#x6838;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;EhHMGB1 HM1:IMSS &#x6ECB;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FC7;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4; 33 &#x8A8A;&#x672C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x591A;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;20 &#x4E5F;&#x88AB;&#x8C03;&#x5236;&#x5728;&#x7B2C; 1 &#x5929;&#x6216;&#x8005;&#x4E00;&#x5929; 29 &#x5728;&#x80A0;&#x9053;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7F16;&#x7801; Gal/&#x591A;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x8F7B;&#x94FE;&#xFF0C;&#x88AB;&#x8C03;&#x5236;&#x54CD;&#x5E94; EhHMGB1 &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A; EhHMGB1 &#x662F;&#x5584;&#x610F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x590D;&#x8FF0;&#x90E8;&#x5206;&#x4E3B;&#x673A;&#x80A0;&#x9053;&#x9002;&#x5E94;&#x671F;&#x95F4;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6846;&#x9AD8;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7387;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x671F;&#x95F4;&#x80A0;&#x9053;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

The unicellular eukaryote Entamoeba histolytica is a human parasite that causes amebic dysentery and liver abscess. A genome-wide analysis of gene expression modulated by intestinal colonization and invasion identified an upregulated transcript that encoded a putative high-mobility-group box (HMGB) protein, EhHMGB1. We tested if EhHMGB1 encoded a functional HMGB protein and determined its role in control of parasite gene expression. Recombinant EhHMGB1 was able to bend DNA in vitro, a characteristic of HMGB proteins. Core conserved residues required for DNA bending activity in other HMGB proteins were demonstrated by mutational analysis to be essential for EhHMGB1 activity. EhHMGB1 was also able to enhance the binding of human p53 to its cognate DNA sequence in vitro, which is expected for an HMGB1 protein. Confocal microscopy, using antibodies against the recombinant protein, confirmed its nuclear localization. Overexpression of EhHMGB1 in HM1:IMSS trophozoites led to modulation of 33 transcripts involved in a variety of cellular functions. Of these, 20 were also modulated at either day 1 or day 29 in the mouse model of intestinal amebiasis. Notably, four transcripts with known roles in virulence, including two encoding Gal/GalNAc lectin light chains, were modulated in response to EhHMGB1 overexpression. We concluded that EhHMGB1 was a bona fide HMGB protein with the capacity to recapitulate part of the modulation of parasite gene expression seen during adaptation to the host intestine.

Characterization of an Entamoeba histolytica high-mobility-group box protein induced during intestinal infection.

Le histolytica d&#39;Entamoeba unicellulaire eucaryote est un parasite humain qui provoque la dysenterie amibienne et abc&egrave;s du foie. Une analyse du g&eacute;nome de l&#39;expression g&eacute;nique, modul&eacute;e par l&#39;invasion et la colonisation de l&#39;intestin a identifi&eacute; une transcription surexprim&eacute;s codant une prot&eacute;ine de la zone de haute-mobilit&eacute;-Groupe putatif (BHGM), EhHMGB1. Nous avons test&eacute; si EhHMGB1 cod&eacute; une prot&eacute;ine BHGM fonctionnelle et d&eacute;terminer son r&ocirc;le dans le contr&ocirc;le de l&#39;expression g&eacute;nique de parasite. EhHMGB1 recombinante a &eacute;t&eacute; capable de plier l&#39;ADN in vitro, une caract&eacute;ristique des prot&eacute;ines BHGM. R&eacute;sidus de base conserv&eacute; requis pour ADN flexion activit&eacute; dans d&#39;autres prot&eacute;ines BHGM ont &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;s par une analyse mutationnelle sont indispensables pour l&#39;activit&eacute; EhHMGB1. EhHMGB1 est &eacute;galement en mesure d&#39;am&eacute;liorer la fixation de la p53 humaine &agrave; ses apparent&eacute; s&eacute;quence d&#39;ADN in vitro, qui est attendu pour une prot&eacute;ine HMGB1. Microscopie confocale, utilisant des anticorps contre la prot&eacute;ine recombinante, a confirm&eacute; sa localisation nucl&eacute;aire. Surexpression de la EhHMGB1 en HM1:IMSS de trophozo&iuml;tes conduit &agrave; modulation de 33 transcriptions impliqu&eacute;es dans une vari&eacute;t&eacute; de fonctions cellulaires. Parmi eux, 20 ont &eacute;t&eacute; &eacute;galement modul&eacute; au 1er jour ou jour 29 dans le mod&egrave;le murin d&#39;amibiase intestinale. Notamment, les quatre transcriptions avec des r&ocirc;les connus dans la virulence, dont deux encodage des cha&icirc;nes l&eacute;g&egrave;res de Gal/GalNAc lectine, ont &eacute;t&eacute; modul&eacute;es en r&eacute;ponse &agrave; une surexpression de EhHMGB1. Nous avons conclu que EhHMGB1 &eacute;tait une prot&eacute;ine BHGM justifi&eacute;e pour pouvoir r&eacute;capituler le cadre de la modulation de l&#39;expression g&eacute;nique de parasite vue durant l&#39;adaptation &agrave; l&#39;intestin de l&#39;h&ocirc;te.

Caract&eacute;risation d&#39;une prot&eacute;ine de haut-mobilit&eacute;-Groupe bo&icirc;te Entamoeba histolytica induites au cours de l&#39;infection intestinale.

Die einzelligen Eukaryoten Entamoeba Histolytica ist ein menschlicher Parasit, der Amebic Ruhr und Leber Abszess verursacht. Eine genomweiten Analyse der Genexpression moduliert durch intestinale Kolonisation und Invasion identifiziert eine herraufreguliert Abschrift, die ein mutma&szlig;liches im hoch-Mobilit&auml;t-Gruppe (HMGB)-Protein, EhHMGB1 codiert. Wir getestet, ob EhHMGB1 eine funktionelle HMGB-Protein codiert und seine Rolle bei der Kontrolle der Genexpression von Parasiten bestimmt. Rekombinante EhHMGB1 konnte DNA in vitro ein Merkmal der HMGB Proteine zu biegen. Kern konserviert R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r DNA Biegung T&auml;tigkeit in anderen HMGB Proteinen erforderlich wurden von mutagenen Analyse ist notwendig f&uuml;r EhHMGB1 T&auml;tigkeit demonstriert. EhHMGB1 konnte auch die Bindung von menschlichen p53 zu seinen Verwandten DNA-Sequenz, die in vitro zu erh&ouml;hen, wodurch f&uuml;r eine HMGB1-Protein erwartet wird. Confocal Mikroskopie, unter Verwendung der Antik&ouml;rper gegen das rekombinante Protein, best&auml;tigt seine nukleare Lokalisierung. Eine &Uuml;berexpression von EhHMGB1 in HM1:IMSS Trophozoiten f&uuml;hrte zur Modulation der 33 Abschriften verschiedener Zellfunktionen beteiligt. Von diesen waren 20 auch am Tag 1 oder Tag 29 im Mausmodell der intestinale Am&ouml;biasis moduliert. Insbesondere wurden vier Abschriften mit bekannten Rollen in Virulenz, darunter zwei Codierung Gal/GalNAc Lektin helle Ketten, als Reaktion auf EhHMGB1 eine &Uuml;berexpression moduliert. Wir festgestellt, dass EhHMGB1 ein gutgl&auml;ubiger HMGB Protein mit einer Kapazit&auml;t von rekapitulieren Teil der Modulation der Parasit Genexpression w&auml;hrend der Anpassung an den Host-Darm gesehen wurde.

Charakterisierung eines Entamoeba Histolytica hoch-Mobilit&auml;t-Gruppenfeld Proteins induziert w&auml;hrend Darm-Infektion.

L&#39;eucariote unicellulare Entamoeba histolytica &egrave; un parassita umano che provoca dissenteria amebica e ascesso epatico. Un&#39;analisi genome-wide di espressione genica modulata dall&#39;invasione e colonizzazione intestinale identificato una trascrizione sovraregolati che codifica una proteina putativa high-mobility-gruppo casella (HMGB), EhHMGB1. Abbiamo testato se EhHMGB1 con codifica una proteina funzionale HMGB e determinato il suo ruolo nel controllo dell&#39;espressione genica parassita. EhHMGB1 ricombinante &egrave; stato in grado di piegare il DNA in vitro, una caratteristica delle proteine HMGB. Residui di nucleo conservato necessarie per attivit&agrave; di piegatura in altre proteine HMGB DNA sono state dimostrate da analisi mutazionale di essere essenziale per l&#39;attivit&agrave; di EhHMGB1. EhHMGB1 &egrave; stato anche in grado di rafforzare il legame di p53 umana al suo cognata sequenza di DNA in vitro, che &egrave; previsto per una proteina HMGB1. Microscopia confocale, usando gli anticorpi contro la proteina ricombinante, ha confermato la sua localizzazione nucleare. Sovraespressione di EhHMGB1 in HM1:IMSS trofozoiti port&ograve; alla modulazione delle 33 trascrizioni coinvolte in una variet&agrave; di funzioni cellulari. Di questi, 20 erano anche modulato al giorno 1 o giorno 29 nel modello del mouse di amebiasi intestinale. In particolare, quattro trascrizioni con ruoli noti nella virulenza, incluse due codifica Gal/GalNAc catene lectina, erano modulate in risposta a EhHMGB1 sovraespressione. Abbiamo concluso che il EhHMGB1 era una bona fide proteine HMGB con la capacit&agrave; di riassumere parte della modulazione dell&#39;espressione genica parassita visto durante l&#39;adattamento per l&#39;intestino dell&#39;ospite.

Caratterizzazione di una proteina di alto-mobilit&agrave;-gruppo casella Entamoeba histolytica indotta durante l&#39;infezione intestinale.

&#x5358;&#x7D30;&#x80DE;&#x771E;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6027;&#x8D64;&#x75E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x81BF;&#x760D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x8ABF;&#x8178;&#x7BA1;&#x5B9A;&#x7740;&#x3068;&#x4FB5;&#x7565;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x9AD8;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (HMGB) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;EhHMGB1 &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x73FE;&#x4EA2;&#x9032;&#x8B04;&#x672C;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;EhHMGB1 &#x6A5F;&#x80FD;&#x7684; HMGB &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; EhHMGB1 DNA in vitro HMGB &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x66F2;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x66F2;&#x3052;&#x4ED6; HMGB &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; DNA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA; EhHMGB1 &#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EhHMGB1 &#x306F;&#x307E;&#x305F; HMGB1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; p53 &#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x306E; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HM1:IMSS &#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3067; EhHMGB1 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F; 33 &#x306E;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; 20 &#x306F;&#x307E;&#x305F; 1 &#x65E5;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 1 &#x65E5; 29 &#x8178;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x75C7;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001;&#x30AE;&#x30E3;&#x30EB;/GalNAc &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; 2 &#x540D;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 4 &#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8; EhHMGB1 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; EhHMGB1 &#x5584;&#x610F; HMGB &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x8178;&#x7BA1;&#x3078;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x7D50;&#x8AD6;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4E2D;&#x8178;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x9AD8;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3002;

&#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C; Entamoeba histolytica amebic&#xC774; &#xC9C8; &#xC6D0;&#xC778;&#xACFC; &#xAC04; &#xB18D; &#xC591; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC7A5; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC640; &#xCE68;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D; &#xC0C1; &#xB192;&#xC740; &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC0C1;&#xC790; (HMGB) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Ehhmgb1&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; upregulated &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xB97C; &#xD655;&#xC778;. EhHMGB1 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xAE30;&#xB2A5; HMGB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; EhHMGB1 DNA &#xCCB4; &#xC678;, HMGB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAD6C; &#xBD80; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; HMGB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCA4;&#xB529; &#xD558;&#xB294; DNA&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD575;&#xC2EC; &#xBCF4;&#xC874; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; mutational &#xBD84;&#xC11D; EhHMGB1 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. EhHMGB1 HMGB1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB418;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678;, &#xB3D9;&#xC871; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; p53&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. HM1:IMSS trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; Ehhmgb1&#xC758; overexpression 33 &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC758; 20&#xB3C4; 1 &#xC77C; &#xB610;&#xB294; &#xD558;&#xB8E8; 29 &#xC7A5; amebiasis&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xB3C5;&#xC131;, &#xB450; &#xC5EC;&#xC790;/GalNAc lectin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778;, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xB4F1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; 4 &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; EhHMGB1 overexpression&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;. EhHMGB1 &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF8; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xC815;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; HMGB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xB0B4;&#xB838;&#xB2E4;.

&#xCC3D; &#xC790; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; Entamoeba histolytica &#xB192;&#xC740; &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC0C1;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;.

Los eucariotas unicelulares Entamoeba histolytica es un par&aacute;sito humano causante de la disenter&iacute;a amebiana y absceso hep&aacute;tico. Un an&aacute;lisis del genoma de la expresi&oacute;n g&eacute;nica modulada por la invasi&oacute;n y colonizaci&oacute;n intestinal identific&oacute; una transcripci&oacute;n de alza que codifican una prote&iacute;na supuesta alto-movilidad-grupo caja (HMGB), EhHMGB1. Probamos si EhHMGB1 codifican una prote&iacute;na funcional de HMGB y determina su papel en el control de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de par&aacute;sito. EhHMGB1 recombinante fue capaz de doblar el ADN in vitro, una caracter&iacute;stica de las prote&iacute;nas HMGB. Residuos de n&uacute;cleo conservada necesarios para doblar la actividad en otras prote&iacute;nas HMGB de ADN fueron demostrados por el an&aacute;lisis mutacional esencial para la actividad EhHMGB1. EhHMGB1 tambi&eacute;n fue capaz de aumentar la Uni&oacute;n de p53 humana a su secuencia de ADN cognado in vitro, que se espera para una prote&iacute;na HMGB1. Microscopia confocal, usando los anticuerpos contra la prote&iacute;na recombinante, confirm&oacute; su localizaci&oacute;n nuclear. Sobreexpresi&oacute;n de EhHMGB1 en HM1:IMSS trofozoitos condujo a la modulaci&oacute;n de las 33 transcripciones implicadas en una variedad de funciones celulares. De &eacute;stos, 20 fueron tambi&eacute;n modulada en d&iacute;a 1 o el d&iacute;a 29 en el modelo murino de la amebiasis intestinal. En particular, cuatro transcripciones con papeles conocidos en virulencia, incluyendo dos cadenas ligeras de la lectina de Gal/GalNAc, de codificaci&oacute;n fueron moduladas en respuesta a la sobreexpresi&oacute;n de EhHMGB1. Llegamos a la conclusi&oacute;n que EhHMGB1 era una prote&iacute;na buena fe de HMGB con capacidad para recapitular parte de la modulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de par&aacute;sito huaycos adaptaci&oacute;n al intestino del hu&eacute;sped.

Caracterizaci&oacute;n de una prote&iacute;na de alta movilidad-grupo caja de Entamoeba histolytica inducida durante la infecci&oacute;n intestinal.

&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x514B;&#x9686;&#x5206;&#x652F;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x662F;&#x662F;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6027;&#x75E2;&#x75BE;&#x548C;&#x809D;&#x8113;&#x80BF;&#x7684;&#x75C5;&#x56E0;&#x4EE3;&#x7406;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E0E;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x5DF2;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0E;&#x6BD2;&#x529B;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x5F88;&#x591A;&#x8C03;&#x5236;&#x8A8A;&#x672C;&#x51FD;&#x6570;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x548C;&#x5176;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4EE3;&#x8868;&#x6C60;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x548C;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x5C06;&#x662F;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x514B;&#x9686;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684; Gateway((R)) &#x6765;&#x751F;&#x6210; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x591A;&#x73AF;&#x82B3;&#x70C3;-DEST &#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6548;&#x7528;&#xFF0C;&#x77E2;&#x91CF;&#x7528;&#x6765;&#x6784;&#x5EFA;&#x8D28;&#x7C92;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7248;&#x672C;&#x7684; EHI_144490&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x94FE;&#x7403;&#x83CC; myc &#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6ECB;&#x517B;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0E; Gateway((R)) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x5E94;&#x4FBF;&#x5229;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;

&#x514B;&#x9686;&#x4E0E;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x7F51;&#x5173;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;

The early branching eukaryote Entamoeba histolytica is a human parasite that is the etiologic agent of amebic dysentery and liver abscess. The sequencing of the E. histolytica genome combined with the development of an E. histolytica microarray has resulted in the identification of several distinct gene expression profiles associated with virulence. The function of many modulated transcripts is unknown and their role in pathogenicity is unclear. They however represent a pool of potential virulence factors that could be targets for the development of novel therapeutics. Efficient tools and methods to characterize these novel virulence-associated genes and proteins would be beneficial. Here we report the use of the Gateway((R)) cloning system to generate the E. histolytica expression vector pAH-DEST. To test the usefulness of this system, the vector was used to construct a plasmid containing a recombinant version of the locus EHI_144490, which encoded a protein of unknown function. The recombinant gene was expressed and the recombinant protein, which was strep-myc-tagged, showed a cytoplasmic localization in transfected trophozoites. This expression vector with the Gateway((R)) system should facilitate investigation into the functions of novel proteins in E. histolytica.

Development of the Gateway system for cloning and expressing genes in Entamoeba histolytica.

La ramification pr&eacute;coce eucaryote Entamoeba histolytica est un parasite humain qui est l&#39;agent &eacute;tiologique de la dysenterie amibienne et abc&egrave;s du foie. Le s&eacute;quen&ccedil;age du g&eacute;nome d &#39; Entamoeba histolytica combin&eacute; avec le d&eacute;veloppement d&#39;un micror&eacute;seau d&#39;Entamoeba histolytica a permis l&#39;identification de plusieurs profils d&#39;expression g&eacute;nique distincts associ&eacute;s avec virulence. La fonction de nombreuses transcriptions modul&eacute;es est inconnue et leur r&ocirc;le dans la pathog&eacute;nie n&#39;est pas clair. Cependant, ils repr&eacute;sentent un ensemble de facteurs de virulence potentiels qui pourraient &ecirc;tre des cibles pour le d&eacute;veloppement de traitements novateurs. Des outils efficaces et des m&eacute;thodes pour caract&eacute;riser ces nouveaux g&egrave;nes associ&eacute;s &agrave; la virulence et les prot&eacute;ines serait b&eacute;n&eacute;fiques. Nous rapportons ici l&#39;utilisation de la Gateway((R)) syst&egrave;me de clonage pour g&eacute;n&eacute;rer l&#39;Entamoeba histolytica expression vector HAP-DEST. Pour tester l&#39;utilit&eacute; de ce syst&egrave;me, le vecteur utilis&eacute; pour construire un plasmide contenant une version recombin&eacute;e du locus EHI_144490, cod&eacute;s d&#39;une prot&eacute;ine de fonction inconnue. Le g&egrave;ne recombinant a &eacute;t&eacute; exprim&eacute; et la prot&eacute;ine recombinante, qui &eacute;tait le strep-myc-tag, ont montr&eacute; une localisation cytoplasmique en trophozo&iuml;tes transfect&eacute;es. Ce vecteur d&#39;expression avec le syst&egrave;me de Gateway((R)) devrait faciliter l&#39;enqu&ecirc;te sur les fonctions des prot&eacute;ines nouvelles dans E. histolytica.

D&eacute;veloppement du syst&egrave;me de clonage et d&#39;exprimer des g&egrave;nes &agrave; Entamoeba histolytica Gateway.

Die fr&uuml;hen Verzweigung Eukaryote Entamoeba Histolytica ist ein menschlicher Parasit, der die &auml;tiologische Agent von Amebic Dysenterie und Leber Abszess. Die Sequenzierung des Genoms E. Histolytica kombiniert mit der Entwicklung einer E. Histolytica Microarray f&uuml;hrte die Identifizierung mehrerer unterschiedliche Gen-Ausdruck-Profile, die Virulenz zugeordnet. Die Funktion von vielen modulierten Mitschriften ist unbekannt, und ihre Rolle bei der Pathogenit&auml;t ist unklar. Sie stellen jedoch einen Pool von potenziellen Virulenzfaktoren, die Ziele f&uuml;r die Entwicklung neuartiger Therapeutika sein k&ouml;nnte. Effiziente Werkzeuge und Methoden, diese neuartige Virulenz-assoziierten Gene und Proteine zu charakterisieren w&auml;re vorteilhaft. Hier berichten wir &uuml;ber die Verwendung der Gateway((R)) System zu klonen, die E. Histolytica Ausdruck Vektor Pak-DEST zu generieren. Um die N&uuml;tzlichkeit dieses Systems zu testen, wurde der Vektor verwendet, um ein Plasmid enth&auml;lt eine rekombinante Version des Orts EHI_144490, die kodiert ein Protein unbekannter Funktion zu konstruieren. Das rekombinante gen dr&uuml;ckte und das rekombinante Protein, das Strep-Myc-Tag war, zeigte eine cytoplasmatische Lokalisierung in transfizierte Trophozoiten. Dieser Ausdruck Vektor mit dem Gateway((R))-System sollte die Untersuchung &uuml;ber die Funktionen der neuartige Proteine in E. Histolytica erleichtern.

Entwicklung des Gateway-Systems f&uuml;r das Klonen und Ausdruck der Gene in Entamoeba Histolytica.

La precoce ramificazione dell&#39;eucariota Entamoeba histolytica &egrave; un parassita umano che &egrave; l&#39;agente eziologico della dissenteria amebica e ascesso epatico. Il sequenziamento del genoma di E. histolytica combinato con lo sviluppo di un microarray E. histolytica ha portato all&#39;individuazione dei diversi profili di espressione genica distinti associati con virulenza. La funzione di molte trascrizioni modulate &egrave; sconosciuta e il loro ruolo nella patogenicit&agrave; &egrave; poco chiaro. Essi rappresentano tuttavia un pool di potenziali fattori di virulenza che potrebbero essere gli obiettivi per lo sviluppo di nuove terapie. Efficienti strumenti e metodi per caratterizzare questi nuovi geni di virulenza associati e proteine sarebbe utile. Qui riportiamo l&#39;uso di Gateway((R)) sistema di clonazione per generare l&#39;e. histolytica espressione vettoriale pAH-DEST. Per testare l&#39;utilit&agrave; di questo sistema, il vettore &egrave; stato utilizzato per costruire un plasmide contenente una versione ricombinante del locus EHI_144490, che codifica una proteina a funzione sconosciuta. Il gene ricombinante &egrave; stato espresso e la proteina ricombinante, che &egrave; stata mal-myc-tagged, ha mostrato una localizzazione citoplasmatica in trofozoiti transfected. Questo vettore di espressione con il sistema Gateway((R)) dovrebbe facilitare inchiesta le funzioni delle proteine romanzo di E. histolytica.

Sviluppo del sistema di Gateway per la clonazione e l&#39;espressione dei geni di Entamoeba histolytica.

&#x521D;&#x671F;&#x5206;&#x5C90;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6027;&#x8D64;&#x75E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x81BF;&#x760D;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3084;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3084;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x6709;&#x76CA;&#x3067; &#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x5F0F;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; pAH-DEST &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x4F5C;&#x6210; Gateway((R)) &#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; EHI_144490 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x9023;&#x9396;&#x7403;&#x83CC; myc &#x30BF;&#x30B0;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728; transfected &#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; Gateway((R)) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x3067;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

&#xCD08;&#xBC18; &#xBD84;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C; Entamoeba histolytica amebic&#xC774; &#xC9C8;&#xACFC; &#xAC04; &#xB18D; &#xC591;&#xC758; etiologic &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC774;&#xB2E4;. E. histolytica microarray &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; E. histolytica &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1;&#xC740; &#xB3C5;&#xC131;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xBCC0;&#xC870; &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xACE0; pathogenicity&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD480;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC640; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xB3C5;&#xC131; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; E. histolytica &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; pAH-DEST &#xC0DD;&#xC131; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBCF5;&#xC81C; Gateway((R)) &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xBCA1;&#xD130; EHI_144490 &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD568;&#xC218; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC84;&#xC804;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; strep myc &#xD0DC;&#xADF8;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; transfected trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Gateway((R)) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCA1;&#xD130; E. histolytica &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD574;&#xC57C;.

&#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; Entamoeba histolytica&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

El temprano ramificaci&oacute;n eucariotas Entamoeba histolytica es un par&aacute;sito humano que es el agente etiol&oacute;gico de la disenter&iacute;a amebiana y absceso hep&aacute;tico. La secuenciaci&oacute;n del genoma de E. histolytica, combinado con el desarrollo de un microarray de E. histolytica ha dado como resultado la identificaci&oacute;n de varios perfiles de expresi&oacute;n de distintos genes asociados a virulencia. La funci&oacute;n de muchas transcripciones moduladas es desconocida y su papel en la patogenicidad est&aacute; claro. Sin embargo, representan un conjunto de factores de virulencia potenciales que podr&iacute;an ser objetivos para el desarrollo de nuevas terapias. Eficientes herramientas y m&eacute;todos para caracterizar estos nuevos genes asociados a virulencia y prote&iacute;nas ser&iacute;a beneficiosos. Aqu&iacute; divulgamos el uso de la Gateway((R)) sistema de clonaci&oacute;n para generar la E. histolytica expresi&oacute;n vector pAH-DEST. Para comprobar la utilidad de este sistema, el vector se utiliz&oacute; para la construcci&oacute;n de un pl&aacute;smido que contiene una versi&oacute;n recombinante del locus EHI_144490, que codifican una prote&iacute;na de funci&oacute;n desconocida. Se expres&oacute; el gen recombinante y la prote&iacute;na recombinante, que fue etiquetado como estreptococos-myc, demostr&oacute; una localizaci&oacute;n citopl&aacute;smica en trofozoitos transfected. Este vector de expresi&oacute;n con el sistema Gateway((R)) debe facilitar la investigaci&oacute;n sobre las funciones de nuevas prote&iacute;nas en E. histolytica.

Desarrollo del sistema Gateway para la clonaci&oacute;n y expresi&oacute;n de genes en Entamoeba histolytica.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0A;&#x6E38;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5143;&#x7D20; 3 &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (URE3-BP) &#x662F;&#x4E24;&#x4E2A; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x81F4;&#x75C5;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; hgl5 &#x548C; fdx1 &#x7684;&#x9499;&#x53CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x3002;URE3 BP &#x4EE5;&#x524D;&#x662F;&#x7531;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5E8F;&#x5217;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; hgl5 &#x548C; fdx1 TATTCTATT &#xFF08;&#x4E0A;&#x6E38;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5143;&#x7D20; 3 &#xFF08;URE3&#xFF09;&#xFF09; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x86CB;&#x767D;&#x9175;&#x6BCD;&#x5355;&#x6742;&#x4EA4;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6240;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x7531;&#x7535;&#x6CF3;&#x8FC1;&#x79FB;&#x8F6C;&#x53D8;&#x68C0;&#x6D4B; (EMSA) &#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x5730;-&#x53D6;&#x4EE3;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4F7F;&#x7528; episomal &#x8BB0;&#x8005;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x5171;&#x8BC6;&#x6BCD;&#x9898;&#x8FDB;&#x884C;&#x5171;&#x8BC6; URE3 &#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EA7;&#x751F;&#x663E;&#x6027;&#x9633;&#x6027; URE3-BP &#x4E00;&#x682A;&#x88AB;&#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x6765;&#x67E5;&#x660E;&#x989D;&#x5916;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x8282;&#x7531; URE3 BP.&#x4E94;&#x5341;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; EMSA &#x4E3B;&#x9898; [&#x5728;] [tgc] [tg] [atg] [tc] [cg] T T T &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x534A;&#x6570;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x53D1;&#x8D77;&#x4EBA; (54 %p &lt; 0.0001)&#x3002;&#x5341;&#x4E94;&#x5C81;&#x7684; URE3-BP &#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x63D0;&#x8BAE; URE3 BP &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E4B;&#x4E00;&#x8981;&#x91CD;&#x5851;&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7;&#x54CD;&#x5E94; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;URE3 BP &#x611F;&#x5E94;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0; tranwell &#x8FC1;&#x79FB;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x529B;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; URE3 BP&#x3002;

The Entamoeba histolytica transcription factor Upstream Regulatory Element 3-Binding Protein (URE3-BP) is a calcium-responsive regulator of two E. histolytica virulence genes, hgl5 and fdx1. URE3-BP was previously identified by a yeast one-hybrid screen of E. histolytica proteins capable of binding to the sequence TATTCTATT (Upstream Regulatory Element 3 (URE3)) in the promoter regions of hgl5 and fdx1. In this work, precise definition of the consensus URE3 element was performed by electrophoretic mobility shift assays (EMSA) using base-substituted oligonucleotides, and the consensus motif validated using episomal reporter constructs. Transcriptome profiling of a strain induced to produce a dominant-positive URE3-BP was then used to identify additional genes regulated by URE3-BP. Fifty modulated transcripts were identified, and of these the EMSA defined motif T[atg]T[tc][cg]T[at][tgc][tg] was found in over half of the promoters (54% p<0.0001). Fifteen of the URE3-BP regulated genes were potential membrane proteins, suggesting that one function of URE3-BP is to remodel the surface of E. histolytica in response to a calcium signal. Induction of URE3-BP leads to an increase in tranwell migration, suggesting a possible role in the regulation of cellular motility.

Targets of the Entamoeba histolytica transcription factor URE3-BP.

Le facteur de transcription Entamoeba histolytica amont r&eacute;glementation &eacute;l&eacute;ment 3-Binding Protein (URE3-BP) est un r&eacute;gulateur de calcium-sensible des deux g&egrave;nes de virulence d&#39;Entamoeba histolytica, hgl5 et fdx1. URE3-BP a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; identifi&eacute;e par un &eacute;cran d&#39;un hybride de levure d&#39;Entamoeba histolytica prot&eacute;ines capables de se lier &agrave; la s&eacute;quence TATTCTATT (r&eacute;glementation en amont &eacute;l&eacute;ment 3 (URE3)) dans les r&eacute;gions promotrices de hgl5 et fdx1. Dans ce travail, la d&eacute;finition pr&eacute;cise de l&#39;&eacute;l&eacute;ment de consensus URE3 a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e par des essais de changement de mobilit&eacute; &eacute;lectrophor&eacute;tique (EMSA) utilisant des oligonucl&eacute;otides base substitu&eacute;s et le motif consensus valid&eacute; &agrave; l&#39;aide de constructions de journaliste &eacute;pisomiques. Transcriptome de profilage d&#39;une souche induite pour produire un dominante positive URE3-BP a ensuite &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour identifier les g&egrave;nes suppl&eacute;mentaires r&eacute;gies par la URE3-BP. cinquante modul&eacute;es transcriptions ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es et ces le motif d&eacute;fini l&#39;AESM T [atg] T [tc] [cg] T [at] [tgc] [tg] a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; dans plus de la moiti&eacute; des promoteurs (54 % p &lt; 0,0001). Quinze ans de la URE3-BP g&egrave;nes r&eacute;gul&eacute;s sont des prot&eacute;ines membranaires potentiels, sugg&eacute;rant qu&#39;une des fonctions de URE3-BP est de remodeler la surface d&#39;e. histolytica en r&eacute;ponse &agrave; un signal calcique. Induction de la URE3-BP conduit &agrave; une augmentation des migrations tranwell, sugg&eacute;rant un r&ocirc;le possible dans la r&eacute;gulation de la motilit&eacute; cellulaire.

Objectifs de la transcription de histolytica d&#39;Entamoeba facteur URE3-BP.

Entamoeba Histolytica Transkriptionsfaktors Upstream Regulatory Element 3-Binding Protein (URE3-BP) ist ein Kalzium-responsive Regulator der zwei E. Histolytica Virulenzgene, hgl5 und fdx1. URE3-BP nannte zuvor eine Hefe eins-Mischling Bildschirm E. Histolytica Proteine binden an die Sequenz TATTCTATT (Upstream Regulatory Element 3 (URE3)) in den Regionen Projekttr&auml;ger hgl5 und fdx1 f&auml;hig. In dieser Arbeit erfolgte genaue Definition des Elements Konsens URE3 durch elektrophoretische Mobilit&auml;t UMSCHALT Assays (EMSA) mit Base-substituierte Oligonukleotide und das Konsens-Motiv mit episomale Reporter Konstrukte validiert. Transkriptom Profilerstellung f&uuml;r eine Belastung induzierte eine Dominant-positiven URE3-BP produzieren wurde dann verwendet, um zus&auml;tzliche Gene reguliert durch URE3-BP. f&uuml;nfzig modulierte Abschriften wurden ermittelt und davon das EMSA definiert Motiv T [Atg] T [Tc] [cg] T [at] [Tgc] [SF] fand sich in mehr als die H&auml;lfte der Promotoren zu identifizieren (54 % p &lt; 0,0001). F&uuml;nfzehn der URE3-BP reguliert Gene wurden potenzielle Membranproteine, was darauf hindeutet, dass eine Funktion der URE3-BP ist die Oberfl&auml;che von E. Histolytica als Reaktion auf ein Signal von Kalzium umzugestalten. Induktion von URE3-BP f&uuml;hrt zu einem Anstieg der Tranwell Migration, was auf eine m&ouml;gliche Rolle bei der Regulation des zellul&auml;ren Motilit&auml;t.

Ziele der Entamoeba Histolytica Transkription Faktor URE3-BP.

Il fattore di trascrizione di Entamoeba histolytica Upstream Regulatory Element 3-Binding Protein (URE3-BP) &egrave; un calcio-reattivo regolatore di due geni di virulenza E. histolytica, hgl5 e fdx1. URE3-BP era identificato da uno schermo di un ibrido lievito di E. histolytica proteine in grado di legarsi alla sequenza TATTCTATT (Upstream Regulatory Element 3 (URE3)) nelle regioni promotore di hgl5 e fdx1. In questo lavoro, una definizione precisa dell&#39;elemento consenso URE3 fu eseguita da dosaggi di shift mobilit&agrave; elettroforetica (EMSA) utilizzando oligonucleotidi base-sostituiti e il motivo del consenso convalidato utilizzando costrutti reporter episomal. Transcriptome profilatura di una tensione indotta per produrre un positivo dominante URE3-BP &egrave; stato poi utilizzato per identificare ulteriori geni regolati da cinquanta URE3-BP modulate trascrizioni sono state identificate e di questi il motivo dell&#39;EMSA definito T [atg] T [tc] [cg] T [a] [tgc] [GS] &egrave; stato trovato in pi&ugrave; della met&agrave; dei promotori (54% p &lt; 0.0001). Quindici anni di URE3-BP regolato geni erano potenziali proteine di membrana, suggerendo che una funzione di URE3-BP &egrave; di rimodellare la superficie di E. histolytica in risposta ad un segnale di calcio. Induzione di URE3-BP conduce ad un aumento della migrazione tranwell, suggerendo un possibile ruolo nella regolazione della motilit&agrave; cellulare.

Obiettivi della trascrizione Entamoeba histolytica fattore URE3-BP.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0A;&#x6D41;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; 3 &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (URE3 BP) &#x306F;&#x3001;2 &#x3064; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;hgl5&#x3001;fdx1 &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;URE3 BP &#x306F;&#x4EE5;&#x524D; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; TATTCTATT (&#x4E0A;&#x6D41;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; 3 (URE3)) &#x306E; hgl5 &#x3068; fdx1 &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x30A4;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8; 1 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9; URE3 &#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;-&#x7F6E;&#x63DB;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068; episomal &#x8A18;&#x8005;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x6027;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; (EMSA) &#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;.&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x967D;&#x6027;&#x306E; URE3 BP &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; URE3 &#x8DEA;&#x304F;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x304C;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;50 &#x3068;&#x5B9A;&#x7FA9; EMSA &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; T [atg] T [tc] [cg] T [tgc] [tg] &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B; (54 %p &lt; 0.0001&#xFF09;&#x3002;15 URE3 BP &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x95A2;&#x6570; URE3 BP &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3059;&#x308B; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x6539;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x3002;URE3 BP &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E; tranwell &#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x8EE2;&#x5199; URE3 BP &#x8981;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Entamoeba histolytica &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC740; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; 3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (URE3-BP) &#xB450; E. histolytica &#xB3C5;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, hgl5 &#xBC0F; fdx1&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. URE3 BP&#xB294; E. histolytica &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; TATTCTATT (&#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; 3 (URE3)) hgl5 &#xBC0F; fdx1&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD55C; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC740;, &#xD569;&#xC758; URE3 &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC815;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB3D9;&#xC131; &#xAD50;&#xB300; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; (EMSA) &#xC790;&#xB8CC; &#xB300;&#xCCB4; oligonucleotides episomal &#xAE30;&#xC790; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xD569;&#xC758; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; URE3 bp. 50 &#xBCC0;&#xC870; &#xC131;&#xC801;&#xD45C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC815;&#xC758; EMSA &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; T [atg] T [tc] [cg] T [&#xC5D0;] [tgc] [tg] &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC808;&#xBC18; &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; Transcriptome &#xC9C0;&#xBC30; &#xC591;&#xC131; URE3 BP &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC720;&#xBC1C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; (54 %p &lt; 0.0001). URE3-&#xD608;&#xC555;&#xC758; 15 &#xADDC;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, URE3 BP&#xC758; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; E. histolytica &#xCE7C;&#xC298; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC744; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. URE3 BP&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; tranwell &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00;&#xB85C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0B8;&#xB2E4;.

Entamoeba histolytica &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC694;&#xC18C; URE3 &#xD608;&#xC555;.

El factor de transcripci&oacute;n de Entamoeba histolytica 3 de elemento regulador Upstream-Binding Protein (URE3-BP) es un regulador sensible al calcio de dos genes de virulencia de E. histolytica, hgl5 y fdx1. URE3-BP fue identificada previamente por una pantalla de un h&iacute;brido de la levadura de E. histolytica prote&iacute;nas capaces de unirse a la secuencia TATTCTATT (Upstream regulador elemento 3 (URE3)) en las regiones promotoras de hgl5 y fdx1. En este trabajo, una definici&oacute;n precisa del elemento consenso URE3 fue realizada por an&aacute;lisis de cambio de movilidad electrofor&eacute;tica (EMSA) utilizando oligonucle&oacute;tidos base-sustituido y el motivo de consenso validado utilizando construcciones episomal reportero. Transcriptoma perfiles de una tensi&oacute;n inducida para producir un URE3 dominante-positiva-BP fue utilizada para identificar genes adicionales regulados por URE3-BP. cincuenta moduladas transcripciones fueron identificadas y de estos el motivo EMSA definido T [atg] T [tc] [cg] T [arroba] [tgc] [tg] fue encontrado en m&aacute;s de la mitad de los promotores (54% p &lt; 0.0001). Quince de los URE3-BP regula genes fueron posibles prote&iacute;nas de la membrana, lo que sugiere que es una funci&oacute;n de URE3-BP remodelar la superficie de E. histolytica en respuesta a una se&ntilde;al de calcio. Inducci&oacute;n de URE3-BP conduce a un aumento en la migraci&oacute;n de tranwell, sugiriendo un posible papel en la regulaci&oacute;n de la motilidad celular.

Objetivos de la transcripci&oacute;n de Entamoeba histolytica factor URE3-BP.

&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4FBF;&#x5229;&#x6280;&#x672F;&#x8FC5;&#x901F;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x8FDB;&#x884C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x534F;&#x4F1A;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x8D21;&#x732E;&#x548C;&#x6BD2;&#x529B;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6B64;&#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;

&#x5229;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7814;&#x7A76;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x75C5;&#x673A;&#x3002;

The release of the Entamoeba histolytica genome has facilitated the development of techniques to survey rapidly and to relate gene expression with biology. The association and potential contribution of differential gene expression to the life cycle and the virulence of this protozoan parasite of humans are reviewed here.

Using differential gene expression to study Entamoeba histolytica pathogenesis.

La publication du g&eacute;nome Entamoeba histolytica a facilit&eacute; le d&eacute;veloppement de techniques d&#39;enqu&ecirc;te rapidement et faire le lien entre l&#39;expression des g&egrave;nes avec la biologie. L&#39;association et la contribution potentielle de l&#39;expression diff&eacute;rentielle des g&egrave;nes au cycle de vie et de la virulence de ce protozoaire parasite de l&#39;homme sont examin&eacute;es ici.

&Agrave; l&#39;aide d&#39;expression diff&eacute;rentielle des g&egrave;nes pour &eacute;tudier la pathogen&egrave;se de Entamoeba histolytica.

Die Freisetzung von Entamoeba Histolytica Genom hat die Entwicklung von Techniken, schnell zu &uuml;berblicken und Genexpression mit Biologie beziehen sich erleichtert. Die Vereinigung und den m&ouml;glichen Beitrag der differenziellen Genexpression auf den Lebenszyklus und die Virulenz dieser Protozoen-Parasiten des Menschen sind hier &uuml;berpr&uuml;ft.

Mithilfe von differenziellen Genexpression Entamoeba Histolytica Pathogenese zu studieren.

Il rilascio del genoma Entamoeba histolytica ha facilitato lo sviluppo di tecniche di indagine rapidamente e di correlare l&#39;espressione del gene con la biologia. L&#39;associazione e il potenziale contributo dell&#39;espressione genica differenziale al ciclo di vita e la virulenza di questo protozoo parassita degli esseri umani sono rivisti qui.

Utilizzo di espressione genica differenziale per studiare la patogenesi di Entamoeba histolytica.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5354;&#x4F1A;&#x3068;&#x5DEE;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x8CA2;&#x732E;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3092;&#x898B;&#x76F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5DEE;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Entamoeba histolytica &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD611;&#xD68C; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; protozoan &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xD1A0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCC28;&#xB3D9; &#xC9C4; &#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Entamoeba histolytica pathogenesis &#xACF5;&#xBD80;.

El lanzamiento del genoma Entamoeba histolytica ha facilitado el desarrollo de t&eacute;cnicas r&aacute;pidamente y se relacionan con la expresi&oacute;n g&eacute;nica con la biolog&iacute;a. Aqu&iacute; se repasan la asociaci&oacute;n y la contribuci&oacute;n potencial de expresi&oacute;n g&eacute;nica diferencial en el ciclo de vida y la virulencia de este protozoo par&aacute;sito de seres humanos.

Utilizando la expresi&oacute;n g&eacute;nica diferencial para estudiar la patogenesia de Entamoeba histolytica.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x4E0A;&#x6E38;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6; 3-&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (URE3-BP) &#x662F; Ca(2+) inhibitable &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7ED1;&#x5B9A; DNA &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x8BBE;&#x6CD5;&#x5145;&#x5B9E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x3002;URE3 BP &#x5728;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x6B64;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FA8;&#x522B; C2 &#x57DF;&#x5BB6;&#x65CF;&#x65B0;&#x6210;&#x5458; EhC2A&#xFF0C;URE3-BP 22 kDa Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;URE3 BP Immunoprecipitations &#x548C; EhC2A &#x8868;&#x660E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E0B;&#x7ECF;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x672C;&#x673A; EhC2A &#x7ED1;&#x5B9A;&#x78F7;&#x8102;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; 3.4 &#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5988;&#x5988;&#x514D;&#x8D39;&#x7ECF;&#x3002;&#x62DB;&#x8058;&#x5230;&#x78F7;&#x8102;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x91CD;&#x7EC4; URE3 BP EhC2A &#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x8868;&#x73B0;&#x5728; EhC2A &#x548C; URE3-BP &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;URE3 BP &#x548C; EhC2A &#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x80DE;&#x5185;&#x6D53;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x65F6;&#x6240;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x53CA;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x3002;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; EhC2A &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x663E;&#x8457;&#x8C03;&#x5236; URE3 BP &#x7BA1;&#x5236;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x7684; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA; EhC2A &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x5236; URE3 BP &#x901A;&#x8FC7;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x951A;&#x5B9A;&#x5230;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x78F7;&#x8102;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; EhC2A &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; URE3 BP &#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;

The Entamoeba histolytica upstream regulatory element 3-binding protein (URE3-BP) is a transcription factor that binds DNA in a Ca(2+)-inhibitable manner. The protein is located in both the nucleus and the cytoplasm but has also been found to be enriched in the plasma membrane of amebic trophozoites. We investigated the reason for the unusual localization of URE3-BP at the amebic plasma membrane. Here we identify and characterize a 22-kDa Ca(2+)-dependent binding partner of URE3-BP, EhC2A, a novel member of the C2-domain superfamily. Immunoprecipitations of URE3-BP and EhC2A showed that the proteins interact and that such interaction was enhanced in the presence of Ca(2+). Recombinant and native EhC2A bound phospholipid liposomes in a Ca(2+)-dependent manner, with half-maximal binding occurring at 3.4 muM free Ca(2+). A direct interaction between EhC2A and URE3-BP was demonstrated by the ability of recombinant EhC2A to recruit recombinant URE3-BP to phospholipid liposomes in a Ca(2+)-dependent manner. URE3-BP and EhC2A were observed to translocate to the amebic plasma membrane upon an increase in the intracellular Ca(2+) concentration of trophozoites, as revealed by subcellular fractionation and immunofluorescent staining. Short hairpin RNA-mediated knockdown of EhC2A protein expression significantly modulated the mRNA levels of URE3-BP-regulated transcripts. Based on these results, we propose a model for EhC2A-mediated regulation of the transcriptional activities of URE3-BP via Ca(2+)-dependent anchoring of the transcription factor to the amebic plasma membrane.

Phospholipid-binding protein EhC2A mediates calcium-dependent translocation of transcription factor URE3-BP to the plasma membrane of Entamoeba histolytica.

La prot&eacute;ine de liaison 3 d&#39;Entamoeba histolytica &eacute;l&eacute;ment r&eacute;gulateur en amont (URE3-BP) est un facteur de transcription qui lie l&#39;ADN de fa&ccedil;on inhibitable par Ca(2+). La prot&eacute;ine est situ&eacute;e dans le noyau et le cytoplasme, mais s&#39;est aussi av&eacute;r&eacute;e &ecirc;tre enrichi dans la membrane plasmique des trophozo&iuml;tes amibien. Nous avons &eacute;tudi&eacute; la raison de la localisation inhabituelle de URE3-BP &agrave; la membrane plasmique amibien. Ici nous identifier et de caract&eacute;riser un partenaire de liaison de 22 kDa Ca(2+) d&eacute;pendant de URE3-BP, EhC2A, nouveau membre de la superfamille C2-domaine. Immunopr&eacute;cipitation de la URE3-BP et EhC2A ont montr&eacute; que les prot&eacute;ines interagissent et qu&#39;une telle interaction est augment&eacute;e en pr&eacute;sence de le Ca(2+). EhC2A recombinante et native li&eacute; liposomes de phospholipides d&#39;une mani&egrave;re Ca(2+)-d&eacute;pendante, avec liaison maximale se produisant &agrave; 3.4 maman gratuit Ca(2+). Une interaction directe entre EhC2A et URE3-BP a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e par la capacit&eacute; de recombinaison EhC2A de recruter recombinant URE3-BP aux liposomes de phospholipides d&#39;une mani&egrave;re Ca(2+)-d&eacute;pendante. URE3-BP EhC2A a observ&eacute; et translocation vers la membrane plasmique amibien sur une augmentation de la concentration intracellulaire de Ca(2+) de trophozo&iuml;tes, telle que r&eacute;v&eacute;l&eacute;e par fractionnement subcellulaire et immunofluorescence. &Eacute;pingle &agrave; cheveux court-mediated RNA knockdown de l&#39;expression des prot&eacute;ines EhC2A modul&eacute; significativement les taux d&#39;ARNm des transcriptions URE3-BP-r&eacute;gl&eacute;es. Selon ces r&eacute;sultats, nous proposons un mod&egrave;le de m&eacute;diation EhC2A r&eacute;glementation de l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de URE3-BP via Ca(2+)-d&eacute;pendante d&#39;ancrage du facteur de transcription &agrave; la membrane plasmique amibien.

Prot&eacute;ine liant le phospholipide EhC2A intervient dans la translocation du facteur de transcription URE3-BP &agrave; la membrane plasmique d&#39;Entamoeba histolytica calcium-d&eacute;pendante.

Das Entamoeba Histolytica upstream regulatorischen Element 3-verbindliches Protein (URE3-BP) ist ein Transkriptionsfaktor, der in gewissem Sinne Ca(2+) inhibitable DNA bindet. Das Protein in den Zellkern und Zytoplasma liegt aber auch wurde gefunden, in der Plasmamembran von amebic Trophozoiten bereichert werden. Wir untersuchten den Grund f&uuml;r die ungew&ouml;hnliche Sprachunterst&uuml;tzung f&uuml;r URE3-BP bei der amebic Plasmamembran. Hier wir erkennen und charakterisieren 22-kDa Ca(2+)-abh&auml;ngige Bindung Partner der URE3-BP, EhC2A, eine neuartige Mitglied der C2-Dom&auml;ne-Superfamilie. Immunpr&auml;zipitation von URE3-BP und EhC2A zeigten, dass die Proteine interagieren und derartige Interaktion in Anwesenheit von Ca(2+) gesteigert wurde. Rekombinanten und nativen EhC2A gebunden Phospholipid-Liposomen in gewissem Sinne Ca(2+)-abh&auml;ngige, mit halb-maximale Bindung am 3.4 Mama kostenlose Ca(2+). Eine direkte Interaktion zwischen EhC2A und URE3-BP zeigte die F&auml;higkeit der rekombinante EhC2A rekombinante URE3-BP auf Phospholipid-Liposomen in Ca(2+)-abh&auml;ngigen Weise zu rekrutieren. URE3-BP und EhC2A wurden beobachtet, um zu der amebic Plasmamembran auf eine Erh&ouml;hung der intrazellul&auml;ren Ca(2+) Konzentration von Trophozoiten, akkumulieren, wie durch Subzellulare Fraktionierung und Immunfluoreszenz-F&auml;rbung aufgedeckt. Kurze Haarnadel RNA-vermittelte Niederschlag von EhC2A Proteinexpression moduliert deutlich die mRNA-Niveaus der URE3 BP-regulierten Transkripte. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse schlagen wir ein Modell f&uuml;r EhC2A-vermittelte Verordnung der transkriptionelle Aktivit&auml;ten des URE3-BP &uuml;ber Ca(2+)-abh&auml;ngige Verankerung des Transkriptionsfaktors an der amebic Plasmamembran.

Phospholipid-verbindliches Protein EhC2A vermittelt die Kalzium-abh&auml;ngige Translokation der Transkriptionsfaktor URE3-BP auf der Plasmamembran von Entamoeba Histolytica.

L&#39;Entamoeba histolytica elemento normativo a Monte 3-binding protein (URE3-BP) &egrave; un fattore di trascrizione che si lega il DNA in un modo Ca(2+)-inhibitable. La proteina si trova in entrambi il nucleo e il citoplasma, ma inoltre &egrave; stata trovata per essere arricchito nella membrana del plasma dei trofozoiti amebica. Abbiamo studiato il motivo per cui la localizzazione insolita URE3-BP al membrana del plasma amebica. Qui noi identificare e caratterizzare un partner associazione Ca(2+)-dipendente di 22-kDa di URE3-BP, EhC2A, un membro della superfamiglia C2-dominio romanzo. Immunoprecipitazione di URE3-BP ed EhC2A hanno dimostrato che le proteine interagiscono e che tale interazione &egrave; stata rafforzata in presenza di Ca(2+). EhC2A ricombinante e nativo legato liposomi di fosfolipidi in modo Ca(2+)-dipendente, con met&agrave;-maximal vincolante che si verificano a 3,4 mamma libero Ca(2+). Un&#39;interazione diretta tra EhC2A e URE3-BP &egrave; stata dimostrata dalla capacit&agrave; di ricombinante EhC2A per reclutare ricombinante URE3-BP di liposomi di fosfolipidi in modo Ca(2+)-dipendente. URE3-BP ed EhC2A sono stati osservati a traslocano nella membrana plasmatica amebica su un aumento della concentrazione intracellulare di Ca(2+) di trofozoiti, come rivelato da frazionamento subcellulare e colorazione di immunofluorescenza. Short hairpin RNA-mediata atterramento di espressione della proteina EhC2A modulata in modo significativo i livelli di mRNA di trascrizioni URE3-BP-regolato. Basato su questi risultati, vi proponiamo un modello di regolamento EhC2A-mediato dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale dei URE3-BP via Ca(2+)-dipendente di ancoraggio del fattore di trascrizione per la membrana plasmatica amebica.

Fosfolipide-binding protein EhC2A media calcio-dipendente traslocazione del fattore di trascrizione URE3-BP alla membrana del plasma di Entamoeba histolytica.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x4E0A;&#x6D41;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; 3 &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (URE3 BP)&#x3001;Ca(2+) inhibitable &#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; DNA &#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6838;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x6804;&#x990A;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x578B;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;URE3 BP &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3067;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7406;&#x7531;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC; EhC2A&#x3001;URE3 BP &#x306E; 22 kDa Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;URE3 Immunoprecipitations BP &#x3068; EhC2A &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5F37;&#x5316;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x308A;&#x3093;&#x8102;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3068;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; EhC2A &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068; 3.4 &#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30DE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EhC2A &#x3068; URE3 BP &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; URE3 BP &#x308A;&#x3093;&#x8102;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x52DF;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; EhC2A &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;URE3 BP &#x3068; EhC2A &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x62D8;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E;&#x5206;&#x5225;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x67D3;&#x8272;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x578B; RNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; EhC2A &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306B; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; URE3 BP &#x898F;&#x5236;&#x8EE2;&#x5199;&#x7269;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; URE3 BP &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; EhC2A &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; EhC2A &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; URE3 BP &#x306E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Entamoeba histolytica &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; 3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (URE3-BP) Ca(2+) inhibitable &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; DNA&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD575;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; amebic trophozoites&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB18D;&#xCD95; &#xB420; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; amebic &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; URE3 &#xD608;&#xC555;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC720;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD30C;&#xC545; &#xD558; &#xACE0; URE3-&#xD608;&#xC555;, EhC2A, C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; superfamily&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; 22-kDa Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;. Immunoprecipitations&#xC758; URE3-BP EhC2A &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Ca(2+) &#xC874;&#xC7AC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; EhC2A Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9AC;, 3.4&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC18; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC73C;&#xB85C; &#xBB34;&#xB8CC; Ca(2+) &#xC5C4;&#xB9C8;. EhC2A &#xBC0F; URE3 &#xD608;&#xC555; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; URE3 BP Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; EhC2A &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Subcellular &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; immunofluorescent &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; URE3 BP&#xC640; EhC2A trophozoites, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; amebic &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xC774;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; EhC2A &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; URE3 BP &#xADDC;&#xC81C; &#xC131;&#xC801; &#xBCC0;&#xC870;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; amebic &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xBC15;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; URE3 BP&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; EhC2A &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; EhC2A &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; URE3 BP Entamoeba histolytica&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xC804; &#xC911;&#xC7AC;.

La prote&iacute;na de uni&oacute;n a 3 del elemento regulador upstream Entamoeba histolytica (URE3-BP) es un factor de transcripci&oacute;n que se une el ADN de una manera Ca(2+)-inhibitable. La prote&iacute;na se encuentra en el n&uacute;cleo y el citoplasma, pero tambi&eacute;n se ha encontrado para enriquecerse en la membrana plasm&aacute;tica de trophozoites am&eacute;bicos. Investigamos la raz&oacute;n para la localizaci&oacute;n inusual de URE3-BP en la membrana plasm&aacute;tica amebiana. Aqu&iacute; nos identificar y caracterizar socio de Uni&oacute;n 22 kDa Ca(2+) dependiente de URE3-BP, EhC2A, un nuevo miembro de la superfamilia de C2-dominio. Immunoprecipitations de URE3-BP y EhC2A demostraron que las prote&iacute;nas interactuar&aacute;n y que tal interacci&oacute;n mejor&oacute; en presencia de CA. EhC2A nativa y recombinante l&iacute;mite liposomas de fosfol&iacute;pidos en una forma dependiente de Ca(2+), con el atascamiento de la mitad-m&aacute;ximo que ocurre en 3.4 mam&aacute; CA libre. Una interacci&oacute;n directa entre EhC2A y URE3-BP fue demostrada por la capacidad de recombinante EhC2A para reclutar recombinante URE3-BP para liposomas de fosfol&iacute;pidos en una forma dependiente de Ca(2+). URE3-BP y EhC2A fueron observados a translocan a la membrana plasm&aacute;tica amebiana sobre un aumento en la concentraci&oacute;n de CA intracelular de trophozoites, seg&uacute;n lo revelado por fraccionamiento subcelular y tinci&oacute;n inmunofluorescente. Short hairpin mediada por RNA ca&iacute;da de expresi&oacute;n de la prote&iacute;na EhC2A hab&iacute;a modulada significativamente los niveles de mRNA de transcripciones URE3-BP-regulado. Basado en estos resultados, proponemos un modelo para la regulaci&oacute;n mediada por EhC2A de la actividad transcripcional de URE3-BP v&iacute;a Ca(2+)-dependiente anclar el factor de transcripci&oacute;n a la membrana plasm&aacute;tica amebiano.

Prote&iacute;na de uni&oacute;n a fosfol&iacute;pidos EhC2A media dependiente de calcio desplazamiento del factor de transcripci&oacute;n URE3-BP a la membrana plasm&aacute;tica de Entamoeba histolytica.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x5305;&#x542B;&#x8DE8;&#x819C;&#x6FC0;&#x9176; (TMKs) &#x5927;&#x548C;&#x65B0;&#x578B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x4E2A;&#x522B;&#x6ECB;&#x517B;&#x4E2D; TMKs &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x548C;&#x9065;&#x611F;&#x548C;&#x54CD;&#x5E94;&#x80DE;&#x5916;&#x63D0;&#x793A; TMKs &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A; TMKs &#x548C;&#x8BE5; TMK39 &#x53CA; TMK54 &#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x4EFB;&#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6FC0;&#x5149;&#x6355;&#x83B7;&#x663E;&#x5FAE;&#x5207;&#x5272;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E2D;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BC1;&#x660E;&#x5355;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x8868;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A; TMK &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x9488;&#x5BF9;&#x80DE;&#x5916;&#x7684; TMK39&#x3001; TMK54 &#x548C; PaTMK&#xFF0C;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x5730;&#x533A;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86; anti-peptide &#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x548C; TMK &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C34;&#x5E73;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x68C0;&#x6D4B;&#x663E;&#x793A;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x5747;&#x5300;&#x8868;&#x793A; TMK39&#x3001; TMK54 &#x548C; PaTMK&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; TMK39 &#x548C; TMK54 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;TMK39 &#x548C; TMK54 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x88AB;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7531;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x867D;&#x7136; TMK39 co-localised &#x4E0E;&#x6444;&#x53D6;&#x73E0;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x622A;&#x65AD; TMK39 &#x5E72;&#x6270;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x622A;&#x65AD; TMK54 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x6709;&#x58F3;&#x53D8;&#x5F62;&#x866B;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x91CD;&#x5206;&#x80A1; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; Gal/&#x591A;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x591A;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x65B0;&#x578B; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; TMK &#x7528;&#x4E8E;&#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x8DE8;&#x819C;&#x6FC0;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x975E;&#x5197;&#x4F59;&#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x548C;&#x541E;&#x566C;&#x3002;

Entamoeba histolytica contains a large and novel family of transmembrane kinases (TMKs). The expression patterns of the E. histolytica TMKs in individual trophozoites and the roles of the TMKs for sensing and responding to extracellular cues were incompletely characterised. Here we provide evidence that single cells express multiple TMKs and that TMK39 and TMK54 likely serve non-redundant cellular functions. Laser-capture microdissection was used in conjunction with microarray analysis to demonstrate that single trophozoites express more than one TMK gene. Anti-peptide antibodies were raised against unique regions in the extracellular domains of TMK39, TMK54 and PaTMK, and TMK expression was analysed at the protein level. Flow cytometric assays revealed that populations of trophozoites homogeneously expressed TMK39, TMK54 and PaTMK, while confocal microscopy identified different patterns of cell surface expression for TMK39 and TMK54. The functions of TMK39 and TMK54 were probed by the inducible expression of dominant-negative mutants. While TMK39 co-localised with ingested beads and expression of truncated TMK39 interfered with trophozoite phagocytosis of apoptotic lymphocytes, expression of a truncated TMK54 inhibited growth of amoebae and altered the surface expression of the heavy subunit of the E. histolytica Gal/GalNAc lectin. Overall, our data indicates that multiple members of the novel E. histolytica TMK family are utilised for non-redundant functions by the parasite.

Members of the Entamoeba histolytica transmembrane kinase family play non-redundant roles in growth and phagocytosis.

Entamoeba histolytica contient une famille nombreuse et roman de kinases transmembranaires (TMKs). Les patrons d&#39;expression de l&#39;e. histolytica TMKs en trophozo&iuml;tes individuels et les r&ocirc;les des TMKs pour la d&eacute;tection et de r&eacute;pondre aux signaux extracellulaires &eacute;taient incompl&egrave;tement caract&eacute;ris&eacute;es. Ici nous montrons que monocellules expriment plusieurs TMKs et que TMK39 et TMK54 susceptible de servir les fonctions cellulaires non redondantes. Microdissection laser-capture a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e en conjonction avec l&#39;analyse microarray pour d&eacute;montrer que les trophozo&iuml;tes unique expriment plus d&#39;un g&egrave;ne TMK. Anticorps anti-peptide ont &eacute;t&eacute; soulev&eacute;es contre des r&eacute;gions uniques dans les domaines extracellulaires de TMK39, TMK54 et PaTMK, et expression du TMK a &eacute;t&eacute; analys&eacute;e au niveau de la prot&eacute;ine. D&eacute;bit par cytom&eacute;trie en flux essais r&eacute;v&egrave;le que les populations des trophozo&iuml;tes homog&egrave;nement exprim&eacute; TMK39, TMK54 et PaTMK, tandis que la microscopie confocale identifi&eacute; diff&eacute;rents modes d&#39;expression &agrave; la surface cellulaire pour TMK39 et TMK54. Les fonctions de TMK39 et TMK54 ont &eacute;t&eacute; sond&eacute;es par l&#39;expression inductible de mutants dominant n&eacute;gatif. Tandis que TMK39 co-localised avec perles ing&eacute;r&eacute;s et expression de TMK39 tronqu&eacute; interf&eacute;r&eacute; avec la phagocytose des lymphocytes apoptotiques trophozo&iuml;te, expression d&#39;un TMK54 tronqu&eacute; inhibe la croissance des amibes et modifi&eacute; l&#39;expression en surface de la sous-unit&eacute; lourde de la lectine de Gal/GalNAc Entamoeba histolytica. Dans l&#39;ensemble, nos donn&eacute;es indiquent que plusieurs membres de la famille TMK roman d &#39; Entamoeba histolytica sont utilis&eacute;s pour les fonctions non redondantes par le parasite.

Membres de la famille de kinase transmembranaire Entamoeba histolytica jouent un r&ocirc;le non redondant dans la croissance et de la phagocytose.

Entamoeba Histolytica enth&auml;lt eine gro&szlig;e und neue Familie von Transmembran-Kinasen (TMKs). Der Ausdruck der die E. Histolytica TMKs in einzelnen Trophozoiten und die Rollen der TMKs f&uuml;r Sensorik und reagieren auf extrazellul&auml;re Signale waren unvollst&auml;ndig gepr&auml;gt. Hier stellen wir Hinweise darauf, dass die Einzelzellen express mehrere TMKs und die TMK39 und TMK54 wahrscheinlich dienen nicht-redundante Zellfunktionen. Laser Capture Microdissection wurde in Verbindung mit Microarray-Analyse nachweisen, dass einzelne Trophozoiten mehrere TMK gen Ausdr&uuml;cken verwendet. Anti-Peptide Antik&ouml;rper gegen eindeutige Regionen in den extrazellul&auml;ren Dom&auml;nen TMK39, TMK54 und PaTMK erhoben wurden, und TMK Ausdruck auf Protein-Ebene analysiert. Flussproben Cytometric ergab, dass Populationen von Trophozoiten homogen ausgedr&uuml;ckt TMK39, TMK54 und PaTMK, w&auml;hrend die konfokale Mikroskopie unterschiedliche Muster der Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck f&uuml;r TMK39 und TMK54 identifiziert. Die Funktionen TMK39 und TMK54 wurden durch Induktion Ausdruck Dominant Negative Mutanten sondiert. W&auml;hrend TMK39 mit aufgenommenen Perlen Co-localised und Ausdruck der abgeschnittene TMK39 Trophozoit Phagozytose von Apoptotic Lymphozyten eingemischt, Ausdruck der eine abgeschnittene TMK54 hemmte Wachstum von Am&ouml;ben und ver&auml;ndert den Oberfl&auml;chen Ausdruck der schwere Untereinheit der E. Histolytica Gal/GalNAc Lektine sonst. Insgesamt zeigt unsere Daten, dass mehrere Mitglieder der Familie TMK Roman E. Histolytica der Parasit f&uuml;r nicht-redundante Funktionen genutzt werden.

Entamoeba Histolytica Transmembran-Kinase Familienmitglieder spielen nicht-redundante Rollen in Wachstum und Phagozytose.

Entamoeba histolytica contiene una romanzo e grande famiglia del transmembrane chinasi (TMKs). I modelli di espressione della E. histolytica TMKs in trofozoiti individuali e i ruoli di TMKs per rilevamento e rispondere ai segnali extracellulari sono stati caratterizzati in modo incompleto. Qui forniamo prove che le singole cellule esprimono pi&ugrave; TMKs e che TMK39 e TMK54 probabilmente servono funzioni cellulari non ridondante. Microdissection del laser &egrave; stato utilizzato in combinazione con l&#39;analisi di microarray per dimostrare che trofozoiti singoli esprimono pi&ugrave; di un gene TMK. Anticorpi anti-peptide sono stati sollevati contro le uniche regioni nei domini extracellulari di TMK39, TMK54 e PaTMK, ed espressione TMK &egrave; stato analizzato a livello di proteine. Analisi cytometric di flusso ha rivelato che popolazioni di trofozoiti omogeneamente espresso TMK39, TMK54 e PaTMK, mentre la microscopia confocale identificati diversi pattern di espressione di superficie delle cellule per TMK39 e TMK54. Le funzioni di TMK39 e TMK54 sono state sondate dall&#39;espressione inducibile di mutanti dominante-negativo. Mentre TMK39 co-localised con perline ingeriti ed espressione di TMK39 troncato interferiva con la fagocitosi trofozoite di linfociti apoptotic, espressione di un TMK54 troncato ha inibito la crescita di amebe e alterato l&#39;espressione superficiale della subunit&agrave; pesante della lectina Gal/GalNAc E. histolytica. Nel complesso, i nostri dati indicano che pi&ugrave; membri della famiglia TMK romanzo E. histolytica sono utilizzati per le funzioni non ridondante dal parassita.

Membri della famiglia del transmembrane chinasi Entamoeba histolytica giocano ruoli non ridondanti in crescita e fagocitosi.

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306B;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x5BB6;&#x65CF;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (Tmk) &#x306B;&#x306F;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; Tmk &#x500B;&#x5225;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54; Tmk &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x8907;&#x6570; Tmk &#x3068;&#x305D;&#x306E; TMK39 &#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;TMK54 &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x975E;&#x5197;&#x9577;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3; &#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4; &#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x8907;&#x6570; TMK &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; TMK39&#x3001;TMK54&#x3001;PaTMK&#x3001;&#x4E00;&#x7FA9;&#x7684;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;TMK &#x5F0F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE; TMK39 &#x3068; TMK54 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x96C6;&#x56E3;&#x6804;&#x990A;&#x578B;&#x306E;&#x5747;&#x4E00; TMK39&#x3001;TMK54&#x3001;PaTMK&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;TMK39 &#x3068; TMK54 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x8ABF;&#x3079;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;TMK39 &#x6442;&#x53D6;&#x3057;&#x305F;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3068; co-localised&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; TMK39 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x866B;&#x5782;&#x8CAA;&#x98DF;&#x5E72;&#x6E09;&#x304C;&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; TMK54 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30AE;&#x30E3;&#x30EB;/GalNAc &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x3044;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x8AAC; E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; TMK &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x975E;&#x5197;&#x9577;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x8CAA;&#x98DF;&#x80FD;&#x306E;&#x975E;&#x5197;&#x9577;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Entamoeba histolytica &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; kinases (TMKs)&#xC758; &#xD070; &#xC18C;&#xC124; &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. E. histolytica &#xAC1C;&#xBCC4; trophozoites&#xC5D0;&#xC11C; Tmks&#xC758; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; Tmks&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xACF5; &#xC99D;&#xAC70; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC5EC;&#xB7EC; TMKs &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; TMK39 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; TMK54 &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC911;&#xBCF5; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xCEA1;&#xCC98; &#xC778; &#xB2E8;&#xC77C; trophozoites &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; TMK &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xC99D; microarray &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Anti-peptide &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; TMK39, TMK54 &#xBC0F; PaTMK, &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xAE30; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; TMK &#xC2DD;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD750;&#xB984; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; trophozoites&#xC758; homogeneously &#xD45C;&#xD604; TMK39, TMK54 &#xBC0F; PaTMK, confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; TMK39 &#xBC0F; TMK54 &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. TMK39 &#xBC0F; TMK54 &#xAE30;&#xB2A5; &#xC9C0;&#xBC30; &#xC74C;&#xC218;&#xAC00; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. TMK39 co-localised &#xC12D;&#xCDE8; &#xBE44;&#xC988; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; TMK39 &#xC2DD; trophozoite apoptotic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; tmk54&#xC758; &#xD45C;&#xD604; amoebae&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; E. histolytica Gal/GalNAc lectin&#xC758; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC18C;&#xC124; E. histolytica TMK &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC911;&#xBCF5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC740; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Entamoeba histolytica &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2C8; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xBCF5; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

Entamoeba histolytica contiene una familia grande y novela de quinasas transmembrana (TMKs). Los patrones de expresi&oacute;n de la E. histolytica TMKs en trofozoitos individuales y los papeles de las TMKs para la detecci&oacute;n y respuesta a las se&ntilde;ales extracelulares se caracterizaron incompleto. Aqu&iacute; proporcionamos evidencia que las c&eacute;lulas expresan m&uacute;ltiples TMKs y eso TMK39 y TMK54 probable que sirven las funciones celulares redundantes. Microdisecci&oacute;n l&aacute;ser captura fue utilizado en combinaci&oacute;n con el an&aacute;lisis de microarrays para demostrar que solo trofozoitos expresan m&aacute;s de un gen TMK. Anticuerpos anti-Peptide fueron levantados contra regiones &uacute;nicas en los dominios extracelulares de TMK39, TMK54 y PaTMK, y expresi&oacute;n de TMK se analiz&oacute; el nivel de prote&iacute;na. An&aacute;lisis de citometr&iacute;a de flujo revelaron que las poblaciones de trophozoites homog&eacute;neo expresan TMK39, TMK54 y PaTMK, mientras que la microscopia confocal identificaron diferentes patrones de expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula para TMK39 y TMK54. Las funciones de TMK39 y TMK54 probadas por la expresi&oacute;n inducible de mutantes dominantes negativos. Mientras que TMK39 co-localised con granos ingeridos y expresi&oacute;n de TMK39 truncado interfiri&oacute; con fagocitosis de trofozoito de linfocitos de la apoptosis, expresi&oacute;n de un TMK54 truncado inhibi&oacute; el crecimiento de las amebas y altera la expresi&oacute;n superficial de la subunidad pesada de las lectinas Gal/GalNAc de E. histolytica. En general, nuestros datos indican que varios miembros de la familia TMK novela de E. histolytica se utilizan para funciones redundantes por el par&aacute;sito.

Miembros de la familia de quinasa transmembrana de Entamoeba histolytica papel redundante en crecimiento y fagocitosis.

&#x4E0D;&#x7406;&#x89E3;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x4EC0;&#x4E48;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E9B;&#x611F;&#x67D3;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x5F15;&#x8D77;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x53D1;&#x73B0;&#x9499;&#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0A;&#x6E38;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6; 3-&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (URE3-BP) &#x51ED;&#x501F;&#x5176;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x81F4;&#x75C5;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; Gal/&#x591A;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x548C;&#x94C1;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x662F;&#x5426;&#x6B64;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5177;&#x6709;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6BD2;&#x529B;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x5BF9;&#x4F53;&#x5916;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;39%&#x4F53;&#x5185;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x8A8A;&#x672C;&#x8F7D;&#x4E8E; URE3-BP&#xFF0C;23%&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x53D1;&#x8D77;&#x4EBA;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6240;&#x627F;&#x8BA4;&#x7684; URE3 &#x4E3B;&#x9898; (P &lt; 0.0001)&#x3002;Amebae &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6765;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; URE3 BP &#x4E3B;&#x5BFC;&#x79EF;&#x6781;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x6709;&#x589E;&#x5E45;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x957F;&#x7684;&#x5F62;&#x6001; &#xFF08;30%+ 6%&#x548C; 14%+ /-5%&#xFF1B;P = 0.001)&#xFF0C;&#x5728;&#x4FB5;&#x5165;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E8C;&#x6298;&#x7ADE;&#x4E89;&#x4F18;&#x52BF; (P = 0.017)&#xFF0C;&#x548C;&#x809D;&#x8113;&#x80BF;&#x5927;&#x5C0F; (+ /-0.1 g &#x4E0E; 0.036 + /-0.1 g &#xFF1B; 0.1 &#x4E09;&#x6298;&#x589E;&#x52A0;P = 0.03&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x8C03;&#x8282; URE3 BP &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x6BD2;&#x529B;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; URE3 BP &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

It is not understood why only some infections with Entamoeba histolytica result in disease. The calcium-regulated transcription factor upstream regulatory element 3-binding protein (URE3-BP) was initially identified by virtue of its role in regulating the expression of two amebic virulence genes, the Gal/GalNac lectin and ferredoxin. Here we tested whether this transcription factor has a broader role in regulating virulence. A comparison of in vivo to in vitro parasite gene expression demonstrated that 39% of in vivo regulated transcripts contained the URE3 motif recognized by URE3-BP, compared to 23% of all promoters (P < 0.0001). Amebae induced to express a dominant positive mutant form of URE3-BP had an increase in an elongated morphology (30% +/- 6% versus 14% +/- 5%; P = 0.001), a 2-fold competitive advantage at invading the intestinal epithelium (P = 0.017), and a 3-fold increase in liver abscess size (0.1 +/- 0.1 g versus 0.036 +/- 0.1 g; P = 0.03). These results support a role for URE3-BP in virulence regulation.

Regulation of Virulence of Entamoeba histolytica by the URE3-BP Transcription Factor.

On ne comprend pas pourquoi seulement certaines infections par Entamoeba histolytica entra&icirc;nent la maladie. Prot&eacute;ine liant 3 &eacute;l&eacute;ment r&eacute;gulateur en amont de la calcium r&eacute;glement&eacute;s transcription factor (URE3-BP) a &eacute;t&eacute; initialement identifi&eacute;e en vertu de son r&ocirc;le dans la r&eacute;gulation de l&#39;expression de deux g&egrave;nes de virulence amibien, la lectine Gal/GalNac et la ferr&eacute;doxine. Ici, nous avons v&eacute;rifi&eacute; si ce facteur de transcription a un r&ocirc;le plus large dans la r&eacute;gulation de virulence. Une comparaison de l&#39;expression g&eacute;nique parasite in vivo en in vitro ont d&eacute;montr&eacute; que 39 % des transcriptions r&eacute;glement&eacute;es in vivo contient le motif URE3 reconnu par URE3-BP, compar&eacute;e &agrave; 23 % de tous les porteurs (P &lt; 0,0001). Amibiase incit&eacute; &agrave; exprimer une forme mutante dominante et positive de URE3-BP ont eu une augmentation dans une morphologie allong&eacute;e (30 % +/-6 % contre 14 % &plusmn; 5 % ; P = 0,001), un double avantage concurrentiel &agrave; envahir l&#39;&eacute;pith&eacute;lium intestinal (P = 0,017) et un triplement de la taille de l&#39;abc&egrave;s du foie (0.1 +/-0,1 g par rapport &agrave; 0,036 +/-0,1 g ; P = 0,03). Ces r&eacute;sultats confirment un r&ocirc;le pour URE3-BP dans le r&egrave;glement de la virulence.

R&egrave;glement de la Virulence d&#39;Entamoeba histolytica par le facteur de Transcription URE3-BP.

Es wird nicht verstanden, warum nur einige Infektionen mit Entamoeba Histolytica Krankheit f&uuml;hren. Das Kalzium-regulierte Transkription Faktor upstream regulatorischen Element 3-verbindliches Protein (URE3-BP) wurde zun&auml;chst aufgrund seiner Rolle bei der Regulierung des Ausdrucks der beiden amebic Virulenzgene, Gal/GalNac Lektin und Ferredoxin identifiziert. Hier haben wir getestet, ob dieser Transkriptionsfaktor eine gr&ouml;&szlig;ere Rolle hat bei der Regulierung der Virulenz. Ein Vergleich von in-vivo, in-vitro-Parasit-Genexpression nachgewiesen, dass 39 % der in-vivo regulierten Transkripte das Motiv des URE3 von URE3-BP enthielt, im Vergleich zu 23 % aller Gruppen erkannt (P &lt; 0,0001). Amebae induziert eine dominante positive mutierte Form der URE3-BP auszudr&uuml;cken hatte eine Steigerung in einem l&auml;nglichen Morphologie (30 % +/-6 % gegen&uuml;ber 14 % +/-5 %; P = 0,001), einen 2-fold Wettbewerbsvorteil bei der Invasion des intestinalen Epithel (P = 0,017), und einem 3-Band Anstieg der Leber Abszess Gr&ouml;&szlig;e (0.1 +/-0,1 g gegen&uuml;ber 0.036 +/-0,1 g; P = 0,03). Diese Ergebnisse unterst&uuml;tzen eine Rolle f&uuml;r URE3-BP in Virulenz-Verordnung.

Regulierung der Virulenz von Entamoeba Histolytica durch den Transkriptionsfaktor URE3-BP.

Non &egrave; capito perch&eacute; solo alcune infezioni da Entamoeba histolytica causare malattia. La trascrizione regolata calcio fattore elemento normativo a Monte 3-binding protein (URE3-BP) &egrave; stata inizialmente identificata in virt&ugrave; del suo ruolo nel regolare l&#39;espressione di due geni di virulenza amebica, il Gal/GalNac lectina e ferredossina. Qui abbiamo testato se questo fattore di trascrizione ha un ruolo pi&ugrave; ampio nella regolazione della virulenza. Un confronto di espressione del gene parassita in vivo a in vitro ha dimostrato che 39% delle trascrizioni regolamentate in vivo conteneva il motivo URE3 riconosciuto da URE3-BP, rispetto al 23% di tutti i promotori (P &lt; 0.0001). Amebae indotta per esprimere una forma mutante dominante positiva di URE3-BP ha avuto un aumento in una morfologia allungata (30% + /-6% contro il 14% &plusmn; 5%; P = 0,001), un vantaggio competitivo 2 volte a invadere l&#39;epitelio intestinale (P = 0,017) e un triplice aumento nella dimensione fegato ascesso (0.1 + 0.1 g versus 0,036 + /-0.1 g; P = 0,03). Questi risultati supportano un ruolo per URE3-BP nel regolamento di virulenza.

Regolamento di virulenza di Entamoeba histolytica dal fattore di trascrizione URE3-BP.

&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x306A;&#x305C;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x75C7;&#x306E;&#x307F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x304B;&#x306F;&#x308F;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0A;&#x6D41;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20; 3 &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (URE3 BP) &#x306F;&#x3001;&#x5F53;&#x521D; 2 &#x3064;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;, &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30AE;&#x30E3;&#x30EB;/GalNac &#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x304A;&#x304B;&#x3052;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;39 &#xFF05; in vivo &#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x7E3E;&#x8A3C;&#x660E;&#x66F8;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E; 23 &#xFF05; &#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066; URE3 bp &#x793E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58; URE3 &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x304C;&#x4F53;&#x5916;&#x306B; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; (P &lt; 0.0001&#xFF09;&#x3002;URE3 BP &#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Amebae &#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x9577;&#x3044;&#x306E;&#x5F62;&#x614B; &#xFF08;30 &#xFF05; &plusmn; 6% &#x5BFE; 14 &#xFF05; &plusmn; 5%;P = 0.001&#xFF09;&#x3001;&#x8178;&#x4E0A;&#x76AE;&#x4FB5;&#x5165;&#x3067; 2 &#x500D;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x512A;&#x4F4D;&#x6027; (P = 0.017)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x81BF;&#x760D;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA; (+/+/-0.1 g; 0.036 &#x5BFE; 0.1 g 0.1 &#x306E; 3 &#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;P = 0.03)&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5F79;&#x5272; URE3-BP &#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

URE3 BP &#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

&#xC65C; Entamoeba histolytica&#xC640; &#xC77C;&#xBD80; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xC774;&#xD574;. &#xCE7C;&#xC298;&#xC744; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; 3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (URE3-BP)&#xB294; &#xCC98;&#xC74C; &#xB450; amebic &#xB3C5;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, Gal/GalNac lectin ferredoxin&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xB355;&#xD0DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C;&#xC774; &#xD544; &#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xB3C5;&#xC131; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Vivo&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xC2DC;&#xC5F0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xC758; 39 %ure3-&#xD608;&#xC555;, &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; 23%&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; URE3 &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD3EC;&#xD568; (P &lt; 0.0001). Amebae URE3-&#xD608;&#xC555;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xB3C4; &#xAE38;&#xCB49;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC; (&plusmn; 6% &plusmn; 5%; 14% &#xB300; 30%&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; P = 0.001), &#xCC3D; &#xC790; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xCE68;&#xC785;&#xC5D0; 2-fold &#xACBD;&#xC7C1; &#xC6B0;&#xC704; (P = 0.017), &#xAC04; &#xB18D; &#xC591; &#xD06C;&#xAE30; (0.1 &plusmn; 0.1 g; 0.036 &#xB300; 0.1 g + 3 &#xC99D;&#xAC00; P = 0.03). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3C5;&#xC131; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; URE3 &#xD608;&#xC555;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3C5;&#xC131;&#xC758; Entamoeba histolytica BP URE3 &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;.

No se entiende por qu&eacute; s&oacute;lo algunas infecciones con Entamoeba histolytica provocar enfermedad. La prote&iacute;na de uni&oacute;n a 3 del elemento regulador upstream transcripci&oacute;n regulada por calcio factor (URE3-BP) fue identificada inicialmente en virtud de su papel en la regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n de dos genes de virulencia amebiano, Gal/GalNac lectinas y ferredoxina. Aqu&iacute; probamos si este factor de transcripci&oacute;n tiene un papel m&aacute;s amplio en la regulaci&oacute;n de la virulencia. Una comparaci&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de par&aacute;sito in vivo que in vitro demostr&oacute; que 39% de las transcripciones regulados in vivo conten&iacute;a el motivo URE3 reconocido por URE3-BP, frente al 23% de los promotores (P &lt; 0.0001). Amebas inducidos a expresar una forma mutante positiva dominante de URE3-BP tuvieron un aumento en una morfolog&iacute;a alargada (30% +/-6% frente al 14% +/-5%; P = 0,001), una doble ventaja competitiva en invadir el epitelio intestinal (P = 0,017) y un aumento de tres veces en tama&ntilde;o de absceso hep&aacute;tico (0.1 +/-0.1 g versus 0.036 +/-0.1 g; P = 0,03). Estos resultados apoyan un papel para URE3-BP en la regulaci&oacute;n de la virulencia.

Regulaci&oacute;n de la virulencia de Entamoeba histolytica por el Factor de transcripci&oacute;n URE3-BP.

&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x513F;&#x7AE5;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x7626;&#x7D20;&#x662F;&#x7531;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x6FC0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x98DF;&#x7269;&#x6444;&#x53D6;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x88AB;&#x9690;&#x542B;&#x5728;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x7684;&#x513F;&#x7AE5;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x7626;&#x51FD;&#x6570;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x611F;&#x67D3;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x524D;&#x77BB;&#x6027;&#x89C2;&#x5BDF;&#x513F;&#x7AE5;&#xFF0C;&#x5B66;&#x9F84;&#x524D;&#x7684;&#x5E74;&#x9F84;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x9694;&#x4E00;&#x5929;&#x8D85;&#x8FC7; 9 &#x5E74;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x611F;&#x67D3;&#x5F00;&#x59CB;&#x7684;&#x961F;&#x5217;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5F02;&#x4F53;&#x7626;&#x7D20; (lep &#x79BB;&#x5B50;) &#x548C;&#x7626;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (LEPR)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5173;&#x8054;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x540C;&#x6E90;&#x57DF; 1 LEPR &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6B64;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x80A0;&#x9053;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x513F;&#x7AE5;&#x643A;&#x5E26;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; (223R) &#x7684;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8FD1; 4 &#x500D;&#x66F4;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x611F;&#x67D3;&#x76F8;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E3A; (223Q) &#x7956;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7EAF;&#x5408;&#x3002;&#x6B64;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x809D;&#x8113;&#x80BF;&#x4E5F;&#x51B3;&#x5FC3;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x60A3;&#x8005;&#x72EC;&#x7ACB;&#x961F;&#x5217;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x643A;&#x5E26;&#x81F3;&#x5C11; 1 &#x4E2A;&#x62F7;&#x8D1D;&#x7684; Lepr &#x7684; R &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8005;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x88AB;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x9ECF;&#x819C;&#x7834;&#x574F;&#x548C;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7626;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7C98;&#x819C;&#x9632;&#x5FA1;&#x548C;&#x7626;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x5BF9;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x89E3;&#x91CA;&#x5B5F;&#x52A0;&#x62C9;&#x56FD;&#x961F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x513F;&#x7AE5;&#x7684;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

&#x7626;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x513F;&#x7AE5;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

Malnutrition substantially increases susceptibility to Entamoeba histolytica in children. Leptin is a hormone produced by adipocytes that inhibits food intake, influences the immune system, and is suppressed in malnourished children. Therefore we hypothesized that diminished leptin function may increase susceptibility to E. histolytica infection. We prospectively observed a cohort of children, beginning at preschool age, for infection by the parasite E. histolytica every other day over 9 years and evaluated them for genetic variants in leptin (LEP) and the leptin receptor (LEPR). We found increased susceptibility to intestinal infection by this parasite associated with an amino acid substitution in the cytokine receptor homology domain 1 of LEPR. Children carrying the allele for arginine (223R) were nearly 4 times more likely to have an infection compared with those homozygous for the ancestral glutamine allele (223Q). An association of this allele with amebic liver abscess was also determined in an independent cohort of adult patients. In addition, mice carrying at least 1 copy of the R allele of Lepr were more susceptible to infection and exhibited greater levels of mucosal destruction and intestinal epithelial apoptosis after amebic infection. These findings suggest that leptin signaling is important in mucosal defense against amebiasis and that polymorphisms in the leptin receptor explain differences in susceptibility of children in the Bangladesh cohort to amebiasis.

A mutation in the leptin receptor is associated with Entamoeba histolytica infection in children.

La malnutrition augmente consid&eacute;rablement la susceptibilit&eacute; &agrave; Entamoeba histolytica chez les enfants. La leptine est une hormone produite par les adipocytes qui inhibe la prise alimentaire, influe sur le syst&egrave;me immunitaire et est supprim&eacute;e chez les enfants souffrant de malnutrition. C&#39;est pourquoi nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que diminu&eacute;e fonction leptine peut augmenter la susceptibilit&eacute; &agrave; l&#39;infection par E. histolytica. Prospectivement, nous observ&eacute; une cohorte d&#39;enfants, en commen&ccedil;ant &agrave; l&#39;&acirc;ge pr&eacute;scolaire, d&#39;infection par le parasite E. histolytica tous les deux jours pendant 9 ans et &eacute;valu&eacute; les variants g&eacute;n&eacute;tiques leptine (LEP) et le r&eacute;cepteur de la leptine (LEPR). Nous avons trouv&eacute; une susceptibilit&eacute; accrue aux infections intestinales par ce parasite associ&eacute; &agrave; une substitution d&#39;acide amin&eacute; dans le domaine de l&#39;homologie cytokine r&eacute;cepteur 1 de LEPR. Les enfants porteurs de l&#39;all&egrave;le d&#39;arginine (223R) &eacute;taient presque quatre fois plus susceptibles d&#39;avoir une infection par rapport &agrave; ces homozygotes pour l&#39;all&egrave;le de la glutamine ancestrales (223Q). Une association de cet all&egrave;le avec abc&egrave;s amibien du foie a &eacute;galement &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e dans une cohorte ind&eacute;pendante des patients adultes. En outre, les souris portant au moins 1 copie de l&#39;all&egrave;le R de Lepr &eacute;taient plus vuln&eacute;rables &agrave; l&#39;infection et pr&eacute;sentaient des niveaux plus &eacute;lev&eacute;s de destruction muqueuse et apoptose &eacute;pith&eacute;liale intestinale apr&egrave;s infection amibien. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la signalisation de la leptine est importante dans la d&eacute;fense muqueuse contre l&#39;amibiase et que les polymorphismes dans le r&eacute;cepteur de la leptine expliquent des diff&eacute;rences dans la susceptibilit&eacute; des enfants de la cohorte du Bangladesh &agrave; l&#39;amibiase.

Une mutation du r&eacute;cepteur de la leptine est associ&eacute;e &agrave; l&#39;infection Entamoeba histolytica chez les enfants.

Unterern&auml;hrung erh&ouml;ht erheblich Anf&auml;lligkeit f&uuml;r Entamoeba Histolytica bei Kindern. Leptin ist ein Hormon, das von Adipozyten produziert, die Nahrungsaufnahme hemmt, beeinflusst das Immunsystem und wird in unterern&auml;hrte Kinder unterdr&uuml;ckt. Daher wir die Hypothese, die verminderte Leptin-Funktion kann E. Histolytica Infektanf&auml;lligkeit erh&ouml;hen. Wir prospektiv beobachtet eine Kohorte von Kindern ab Vorschulalter, f&uuml;r eine Infektion durch den Parasiten E. Histolytica t&auml;glich mehr als 9 Jahre und sie f&uuml;r genetische Varianten in Leptin (LEP) und den Leptin-Rezeptor (LEPR) ausgewertet. Wir fanden erh&ouml;hten Anf&auml;lligkeit f&uuml;r Darm-Infektion durch diese Parasiten eine Aminos&auml;ure-Substitution in der Zytokin-Rezeptor-Homologiegebiet 1 von LEPR zugeordnet. Kinder, die mit dem Allel f&uuml;r Arginin (223R) waren fast 4-mal h&auml;ufiger eine Infektion, die im Vergleich zu jenen homozygot f&uuml;r die angestammten Glutamin-Allel (223Q). Eine Vereinigung von das Allel mit amebic Leber Abszess wurde auch in einem unabh&auml;ngigen Kohorte von erwachsenen Patienten ermittelt. Dar&uuml;ber hinaus tragen mindestens 1 Kopie der R-Allel des Lepr M&auml;use waren anf&auml;lliger f&uuml;r Infektionen und ausgestellt von der Schleimhaut Zerst&ouml;rung und intestinale epitheliale Apoptose Nahrungsmittelm&auml;rkte nach amebic Infektion. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass Leptin Signalisierung in Schleimhaut Verteidigung gegen Am&ouml;biasis wichtig und Polymorphismen in den Leptin-Rezeptor Am&ouml;biasis Unterschiede in der Anf&auml;lligkeit von Kindern in Bangladesch Kohorte erkl&auml;ren.

Eine Mutation in den Leptin-Rezeptor ist mit Entamoeba Histolytica Infektion in den Kindern verbunden.

Malnutrizione aumenta sostanzialmente la suscettibilit&agrave; di Entamoeba histolytica nei bambini. La leptina &egrave; un ormone prodotto da adipociti che inibisce l&#39;assunzione di cibo, influenza il sistema immunitario ed &egrave; soppressa nei bambini malnutriti. Quindi abbiamo ipotizzato che diminuita funzione leptina possa aumentare la suscettibilit&agrave; all&#39;infezione da E. histolytica. Prospetticamente abbiamo osservato una coorte di bambini in et&agrave; prescolare, per l&#39;infezione con il parassita E. histolytica ogni altro giorno oltre 9 anni a partire e valutata loro varianti genetiche di leptina (LEP) e il recettore della leptina (LEPR). Abbiamo trovato aumento della suscettibilit&agrave; alle infezioni intestinali da questo parassita associato a una sostituzione dell&#39;amminoacido nel dominio di omologia dei recettori delle citochine 1 di LEPR. Bambini che trasportano l&#39;allele arginina (223R) erano quasi 4 volte pi&ugrave; probabili di avere un&#39;infezione rispetto a quelli omozigoti per l&#39;allele ancestrale glutammina (223Q). Un&#39;associazione di questo allele con amebica fegato ascesso inoltre &egrave; stata determinata in una coorte di pazienti adulti indipendenti. Inoltre, topi portatori di almeno 1 copia dell&#39;allele R di Lepr erano pi&ugrave; suscettibili alle infezioni ed esposto a maggiori livelli di distruzione della mucosa e l&#39;apoptosi epiteliale intestinale dopo infezione amebica. Questi risultati suggeriscono che la leptina di segnalazione &egrave; importante nella difesa delle mucose contro l&#39;amebiasi e che polimorfismi nel recettore della leptina spiegano le differenze nella suscettibilit&agrave; dei bambini nella coorte Bangladesh per amebiasi.

Carol A Gilchrist

Division of Infectious Disease and International Health

University of Virginia Health System

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Carol A Gilchrist

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University of Virginia Health System

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Division of Infectious Disease and International Health