Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells <em>In Vitro</em> and <em>In Vivo</em>

Targeted antigen delivery to cross-presenting dendritic cells (DC) in vivo efficiently induces T effector cell responses and displays a valuable approach ...

Helmholtz Centre for Infection Research

&#x73AF;-diguanylate (c-di-GMP) &#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x96F6;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5982;&#x80DE;&#x5916;&#x591A;&#x7CD6;&#x548C;&#x6BDB;&#xFF0C;&#x8C03;&#x5236;&#x548C;&#x56FA;&#x7740;&#x751F;&#x6D3B;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x80DE;&#x5185; c-di-GMP &#x6C34;&#x5E73;&#x5F71;&#x54CD; cupA &#x7F16;&#x7801;&#x6BDB;&#x5728;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;P.autoaggregative &#x94DC;&#x7EFF;&#x5C0F;&#x7684;&#x8681;&#x7FA4; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x503C; &#xFF08;SCV&#xFF09; CupA &#x6BDB;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE; c-di-GMP &#x6D53;&#x5EA6;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5FC5;&#x987B;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E0E;&#x514B;&#x9686;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3002;SCV &#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; CupA &#x6BDB;&#x90FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; PA1120 &#x548C;&#x83AB;&#x62C9;&#x57FA;&#x56E0;&#x90FD;&#x7F16;&#x7801; GGDEF &#x57DF;&#x3002;PA1120 &#x548C; CupA &#x6BDB;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BF9;&#x83AB;&#x62C9;&#x7A81;&#x53D8;&#x8865;&#x5145; GGDEF &#x57DF;&#x86CB;&#x767D; PA1120 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x540C;&#x610F; EAL &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8868;&#x578B;&#x65B9;&#x5DEE;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; (PvrR) &#x5728; SCV &#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80DE;&#x5185;&#x7387;&#x4E0B;&#x964D; c-di-GMP&#x3001; &#x51CF;&#x5C11;&#x7684; cupA &#x6BDB;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;

&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC; cupA &#x7F16;&#x7801;&#x83CC;&#x6BDB;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF; diguanylate GGDEF &#x548C; EAL &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x57DF;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x3002;

Cyclic-diguanylate (c-di-GMP) is a widespread bacterial signal molecule that plays a major role in the modulation of cellular surface components, such as exopolysaccharides and fimbriae, and in the establishment of a sessile life style. Here, we report that intracellular c-di-GMP levels influence cupA-encoded fimbriae expression in Pseudomonas aeruginosa. In an autoaggregative P. aeruginosa small colony variant (SCV) CupA fimbriae and the intracellular c-di-GMP concentration were found to be enhanced as compared with the clonal wild-type. The SCV morphology and the expression of CupA fimbriae were dependent on a functional PA1120 and morA gene both encoding a GGDEF domain. Overexpression of the GGDEF domain protein PA1120 complemented the PA1120 and the morA mutant with respect to CupA fimbriae expression. In agreement with these findings, overexpression of the EAL domain containing phenotypic variance regulator (PvrR) in the SCV resulted in a decreased intracellular level of c-di-GMP, a reduced cupA fimbriae expression and a switch to wild-type colony morphology.

Pseudomonas aeruginosa cupA-encoded fimbriae expression is regulated by a GGDEF and EAL domain-dependent modulation of the intracellular level of cyclic diguanylate.

Cyclique-diguanylate (c-di-GMP) est une mol&eacute;cule signal bact&eacute;rienne g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e qui joue un r&ocirc;le important dans la modulation des composantes de la surface cellulaires, tels que des exopolysaccharides et les fimbriae et dans la cr&eacute;ation d&#39;un style de vie sessile. Nous rapportons ici que c-di-GMP intracellulaire influence l&#39;expression cod&eacute;e cupA fimbriae chez Pseudomonas aeruginosa. Dans un autoaggregative P. aeruginosa petite colonie variant (SCV) CupA fimbriae et la concentration intracellulaire de la c-di-GMP se sont av&eacute;r&eacute;s &ecirc;tre am&eacute;lior&eacute; par rapport &agrave; la souche sauvage clonale. La morphologie de la SCV et l&#39;expression des fimbriae CupA d&eacute;pendaient un g&egrave;ne fonctionnel de PA1120 et morA deux codant un domaine GGDEF. La surexpression de la prot&eacute;ine de domaine GGDEF PA1120 compl&eacute;t&eacute; le PA1120 et le mutant morA en ce qui concerne l&#39;expression de fimbriae CupA. En accord avec ces conclusions, la surexpression du domaine EAL contenant le r&eacute;gulateur de la variance ph&eacute;notypique (PvrR) dans la SCV a entra&icirc;n&eacute; un baisse du niveau intracellulaire de c-di-GMP, une expression de fimbriae cupA r&eacute;duite et un commutateur &agrave; la morphologie de la colonie sauvage.

Expression de Pseudomonas aeruginosa fimbriae cupA cod&eacute; est r&eacute;glement&eacute;e par une modulation de GGDEF et EAL domaine d&eacute;pendant du niveau intracellulaire de diguanylate cyclique.

Cyclic-Diguanylate (c-di-GMP) ist eine weit verbreitete bakterielle Signalmolek&uuml;l, das in der Modulation von Zellbestandteilen Oberfl&auml;che wie Exopolysaccharides und Fimbriae, und in der Einrichtung eine sessile Lebensweise eine wichtige Rolle spielt. Hier berichten wir, dass intrazellul&auml;re c-di-GMP-Ebenen CupA-codierte Fimbriae Ausdruck in Pseudomonas Aeruginosa beeinflussen. In ein Autoaggregative P. Aeruginosa kleine Kolonie variant (SCV) CupA Fimbriae und die intrazellul&auml;re Konzentration von c-di-GMP befand, dass gegen&uuml;ber der klonalen Wildtyp verbessert werden. Die SCV-Morphologie und der Ausdruck der CupA Fimbriae waren abh&auml;ngig von einem funktionellen PA1120 und MorA-gen beide Codierung einer GGDEF Dom&auml;ne. Eine &Uuml;berexpression des GGDEF Dom&auml;ne Proteins PA1120 erg&auml;nzt die PA1120 und die MorA-Mutant in Bezug auf CupA Fimbriae Ausdruck. Im Einvernehmen mit diesen Ergebnissen f&uuml;hrte eine &Uuml;berexpression der EAL Dom&auml;ne mit ph&auml;notypische Varianz Regler (PvrR) in der SCV eine verminderte intrazellul&auml;re Niveau der c-di-GMP, eine reduzierte CupA Fimbriae Ausdruck und einen Wechsel zu Wildtyp Kolonie Morphologie.

Pseudomonas Aeruginosa CupA-codierte Fimbriae Ausdruck wird durch eine GGDEF und EAL Dom&auml;ne-abh&auml;ngige Modulation der intrazellul&auml;ren Ebene der zyklischen Diguanylate geregelt.

Ciclico-diguanylate (c-di-GMP) &egrave; una molecola segnale batterica diffusa che gioca un ruolo importante nella modulazione delle componenti cellulari superficiali, quali esopolisaccaridi e fimbriae e nella creazione di uno stile di vita sessile. Qui, segnaliamo che intracellulare di c-di-GMP influenzano espressione fimbriae cupA-codificato in Pseudomonas aeruginosa. In un autoaggregative P. fimbriae di aeruginosa colonia piccola variante (SCV) CupA e la concentrazione intracellulare di c-di-GMP sono stati trovati per essere migliorata rispetto al wild-type clonale. La morfologia SCV e l&#39;espressione della CupA fimbriae dipendevano un gene funzionale di PA1120 e morA sia la codifica di un dominio GGDEF. Sovraespressione della proteina dominio GGDEF PA1120 completato il PA1120 e il mutante di morA rispetto alla CupA espressione fimbriae. D&#39;accordo con questi risultati, iperespressione del dominio EAL contenente regolatore di varianza fenotipica (PvrR) nella SCV ha provocato un diminuzione livello intracellulare di c-di-GMP, un&#39;espressione fimbriae cupA ridotta e un interruttore alla morfologia del selvaggio-tipo Colonia.

Espressione cupA-codificato fimbriae di Pseudomonas aeruginosa &egrave; regolata da una modulazione di GGDEF ed EAL dipendente dal dominio del livello intracellulare di diguanylate ciclica.

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;-diguanylate &#xFF08;c-&#x30B8;-GMP&#xFF09; &#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3068;&#x4ED8;&#x7740;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; c-&#x30B8;-GMP &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Autoaggregative &#x3067; p. &#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; &#xFF08;SCV&#xFF09; &#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2;&#x306E;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; c-&#x30B8;-GMP &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SCV &#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x5F0F;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2;&#x578B;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x306E; PA1120 &#x3068;&#x30E2;&#x30FC;&#x30E9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F; GGDEF &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GGDEF &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; PA1120 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;PA1120 &#x3068;&#x30E2;&#x30FC;&#x30E9;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x5206;&#x6563;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; &#xFF08;PvrR&#xFF09;&#x3001;SCV &#x3092;&#x542B;&#x3080; EAL &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F; c-&#x30B8;-GMP&#x3001;&#x524A;&#x6E1B;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x30BF;&#x30EB;&#x30B0;&#x30E2; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x5F0F;&#x3001;GGDEF&#x3001;EAL &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5909;&#x8ABF;&#x74B0;&#x72B6; diguanylate &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC21C;&#xD658;-diguanylate (c-&#xB514;-GMP)&#xC740; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC138;&#xADE0; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; exopolysaccharides &#xB4F1; fimbriae, &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBCC0;&#xC870; &#xBC0F; &#xACE0;&#xCC29; &#xC0DD;&#xD65C; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC77C;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; c-&#xB514;-GMP &#xC218;&#xC900; cupA &#xC778;&#xCF54;&#xB529; fimbriae &#xC2DD; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Autoaggregative &#xD53C; &#xB18D; &#xADE0; &#xC791;&#xC740; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xD615; (SCV) CupA fimbriae &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; c-&#xB514;-GMP &#xB18D;&#xB3C4; &#xD074;&#xB860; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. SCV &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; CupA fimbriae &#xD45C;&#xD604; &#xAE30;&#xB2A5; pa1120&#xC640; &#xBAA8;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB450; GGDEF &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;. GGDEF &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; pa1120&#xC758; overexpression&#xB294; pa1120&#xC640; CupA fimbriae &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xBAA8;&#xB77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCF4;&#xC644;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; SCV&#xC5D0; phenotypic &#xBD84;&#xC0B0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; (PvrR)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; EAL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; overexpression c-&#xB514;-GMP, &#xAC10;&#xC18C; cupA fimbriae &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xD615;&#xD0DC; &#xACB0;&#xACFC;.

&#xB179; &#xB18D; &#xADE0; cupA &#xC778;&#xCF54;&#xB529; fimbriae &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC21C;&#xD658; diguanylate&#xC758; GGDEF &#xBC0F; EAL &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC885;&#xC18D; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

C&iacute;clico-Diguanilato (c-di-GMP) es una mol&eacute;cula de se&ntilde;al bacteriana generalizada que desempe&ntilde;a un papel importante en la modulaci&oacute;n de componentes celulares de la superficies, como exopolisac&aacute;ridos y fimbrias y en el establecimiento de un estilo de vida s&eacute;sil. Aqu&iacute;, Divulgamos que influyen en los niveles intracelulares de c-di-GMP expresi&oacute;n codificada cupA fimbrias en Pseudomonas aeruginosa. En un autoaggregative P. aeruginosa peque&ntilde;a colonia variantes (SCV) CupA fimbrias y la concentraci&oacute;n intracelular de c-di-GMP fueron encontrados para ser mejorado en comparaci&oacute;n con el salvaje-tipo clonal. La morfolog&iacute;a SCV y la expresi&oacute;n de CupA fimbrias eran dependientes en un gene funcional de PA1120 y morA tanto la codificaci&oacute;n de un dominio GGDEF. La sobreexpresi&oacute;n de la prote&iacute;na de dominio GGDEF PA1120 complementa el PA1120 y el mutante de morA con respecto a la expresi&oacute;n de CupA fimbrias. De acuerdo con estos resultados, sobreexpresi&oacute;n del dominio EAL que contiene regulador de la varianza fenot&iacute;pica (PvrR) en el SCV result&oacute; en una disminuci&oacute;n del nivel intracelular de c-di-GMP, una expresi&oacute;n de fimbrias cupA reducida y un interruptor a la morfolog&iacute;a de las colonias de tipo salvaje.

Expresi&oacute;n de Pseudomonas aeruginosa fimbrias cupA-codificado est&aacute; regulada por una modulaci&oacute;n GGDEF y EAL de dominio dependientes del nivel intracelular de Diguanilato c&iacute;clica.

&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x5C3E;&#x90E8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;JmjC &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x57FA;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x5341;&#x6587;&#x5B57;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 6 (Jmjd6) &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Jmjd6 &#x306F;&#x6700;&#x8FD1; RNA &#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x56E0;&#x5B50; hydroxylate &#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306E;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Jmjd6 &#x306F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x4FEE;&#x98FE;&#x9175;&#x7D20;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77DB;&#x76FE;&#x3059;&#x308B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Jmjd6 &#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x662F;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;JmjC &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x50AC;&#x5316;&#x6C27;&#x5316;&#x53BB;&#x9664;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x7532;&#x57FA;&#x7EC4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5728;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x7532;&#x57FA;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x6839;&#x7CFB;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D; 6 (Jmjd6) &#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;Jmjd6 &#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E; hydroxylate RNA &#x526A;&#x63A5;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6709;&#x76F8;&#x4E92;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;Jmjd6 &#x662F;&#x5426;&#x4FEE;&#x6539;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9176;&#x3002;

Jmjd6 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Methylation of residues in histone tails is part of a network that regulates gene expression. JmjC domain containing proteins catalyze the oxidative removal of methyl groups on histone lysine residues. Here, we report studies to test the involvement of Jumonji domain-containing protein 6 (Jmjd6) in histone lysine demethylation. Jmjd6 has recently been shown to hydroxylate RNA splicing factors and is known to be essential for the differentiation of multiple tissues and cells during embryogenesis. However, there have been conflicting reports as to whether Jmjd6 is a histone-modifying enzyme.

Analysis of Jmjd6 cellular localization and testing for its involvement in histone demethylation.

La m&eacute;thylation des r&eacute;sidus dans les queues d&#39;histone fait partie d&#39;un r&eacute;seau qui r&eacute;gule l&#39;expression des g&egrave;nes. Les prot&eacute;ines contenant de domaine JmjC catalysent la suppression oxydative des groupes m&eacute;thyles sur les r&eacute;sidus de lysine histone. Nous rapportons ici les &eacute;tudes visant &agrave; v&eacute;rifier l&#39;implication de la prot&eacute;ine &agrave; domaine Jumonji 6 (Jmjd6) dans la d&eacute;m&eacute;thylation de lysine histone. Jmjd6 a r&eacute;cemment &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; hydroxyler RNA facteurs d&#39;&eacute;pissage et est consid&eacute;r&eacute;e comme essentielle pour la diff&eacute;renciation des tissus et des cellules multiples au cours de l&#39;embryogen&egrave;se. Toutefois, on a des rapports contradictoires quant &agrave; savoir si Jmjd6 est une enzyme de modification des histones.

Analyse de localisation cellulaire Jmjd6 et essais pour son implication dans la d&eacute;m&eacute;thylation histone.

Methylierung von R&uuml;ckst&auml;nden in Histon Schw&auml;nze ist Teil eines Netzwerks, das die Genexpression reguliert. JmjC Dom&auml;ne enthaltenden Proteine katalysieren die oxidative Entfernung von Methylgruppen auf Histon Lysin R&uuml;ckst&auml;nde. Hier berichten wir Studien, die Einbeziehung der Jumonji Dom&auml;ne-haltige Protein 6 (Jmjd6) in Histon-Lysin-Demethylierung zu testen. Jmjd6 hat vor kurzem gezeigt worden, um RNA-Splei&szlig;en Faktoren hydroxylate und ist wesentlich f&uuml;r die Differenzierung von mehreren Geweben und Zellen w&auml;hrend der Embryogenese bekannt. Jedoch gab es widerspr&uuml;chliche Berichte, ob Jmjd6 ein Enzym Histon-&auml;ndern.

Analyse der Jmjd6 zellul&auml;re Lokalisierung und f&uuml;r sein Engagement in Histon-Demethylierung testen.

La metilazione dei residui nella coda dell&#39;istone &egrave; parte di una rete che regola l&#39;espressione genica. Le proteine JmjC dominio catalizzano la rimozione ossidativa dei gruppi metilici su residui di lisina dell&#39;istone. Riportiamo gli studi per verificare il coinvolgimento di Jumonji dominio contenenti proteine 6 (Jmjd6) nella demetilazione lisina dell&#39;istone. Jmjd6 ha recentemente dimostrato di hydroxylate RNA splicing fattori ed &egrave; conosciuta per essere essenziale per la differenziazione dei tessuti e cellule di pi&ugrave; durante l&#39;embriogenesi. Tuttavia, ci sono stati rapporti conflittuali come se Jmjd6 &egrave; un enzima istone-modifica.

Analisi della localizzazione cellulare Jmjd6 e test per il suo coinvolgimento nella demetilazione dell&#39;istone.

&#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. JmjC &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; lysine &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC0B0;&#xD654; &#xC81C;&#xAC70; &#xCD09;&#xB9E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; lysine demethylation&#xC5D0; Jumonji &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 6 (Jmjd6)&#xC758; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. Jmjd6 hydroxylate &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC811;&#xD569; &#xD558;&#xB294; RNA&#xB97C; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5EC;&#xBD80; jmjd6&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC218;&#xC815; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xB3CC; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Jmjd6 &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; demethylation&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC785;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

La metilaci&oacute;n de residuos en las colas de las histonas es parte de una red que regula la expresi&oacute;n g&eacute;nica. Contiene prote&iacute;nas de JmjC dominio catalizan la eliminaci&oacute;n oxidativa de grupos metilo en residuos de lisina de las histonas. Aqu&iacute;, divulgamos estudios para probar la participaci&oacute;n de la prote&iacute;na que contiene dominio de Jumonji 6 (Jmjd6) en la desmetilaci&oacute;n de lisina de las histonas. Jmjd6 se ha demostrado recientemente para hydroxylate RNA empalme factores y se sabe que es esencial para la diferenciaci&oacute;n de m&uacute;ltiples c&eacute;lulas y tejidos durante la embriog&eacute;nesis. Sin embargo, ha habido informes contradictorios sobre si Jmjd6 es una enzima histona-modificaci&oacute;n.

An&aacute;lisis de localizaci&oacute;n celular Jmjd6 y pruebas de su implicaci&oacute;n en la desmetilaci&oacute;n de histonas.

Sidechain Oligo- und Polyglutamylation stellt eine wichtige posttranslationale Modifikation Tubulin Physiologie. Die bestimmte Anzahl der Glutamat-Einheiten bezieht sich auf bestimmte regulatorische Funktionen. In dieser Arbeit pr&auml;sentieren wir einer Methode zur Synthese von Bausteinen f&uuml;r die Fmoc-Synthese von Peptiden, die Hauptkette Glutamins&auml;ure R&uuml;ckst&auml;nde dieser tragen-Seitenkette mit Oligo-Glutamins&auml;ure verzweigen. Die beiden Modell Peptidsequenzen CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x))-EEGEEY und CQDATADEQG-E(E(x))-FEEEEGEDEA von der C-Termini der S&auml;uger &alpha;1 - und &beta;1-Tubulin, bzw. mit Oligo-Glutamins&auml;ure saure Sidechain-Verzweigung mit L&auml;ngen von 1 bis 5 Aminos&auml;uren in guter Ausbeute und Reinheit zusammengebaut wurden. Die Produkte f&uuml;hren zu der Generation von spezifischen Antik&ouml;rpern die wichtige Werkzeuge f&uuml;r die genauere Untersuchung der Polyglutamylation Prozesse sein sollte.

Synthese von Peptiden von &alpha; und &beta;-Tubulin-, Glutamins&auml;ure-Seitenkette enth&auml;lt verkn&uuml;pft Oligo-Glu mit definierter L&auml;nge.

&#x4FA7;&#x94FE;&#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x548C; polyglutamylation &#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#xFF0C;&#x5728;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x7406;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5355;&#x4F4D;&#x6570;&#x662F;&#x5177;&#x4F53;&#x76D1;&#x7BA1;&#x804C;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x57FA;&#x5757;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x5305;&#x542B;&#x4E3B;&#x94FE;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5408;&#x6210;&#x5408;&#x6210;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x4F4E;&#x805A;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5206;&#x652F;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4FA7;&#x94FE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x578B;&#x53F7;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217; CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x)&#xFF09;-EEGEEY &#x548C; CQDATADEQG-E(E(x)&#xFF09;-FEEEEGEDEA &#x4ECE; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7BA1; &alpha;1-&#x548C; &beta;1-&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x542B;&#x6709;&#x4F4E;&#x805A;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x9178;&#x4FA7;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684; 1 &#x5230; 5 &#x4E0E;&#x5206;&#x652F;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x90FD;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x4EA7;&#x91CF;&#x548C;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x3002;&#x4EA7;&#x54C1;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4EA7;&#x751F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5E94;&#x8BE5;&#x662F; polyglutamylation &#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x5FAE;&#x7BA1;&#x4ECE; &alpha;-&#x548C; &beta;-&#x86CB;&#x767D;&#x542B;&#x6709;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x4FA7;&#x94FE;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x4F4E;&#x805A;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x4E0E;&#x5B9A;&#x4E49;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;

Side-chain oligo- and polyglutamylation represents an important posttranslational modification in tubulin physiology. The particular number of glutamate units is related to specific regulatory functions. In this work, we present a method for the synthesis of building blocks for the Fmoc synthesis of peptides containing main chain glutamic acid residues that carry side-chain branching with oligo-glutamic acid. The two model peptide sequences CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x))-EEGEEY and CQDATADEQG-E(E(x))-FEEEEGEDEA from the C-termini of mammalian Î±1- and Î²1-tubulin, respectively, containing oligo-glutamic acid side-chain branching with lengths of 1 to 5 amino acids were assembled in good yield and purity. The products may lead to the generation of specific antibodies which should be important tools for a more detailed investigation of polyglutamylation processes.

Synthesis of Peptides from Î±- and Î²-Tubulin Containing Glutamic Acid Side-Chain Linked Oligo-Glu with Defined Length.

Cha&icirc;ne lat&eacute;rale oligo - et polyglutamylation repr&eacute;sente une modification post-traductionnelle importante dans la physiologie de la tubuline. Le nombre particulier d&#39;unit&eacute;s de glutamate est li&eacute; &agrave; des fonctions r&eacute;glementaires sp&eacute;cifiques. Dans ce travail, nous pr&eacute;sentons une m&eacute;thode pour la synth&egrave;se de blocs de construction pour la synth&egrave;se de Fmoc des peptides contenant des r&eacute;sidus d&#39;acide glutamique cha&icirc;ne principale de cette cha&icirc;ne lat&eacute;rale carry ramification avec oligo-glutamique. Les deux mod&egrave;les de s&eacute;quences peptidiques CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x))-EEGEEY et CQDATADEQG-E(E(x))-FEEEEGEDEA des extr&eacute;mit&eacute;s C-terminales de mammif&egrave;res &alpha;1-&beta;1-tubuline et, respectivement, des acides amin&eacute;s contenant des oligo-glutamique acide cha&icirc;ne lat&eacute;rale ramification avec des longueurs de 1 &agrave; 5 ont &eacute;t&eacute; assembl&eacute;s en bons rendements et la puret&eacute;. Les produits peuvent mener &agrave; la production d&#39;anticorps sp&eacute;cifiques qui devraient &ecirc;tre des outils importants pour une &eacute;tude plus d&eacute;taill&eacute;e des processus polyglutamylation.

Synth&egrave;se des Peptides de &alpha;-&beta;-tubuline et contenant de l&#39;acide glutamique cha&icirc;ne lat&eacute;rale li&eacute;e Oligo-Glu avec longueur d&eacute;finie.

Side-chain oligo - e polyglutamylation rappresenta un&#39;importante modificazione post traduzionale in fisiologia di tubulina. Il particolare numero di unit&agrave; di glutammato &egrave; legato a specifiche funzioni di regolamentazione. In questo lavoro, vi presentiamo un metodo per la sintesi dei blocchetti di costruzione per il Fmoc sintesi di peptidi contenenti residui di acido glutammico catena principale che trasportano side-chain branching con oligo-glutammico acido. I due modello sequenze peptidiche CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x))-EEGEEY e CQDATADEQG-E(E(x))-FEEEEGEDEA dalla C-termini di mammiferi &alpha;1 - e &beta;1-tubulina, rispettivamente, contenente oligo-glutammico acido-catena laterale ramificata con lunghezze da 1 a 5 aminoacidi sono stati assemblati in buona resa e purezza. I prodotti possono portare alla generazione di anticorpi specifici che dovrebbero essere importanti strumenti per un&#39;indagine pi&ugrave; dettagliata dei processi polyglutamylation.

Sintesi di peptidi da &alpha; - e &beta;-tubulina contenenti acido glutammico-catena laterale legata Oligo-Glu con lunghezza definita.

&#x5074;&#x9396;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4; - &#x3068;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5358;&#x4F4D;&#x7279;&#x5B9A;&#x6570;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x898F;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5C90;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x5074;&#x9396; fmoc &#x4FDD;&#x8B77;&#x5408;&#x6210;&#x4E3B;&#x9396;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217; CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x) &#x6A21;&#x578B;)-EEGEEY &#x3068; CQDATADEQG-E(E(x))-&alpha; 1- &#x304A;&#x3088;&#x3073; &beta; 1 - &#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 1 &#xFF5E; 5 &#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3068;&#x5206;&#x5C90;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5074;&#x9396;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x826F;&#x597D;&#x306A;&#x53CE;&#x7387;&#x3068;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x99C5;&#x304B;&#x3089; FEEEEGEDEA&#x3002;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x304B;&#x3089; &alpha;- &#x304A;&#x3088;&#x3073; &beta;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3002;

&#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;-&#xBC0F; polyglutamylation tubulin &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; posttranslational &#xC218;&#xC815;&#xC774; &#xB41C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xC704; &#xD2B9;&#xC815; &#xC218; &#xADDC;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0D0;&#xC0B0;&#xACFC; &#xBD84;&#xAE30; &#xCE74; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xADF8; &#xC8FC;&#xC694; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0D0;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; Fmoc &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBE4C;&#xB529; &#xBE14;&#xB85D;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x) &#xBAA8;&#xB378;)-EEGEEY &#xBC0F; CQDATADEQG-E(E(x))-&alpha;1-&#xBC0F; &beta;1-tubulin, &#xAC01;&#xAC01; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; oligo glutamic acid &#xCE21;&#xBA74;-&#xCCB4;&#xC778; 1 ~ 5&#xC758; &#xAE38;&#xC774;&#xC640; &#xBD84;&#xAE30; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC870;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4; &#xC88B;&#xC740; &#xC218;&#xC728; &#xBC0F; &#xC21C;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; C-&#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; FEEEEGEDEA. &#xC81C;&#xD488; polyglutamylation &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD569;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &alpha;-&#xBC0F; &beta;-Tubulin &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0D0;&#xC0B0; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAE38;&#xC774;&#xAC00; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; Oligo-Glu &#xC5F0;&#xACB0;.

Cadena lateral oligo - y polyglutamylation representa una importante modificaci&oacute;n postraduccional en fisiolog&iacute;a de la tubulina. El n&uacute;mero de unidades de glutamato se relaciona con funciones de regulaci&oacute;n espec&iacute;ficas. En este trabajo se presenta un m&eacute;todo para la s&iacute;ntesis de bloques de construcci&oacute;n para la s&iacute;ntesis de Fmoc de p&eacute;ptidos que contienen residuos de &aacute;cido glut&aacute;mico de cadena principal llevan cadena lateral ramificaci&oacute;n con oligo-glut&aacute;mico &Aacute;cido. Los dos modelo p&eacute;ptido secuencias CYEEVGVDSVEGEG-E(E(x))-EEGEEY y CQDATADEQG-E(E(x))-FEEEEGEDEA de la C-termini de mam&iacute;feros &alpha;1 - y &beta;1-tubulina, respectivamente, con oligo-glut&aacute;mico &Aacute;cido side-chain ramificaci&oacute;n con longitudes de 1 a 5 amino&aacute;cidos se ensamblaron en el buen rendimiento y pureza. Los productos pueden llevar a la generaci&oacute;n de anticuerpos espec&iacute;ficos que deben ser herramientas importantes para una investigaci&oacute;n m&aacute;s detallada de los procesos de polyglutamylation.

S&iacute;ntesis de p&eacute;ptidos de &alpha; - y &beta;-los tubulina que contiene la cadena lateral de &aacute;cido glut&aacute;mico ligado Oligo-Glu con longitud definida.

Christian Erck

Cellular Proteome Research

Helmholtz Centre for Infection Research

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Christian Erck

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Helmholtz Centre for Infection Research

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

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