Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

University of Minnesota Medical School

L-glutamate overproduction in Corynebacterium glutamicum, a biotin auxotroph, is induced by biotin limitation or by treatment with certain fatty acid ester surfactants or with penicillin. We have analyzed the relationship between the inductions, 2-oxoglutarate dehydrogenase complex (ODHC) activity, and L-glutamate production. Here we show that a strain deleted for odhA and completely lacking ODHC activity produces L-glutamate as efficiently as the induced wild type (27.8 mmol/g [dry weight] of cells for the ohdA deletion strain compared with only 1.0 mmol/g [dry weight] of cells for the uninduced wild type). This level of production is achieved without any induction or alteration in the fatty acid composition of the cells, showing that L-glutamate overproduction can be caused by the change in metabolic flux alone. Interestingly, the L-glutamate productivity of the odhA-deleted strain is increased about 10% by each of the L-glutamate-producing inductions, showing that the change in metabolic flux resulting from the odhA deletion and the inductions have additive effects on L-glutamate overproduction. Tween 40 was indicated to induce drastic metabolic change leading to L-glutamate overproduction in the odhA-deleted strain. Furthermore, optimizing the metabolic flux from 2-oxoglutarate to L-glutamate by tuning glutamate dehydrogenase activity increased the l-glutamate production of the odhA-deleted strain.

Altered metabolic flux due to deletion of odhA causes L-glutamate overproduction in Corynebacterium glutamicum.

Genetically programmed cell deaths play important roles in unicellular prokaryotes. In postsegregational killing, loss of a gene complex from a cell leads to its descendants' deaths. With type II restriction-modification gene complexes, such death is triggered by restriction endonuclease's attacks on under-methylated chromosomes. Here, we examined how the Escherichia coli transcriptome changes after loss of PaeR7I gene complex. At earlier time points, activation of SOS genes and sigma(E)-regulon was noticeable. With time, more SOS genes, stress-response genes (including sigma(S)-regulon, osmotic-, oxidative- and periplasmic-stress genes), biofilm-related genes, and many hitherto uncharacterized genes were induced, and genes for energy metabolism, motility and outer membrane biogenesis were repressed. As expected from the activation of sigma(E)-regulon, the death was accompanied by cell lysis and release of cellular proteins. Expression of several sigma(E)-regulon genes indeed led to cell lysis. We hypothesize that some signal was transduced, among multiple genes involved, from the damaged genome to the cell surface and led to its disintegration. These results are discussed in comparison with other forms of programmed deaths in bacteria and eukaryotes.

From damaged genome to cell surface: transcriptome changes during bacterial cell death triggered by loss of a restriction-modification gene complex.

&#x5047;&#x80A5;&#x5927;&#x578B;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7; (DMD) &#x662F; X &#x8FDE;&#x9501;&#x9690;&#x6027;&#x9057;&#x4F20;&#x75BE;&#x75C5;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x4E5F;&#x89C1;&#x4E8E;&#x8109;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5176;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED3;&#x679C;&#x8840;&#x7BA1;&#x7F3A;&#x9677;&#x548C;&#x5F02;&#x5E38;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x7F3A;&#x8840;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x52A0;&#x91CD;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x7406;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597; DMD &#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x6548;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x808C;&#x8089;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9700;&#x8981;&#x52A0;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x3002;&#x8981;&#x663E;&#x793A;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x3001; mdx &#x9F20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5916;&#x8BED;&#x6559;&#x5B66;-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x521B;&#x5EFA;&#x5177;&#x6709;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x8D8A;&#x8FC7;&#x4E86; DMD&#xFF0C;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x5916;&#x8BED;&#x6559;&#x5B66;-1 &#x662F;&#x8BF1;&#x9975;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E24;&#x7EAF;&#x5408; &#xFF08;Flt-1(-/-)) &#x548C;&#x6742;&#x5408;&#x6027; (&#x5916;&#x8BED;&#x6559;&#x5B66;-1 (+ /-)) &#x5916;&#x8BED;&#x6559;&#x5B66;-1 &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Flt-1(+/-) &#x548C; mdx:Flt-1(+/-) &#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x53D1;&#x80B2;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x522B;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; mdx &#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;Mdx:Flt-1(+/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x6539;&#x5584;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x4E0E; mdx &#x9F20;&#x76F8;&#x6BD4;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3001; &#x9499;&#x5316;&#x3001; &#x819C;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x3002;&#x5C31;&#x529F;&#x80FD;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;mdx:Flt-1(+/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x808C;&#x8089;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x8FEB;&#x4F7F;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; mdx &#x9F20;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x6539;&#x5584;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x548C;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x76F8;&#x6BD4; mdx:utrophin(-/-) &#x8001;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x808C;&#x8089;&#x578B;&#x6BD4; mdx &#x9F20;&#x7684;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x589E;&#x52A0;&#x5728; DMD &#x8109;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6539;&#x5584;&#x4E0E;&#x6B64;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

&#x5916;&#x8BED;&#x6559;&#x5B66;-1 haploinsufficiency &#x7531; mdx &#x9F20;&#x53D1;&#x80B2;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x6539;&#x5584;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an X-linked recessive genetic disease caused by mutations in the gene coding for the protein dystrophin. Recent work demonstrates that dystrophin is also found in the vasculature and its absence results in vascular deficiency and abnormal blood flow. This induces a state of ischemia further aggravating the muscular dystrophy pathogenesis. For an effective form of therapy of DMD, both the muscle and the vasculature need to be addressed. To reveal the developmental relationship between muscular dystrophy and vasculature, mdx mice, an animal model for DMD, were crossed with Flt-1 gene knockout mice to create a model with increased vasculature. Flt-1 is a decoy receptor for vascular endothelial growth factor, and therefore both homozygous (Flt-1(-/-)) and heterozygous (Flt-1(+/-)) Flt-1 gene knockout mice display increased endothelial cell proliferation and vascular density during embryogenesis. Here, we show that Flt-1(+/-) and mdx:Flt-1(+/-) adult mice also display a developmentally increased vascular density in skeletal muscle compared with the wild-type and mdx mice, respectively. The mdx:Flt-1(+/-) mice show improved muscle histology compared with the mdx mice with decreased fibrosis, calcification and membrane permeability. Functionally, the mdx:Flt-1(+/-) mice have an increase in muscle blood flow and force production, compared with the mdx mice. Consequently, the mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) mice display improved muscle histology and significantly higher survival rates compared with the mdx:utrophin(-/-) mice, which show more severe muscle phenotypes than the mdx mice. These data suggest that increasing the vasculature in DMD may ameliorate the histological and functional phenotypes associated with this disease.

Flt-1 haploinsufficiency ameliorates muscular dystrophy phenotype by developmentally increased vasculature in mdx mice.

Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie g&eacute;n&eacute;tique r&eacute;cessive li&eacute;e &agrave; le X caus&eacute;e par des mutations dans le g&egrave;ne codant pour la prot&eacute;ine de la dystrophine. Des travaux r&eacute;cents montrent que la dystrophine se retrouve &eacute;galement dans le syst&egrave;me vasculaire et ses r&eacute;sultats d&#39;absence en d&eacute;ficience vasculaire et anormale de la circulation sanguine. Ceci induit un &eacute;tat d&#39;isch&eacute;mie, aggravant encore la pathogen&egrave;se de la dystrophie musculaire. Pour une forme efficace de th&eacute;rapie de DMD, tant le muscle et le syst&egrave;me vasculaire doivent &ecirc;tre abord&eacute;es. Pour faire appara&icirc;tre la relation du d&eacute;veloppement de la dystrophie musculaire et le syst&egrave;me vasculaire, souris mdx, un mod&egrave;le animal pour la DMD, ont &eacute;t&eacute; crois&eacute;s avec souris Flt-1 g&egrave;ne pour cr&eacute;er un mod&egrave;le avec syst&egrave;me vasculaire accrue. FLT-1 est un r&eacute;cepteur leurre pour vascular endothelial growth factor et par cons&eacute;quent les deux homozygotes (Flt-1(-/-)) et h&eacute;t&eacute;rozygote (Flt-1 (+/-)) Flt-1 du souris knock-out du g&egrave;ne afficher la prolif&eacute;ration accrue des cellules endoth&eacute;liales et la densit&eacute; vasculaire au cours de l&#39;embryogen&egrave;se. Ici, nous montrons que les souris adultes Flt-1(+/-) et mdx:Flt-1(+/-) &eacute;galement affichent une densit&eacute; vasculaire d&eacute;veloppemental accrue dans le muscle squelettique par rapport aux souris sauvage et mdx, respectivement. Les souris mdx:Flt-1(+/-) montrent histologie musculaire am&eacute;lior&eacute;e par rapport aux souris mdx avec perm&eacute;abilit&eacute; une diminution de la fibrose, de calcification et de membrane. Sur le plan fonctionnel, les souris mdx:Flt-1(+/-) ont une augmentation du d&eacute;bit sanguin musculaire et la force de production, par rapport aux souris mdx. Par cons&eacute;quent, les souris mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) affichent histologie musculaire am&eacute;lior&eacute;e et le taux de survie significativement plus &eacute;lev&eacute;s par rapport aux souris mdx:utrophin(-/-), qui montrent des ph&eacute;notypes musculaires plus s&eacute;v&egrave;res que les souris mdx. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que l&#39;augmentant la vascularisation dans DMD peut am&eacute;liorer les ph&eacute;notypes histologiques et fonctionnelles associ&eacute;es &agrave; cette maladie.

Sim1 flt-1 am&eacute;liore le ph&eacute;notype de la dystrophie musculaire de vascularisation d&eacute;veloppemental accrue chez les souris mdx.

Duchenne-Muskeldystrophie (DMD) ist eine X-chromosomal rezessive genetische Erkrankung verursacht durch Mutationen im Gen f&uuml;r das Protein Dystrophin. Die j&uuml;ngsten Arbeiten zeigt, dass Dystrophin sich auch in das Gef&auml;&szlig;system findet und seine Abwesenheit Ergebnisse in vaskul&auml;re Mangel und abnorme flie&szlig;en Blut. Dies induziert einen Zustand der Isch&auml;mie weiter versch&auml;rft die Muskeldystrophie-Pathogenese. F&uuml;r eine effektive Form der Therapie von DMD Muskel- und das Gef&auml;&szlig;system behandelt werden m&uuml;ssen. Um die Entwicklungsbiologie Beziehung zwischen Muskeldystrophie und Gef&auml;&szlig;system, Mdx-M&auml;use zu offenbaren, wurden einem Tiermodell f&uuml;r DMD, Flt-1 Gen Knockout M&auml;use, ein Modell mit erh&ouml;hter Gef&auml;&szlig;system gekreuzt. FLT-1 ist ein K&ouml;der-Rezeptor f&uuml;r den vaskul&auml;ren endothelialen Wachstumsfaktor und daher beide homozygote (Flt-1(-/-)) und Heterozygote (Flt-1 (+/-)) Flt-1 Gen Knockout M&auml;use erh&ouml;hte endotheliale Zellproliferation und vaskul&auml;re Dichte w&auml;hrend der Embryogenese anzuzeigen. Hier zeigen wir, dass Flt-1(+/-) und mdx:Flt-1(+/-) Erwachsene M&auml;usen auch eine entwicklungspolitisch erh&ouml;hte vaskul&auml;re Dichte in der Skelettmuskulatur, die gegen&uuml;ber der Wildtyp und Mdx-M&auml;use, bzw. anzeigen. Die mdx:Flt-1(+/-)-M&auml;use zeigen verbesserte Muskel Histologie gegen&uuml;ber der Mdx-M&auml;use mit verminderter Fibrose, Verkalkungen und Membran-Durchl&auml;ssigkeit. Funktional, die mdx:Flt-1(+/-) M&auml;use haben eine Steigerung Durchblutung der Muskulatur und Kraft Produktion, verglichen mit der Mdx-M&auml;use. Folglich zeigen die mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) M&auml;use verbesserte Muskel Histologie und deutlich h&ouml;heren &Uuml;berlebensraten im Vergleich mit der mdx:utrophin(-/-)-M&auml;use, die schwere Muskel Ph&auml;notypen als die Mdx-M&auml;use zeigen. Diese Daten legen nahe, dass das Gef&auml;&szlig;system in DMD erh&ouml;hen die histologischen und funktionellen Ph&auml;notypen, die diese Krankheit lindern kann.

FLT-1 Haploinsuffizienz aerztlichen Muskeldystrophie Ph&auml;notyp von entwicklungspolitisch erh&ouml;hte Gef&auml;&szlig;system in Mdx-M&auml;use.

Distrofia muscolare di Duchenne (DMD) &egrave; X-linked recessiva genetica malattia causata da mutazioni nel gene che codifica per la proteina distrofina. Lavoro recente dimostra che la distrofina &egrave; presente anche nel sistema vascolare e suoi risultati assenza in deficit vascolare e anormale il flusso di sangue. Questo induce uno stato di ischemia, aggravando ulteriormente la patogenesi della distrofia muscolare. Per una forma efficace di terapia di DMD, sia il muscolo e il sistema vascolare devono essere affrontati. Per visualizzare la relazione evolutiva tra la distrofia muscolare e vascolare, topi mdx, un modello animale per la DMD, erano incrociati con topi di Flt-1 gene knockout per creare un modello con maggiore vascolarizzazione. FLT-1 &egrave; un recettore decoy per fattore di crescita endoteliale vascolare e quindi entrambi omozigoti (Flt-1(-/-)) ed eterozigoti Flt-1 (Flt-1 (+ /-)) di topi knockout gene visualizzare la proliferazione delle cellule endoteliali maggiore e densit&agrave; vascolare durante l&#39;embriogenesi. Mostriamo qui, che Flt-1(+/-) e mdx:Flt-1(+/-) topi adulti anche visualizzare un inerente allo sviluppo maggiore densit&agrave; vascolare nel muscolo scheletrico, rispetto ai topi wild-type e mdx, rispettivamente. I topi mdx:Flt-1(+/-) Visualizza istologia muscolare migliorata rispetto a topi mdx con ridotta permeabilit&agrave; fibrosi, calcificazioni e membrana. Funzionalmente, i topi mdx:Flt-1(+/-) hanno un aumento del flusso sanguigno muscolare e forza di produzione, rispetto ai topi mdx. Di conseguenza, i topi mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) visualizzano istologia muscolare migliorata e tassi di sopravvivenza significativamente pi&ugrave; alti rispetto ai topi di mdx:utrophin(-/-), che mostrano fenotipi muscolari pi&ugrave; severi rispetto a topi mdx. Questi dati suggeriscono che aumentando la vascolarizzazione nella DMD pu&ograve; migliorare l&#39;istologici e funzionali fenotipi associati a questa malattia.

FLT-1 aploinsufficienza migliora il fenotipo di distrofia muscolare da inerente allo sviluppo maggiore vascolarizzazione nei topi mdx.

&#x30C7;&#x30E5;&#x30B7;&#x30A7;&#x30F3;&#x30CC;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; &#xFF08;DMD&#xFF09; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;X &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x52A3;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x3092;&#x8840;&#x7BA1;&#x306B;&#x3082;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3068;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8840;&#x6D41;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x60AA;&#x5316;&#x865A;&#x8840;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DMD &#x306E;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x3084;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;, mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;DMD&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x3057;&#x305F;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5B9A;&#x7406; 1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x4F5C;&#x6210;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306E;&#x5897;&#x5927;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5B9A;&#x7406; 1 (Flt-1(-/-)) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53; (&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5B9A;&#x7406; 1 (+/-)) &#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5B9A;&#x7406; 1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002; &#x304A;&#x3068;&#x308A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Flt-1(+/-) &#x3068; mdx:Flt-1(+/-) &#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068; mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Mdx:Flt-1(+/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;, &#x77F3;&#x7070;&#x5316;&#x3068;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B4B;&#x8089;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;mdx:Flt-1(+/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7B4B;&#x8840;&#x6D41;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5F37;&#x5236;&#x7684;&#x306B; mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B4B;&#x8089;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068; mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3088;&#x308A;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x7B4B;&#x8089;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x8868;&#x793A; mdx:utrophin(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;DMD &#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3053;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5B9A;&#x7406; 1 &#x30CF;&#x30D7;&#x30ED; mdx &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x5897;&#x5927;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Duchenne &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (DMD)&#xC740; X &#xC5F0;&#xACB0; &#xC5F4;&#xC131; &#xC720;&#xC804; &#xC9C8;&#xD658; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; dystrophin &#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC791;&#xD488; dystrophin&#xB294; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418; &#xACE0; &#xBD80;&#xC7AC; &#xACB0;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC0F; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD608;&#xC561; &#xD750;&#xB984;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xADFC;&#xC721; &#xC704;&#xCD95; &#xBCD1;&#xC744; &#xC545;&#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xD5C8; &#xD608; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DMD&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;, &#xADFC;&#xC721; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xACB0; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADFC;&#xC721; &#xC601;&#xC591; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00;, mdx &#xC950;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xAD00;&#xACC4; &#xACF5;&#xAC1C;, DMD&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378; Flt 1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC0DD;&#xC950; &#xC99D;&#xAC00; &#xD608;&#xAD00; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAD50;&#xCC28; &#xD588;&#xB2E4;. Flt 1&#xC740; &#xC218;&#xC6A9; &#xBBF8;&#xB07C; &#xCCB4; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450; homozygous (Flt-1(-/-)) &#xBC0F; embryogenesis &#xC911; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xBC00;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; heterozygous (Flt-1 (+)) Flt-1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Flt-1(+/-) &#xBC0F; mdx:Flt-1(+/-) &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xB3C4; &#xAC01;&#xAC01; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; mdx &#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC99D;&#xAC00; &#xD608;&#xAD00; &#xBC00;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mdx:Flt-1(+/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD45C;&#xC2DC; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xAC10;&#xC18C; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;, &#xC11D; &#xD68C;&#xD654; &#xBC0F; &#xB9C9; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xADFC;&#xC721; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559;. &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; mdx:Flt-1(+/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADFC;&#xC721; &#xD608;&#xC561; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; mdx &#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xADFC;&#xC721; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559; &#xBC0F; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC2EC;&#xD55C; &#xADFC;&#xC721; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; mdx:utrophin(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xC0DD;&#xC874; &#xC728;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; DMD&#xC5D0; &#xD608;&#xAD00; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACE0;&#xAE30;&#xAC00;&#xC774; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC1C;&#xB7C9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Flt 1 haploinsufficiency mdx &#xC950; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; &#xD615; ameliorates.

Distrofia muscular de Duchenne (DMD) es una enfermedad gen&eacute;tica recesiva x-ligada causada por mutaciones en el gen que codifica para la prote&iacute;na distrofina. Trabajo reciente demuestra que la distrofina tambi&eacute;n se encuentra en la vasculatura y flujo de la sangre de sus resultados de ausencia en deficiencia vascular y anormal. Esto induce un estado de isquemia, agravando a&uacute;n m&aacute;s la patogenesia de la distrofia muscular. Para una eficaz forma de terapia de DMD, tanto el m&uacute;sculo y la vasculatura deben abordarse. Para revelar la relaci&oacute;n del desarrollo de distrofia muscular y vasculatura, ratones mdx, un modelo animal para DMD, fueron cruzados con ratones de Flt-1 gene knockout para crear un modelo con mayor vascularizaci&oacute;n. FLT-1 es un receptor de se&ntilde;uelo para el factor de crecimiento endotelial vascular y por lo tanto ambos homocig&oacute;ticos (Flt-1(-/-)) y heterozig&oacute;ticos ratones de knockout de gene (Flt-1 (+/-)) Flt-1 Mostrar la proliferaci&oacute;n creciente de la c&eacute;lula endotelial y la densidad vascular durante la embriog&eacute;nesis. A continuaci&oacute;n, os mostramos que Flt-1(+/-) y mdx:Flt-1(+/-) de ratones adultos tambi&eacute;n presentan una desarrollo creciente densidad vascular en m&uacute;sculo esquel&eacute;tico en comparaci&oacute;n con los ratones de tipo salvaje y mdx, respectivamente. Los ratones mdx:Flt-1(+/-) Mostrar histolog&iacute;a del m&uacute;sculo mejora en comparaci&oacute;n con los ratones mdx con disminuci&oacute;n de la fibrosis, la calcificaci&oacute;n y la membrana la permeabilidad. Funcionalmente, los ratones mdx:Flt-1(+/-) tienen un aumento en el flujo sangu&iacute;neo muscular y la fuerza de producci&oacute;n, en comparaci&oacute;n con los ratones mdx. En consecuencia, los ratones mdx:utrophin(-/-):Flt-1(+/-) Mostrar la histolog&iacute;a del m&uacute;sculo mejora y las tasas de supervivencia significativamente mayores en comparaci&oacute;n con los ratones mdx:utrophin(-/-), que muestran fenotipos de m&uacute;sculo m&aacute;s severos que los ratones mdx. Estos datos sugieren que el aumento de la vasculatura en DMD puede mejorar los fenotipos histol&oacute;gicos y funcionales asociados con esta enfermedad.

FLT-1 haploinsufficiency mejora el fenotipo de la distrofia muscular por desarrollo creciente vasculatura en ratones mdx.

The molecules that regulate the apoptosis cascade are also involved in differentiation and syncytial fusion in skeletal muscle. MyoD is a myogenic transcription factor that plays essential roles in muscle differentiation. We noticed that MyoD(-/-) myoblasts display remarkable resistance to apoptosis by down-regulation of miR-1 (microRNA-1) and miR-206 and by up-regulation of Pax3. This resulted in transcriptional activation of antiapoptotic factors Bcl-2 and Bcl-xL. Forced MyoD expression induces up-regulation of miR-1 and miR-206 and down-regulation of Pax3, Bcl-2, and Bcl-xL along with increased apoptosis in MyoD(-/-) myoblasts. In contrast, MyoD gene knockdown increases cell survival of wild-type myoblasts. The 3' untranslated region of Pax3 mRNA contains two conserved miR-1/miR-206-binding sites, which are required for targeting of these microRNAs (miRNAs). Therefore, these data suggest that MyoD not only regulates terminal differentiation but also apoptosis through miRNA-mediated down-regulation of Pax3. Finally, MyoD, miR-1, and miR-206 are all down-regulated in quiescent satellite cells, which may be required for maintenance of muscle stem cells.

MyoD regulates apoptosis of myoblasts through microRNA-mediated down-regulation of Pax3.

&#x56DB;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5C31;&#x662F;&#x8BF4;&#xFF0C;Oct4&#x3001; Sox2&#x3001; cMyc&#x3001; &#x548C; Klf4 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x60C5;&#x51B5;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8BB8;&#x591A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4E13;&#x95E8;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x9B54;&#x9B3C;)&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426;&#x5B8C;&#x5168;&#x81F4;&#x529B;&#x4E8E;&#x7684;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09; &#x5DF2;&#x63A5;&#x53D7;&#x91CD;&#x65B0;&#x5236;&#x5B9A;&#x9B54;&#x9B3C;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5206;&#x79BB;&#x6240;&#x5F97;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x808C;&#x8089;&#x4F7F;&#x7528; Cre-loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x536B;&#x661F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x6807;&#x8BB0;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;Pax7-CreER:R26R &#x548C; Myf5-Cre:R26R)&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x611F;&#x67D3;&#x4E0E;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F15;&#x8D77;&#x808C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x793A;&#x8E2A;&#x5242; lacZ &#x9633;&#x6027;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (ESC)-&#x559C;&#x6B22;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE; ESC &#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x6743;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x80DA;&#x5C42;&#x548C;&#x751F;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x6210;&#x529F;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x9B54;&#x9B3C;&#x3002;MyoD &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x89C4;&#x8303;&#x4E3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8FDE;&#x7EED;&#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5206;&#x79BB;&#x7F3A;&#x4E4F; MyoD &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6548;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x4E5F;&#x8868;&#x660E; Oct4 &#x5145;&#x5F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x4E0E;&#x4E0A;&#x6E38;&#x589E;&#x5F3A;&#x533A;&#x57DF;&#x4E92;&#x52A8; MyoD &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; MyoD Oct4 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4E3A;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x521D;&#x59CB;&#x7684;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6B65;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9B54;&#x9B3C;&#x3002;&#x6B64;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x660E;&#x786E;&#x5206;&#x5316;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9610;&#x660E;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

MyoD Oct4 &#x57FA;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x6210;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x3002;

Expression of the four transcription factors, that is, Oct4, Sox2, cMyc, and Klf4 has been shown to generate induced pluripotent stem cells (iPSCs) from many types of specialized differentiated somatic cells. It remains unclear, however, whether fully committed skeletal muscle progenitor cells (myoblasts) have the potency to undergo reprogramming to develop iPSCs in line with previously reported cases. To test this, we have isolated genetically marked myoblasts derived from satellite cell of adult mouse muscles using the Cre-loxP system (Pax7-CreER:R26R and Myf5-Cre:R26R). On infection with retroviral vectors expressing the four factors, these myoblasts gave rise to myogenic lineage tracer lacZ-positive embryonic stem cell (ESC)-like colonies. These cells expressed ESC-specific genes and were competent to differentiate into all three germ layers and germ cells, indicating the successful generation of myoblast-derived iPSCs. Continuous expression of the MyoD gene, a master transcription factor for skeletal muscle specification, inhibited this reprogramming process in myoblasts. In contrast, reprogramming myoblasts isolated from mice lacking the MyoD gene led to an increase in reprogramming efficiency. Our data also indicated that Oct4 acts as a transcriptional suppressor of MyoD gene expression through its interaction with the upstream enhancer region. Taken together, these results indicate that suppression of MyoD gene expression by Oct4 is required for the initial reprogramming step in the development of iPSCs from myoblasts. This data suggests that the skeletal muscle system provides a well-defined differentiation model to further elaborate on the effects of iPSC reprogramming in somatic cells.

MyoD gene suppression by Oct4 is required for reprogramming in myoblasts to produce induced pluripotent stem cells.

Expression des quatre facteurs de transcription, c&#x26;#39;est-&#xE0;-Oct4, Sox2, cMyc, et Klf4 a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer cellules souches pluripotentes induites (CISP) de nombreux types de cellules sp&#xE9;cialis&#xE9;es somatiques diff&#xE9;renci&#xE9;es. On ne sait pas, cependant, si pleinement engag&#xE9;s squelettiques des cellules prog&#xE9;nitrices musculaires (myoblastes) ont le pouvoir de se soumettre &#xE0; une reprogrammation de d&#xE9;velopper CSPi en ligne avec des cas d&#xE9;j&#xE0; signal&#xE9;s. Pour tester cela, nous avons isol&#xE9; myoblastes g&#xE9;n&#xE9;tiquement marqu&#xE9;s d&#xE9;riv&#xE9;s de cellules satellites des muscles de souris adultes en utilisant le syst&#xE8;me Cre-loxP (Pax7-CREER: R26R et Myf5-Cre: R26R). Lors de l&#x26;#39;infection avec des vecteurs r&#xE9;troviraux exprimant les quatre facteurs, ces myoblastes ont donn&#xE9; lieu &#xE0; myog&#xE9;nique lign&#xE9;e traceur lacZ positif sur les cellules souches embryonnaires (ESC)-comme des colonies. Ces cellules expriment des g&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques ESC et sont comp&#xE9;tents pour se diff&#xE9;rencier en tous les trois feuillets embryonnaires et les cellules germinales, ce qui indique la g&#xE9;n&#xE9;ration r&#xE9;ussie de myoblastes d&#xE9;riv&#xE9;s CSPi. L&#x26;#39;expression continue du g&#xE8;ne MyoD, un facteur de transcription ma&#xEE;tre pour la sp&#xE9;cification du muscle squelettique, inhib&#xE9;e ce processus de reprogrammation dans les myoblastes. En revanche, les myoblastes de reprogrammation isol&#xE9;es de souris d&#xE9;pourvues du g&#xE8;ne MyoD a conduit &#xE0; une augmentation de la reprogrammation d&#x26;#39;efficacit&#xE9;. Nos donn&#xE9;es indiquent &#xE9;galement que les Oct4 agit comme un suppresseur de transcriptionnelle de l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne MyoD par son interaction avec la r&#xE9;gion en amont enhancer. Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats indiquent que la suppression de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes MyoD par Oct4 est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;&#xE9;tape initiale de reprogrammation dans le d&#xE9;veloppement de CSPi de myoblastes. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que le syst&#xE8;me muscle squelettique fournit un mod&#xE8;le de diff&#xE9;renciation bien d&#xE9;fini d&#x26;#39;&#xE9;laborer davantage sur les effets de la reprogrammation iPSC dans les cellules somatiques.

R&#xE9;pression g&#xE9;nique MyoD par Oct4 est requis pour la reprogrammation dans les myoblastes pour produire cellules souches pluripotentes induites

Ausdruck der vier Transkriptionsfaktoren, d. h. Oct4, Sox2, cMyc und Klf4 hat sich gezeigt, induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) aus vielen Arten von spezialisierten differenzierten somatischen Zellen zu generieren. Es bleibt unklar, jedoch ob uneingeschr&auml;nkt Skelettmuskulatur Vorl&auml;uferzellen (Myoblasten) die Potenz zu unterziehen, Neuprogrammierung iPSCs entsprechend zuvor gemeldeten F&auml;lle zu entwickeln haben. Um dies zu testen, haben wir genetisch markierte Myoblasts abgeleitet von Satelliten-Zelle der adulten Maus Muskeln mit das Cre-LoxP-System isoliert (Pax7-CreER:R26R und Myf5-Cre:R26R). Auf Infektion mit retrovirale Vektoren, die die vier Faktoren zum Ausdruck zu bringen, diese Myoblasts f&uuml;hrte zu myogener &Uuml;bertragungslinie Tracer LacZ-positivem embryonalen Stammzellen (ESC)-wie Kolonien. Diese Zellen ausgedr&uuml;ckt ESC-spezifischen Gene und waren kompetent, in aller drei Germ Layer und Keimzellen, angibt, die erfolgreiche Generierung von Myoblast abgeleitete iPSCs zu unterscheiden. Kontinuierliche Expression des Gens MyoD, ein Meister Transkriptionsfaktor Skelettmuskel-Spezifikation gehemmt diese Umprogrammierung Prozess in Myoblasten. Dagegen f&uuml;hrte die Neuprogrammierung Myoblasts isoliert von M&auml;usen fehlt das MyoD-gen zu einem Anstieg der Neuprogrammierung Effizienz. Unsere Daten angezeigt auch Oct4 fungiert als ein transkriptionelle Entst&ouml;rer der MyoD Genexpression durch ihre Interaktion mit der upstream Enhancer-Region. Zusammengenommen deuten diese Ergebnisse, dass Unterdr&uuml;ckung der MyoD Genexpression von Oct4 erforderlich ist, f&uuml;r die anf&auml;ngliche Neuprogrammierung Schritt in der Entwicklung von iPSCs aus Myoblasten. Diese Daten legen nahe, dass das Skelettmuskulatur-System eine klar definierte Differenzierung-Modell bietet, weiter &uuml;ber die Auswirkungen der iPSC Reprogrammierung somatischer Zellen zu erarbeiten.

MyoD gen Unterdr&uuml;ckung durch Oct4 ist erforderlich f&uuml;r die Neuprogrammierung in Myoblasts induzierten pluripotenten Stammzellen zu produzieren.

Espressione i quattro fattori di trascrizione, che &egrave;, Oct4, Sox2, cMyc e Klf4 ha dimostrato di generare cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) da molti tipi di cellule somatiche differenziate specializzate. Non &egrave; chiaro, tuttavia, se le cellule progenitrici pienamente impegnata muscolo scheletrico (myoblasts) hanno la potenza di sottoporsi a riprogrammazione per sviluppare iPSCs in linea con i casi precedentemente segnalati. Per eseguire questo test, abbiamo isolato geneticamente contrassegnato myoblasts derivato da cellule delle satellite dei muscoli di topo adulto usando il sistema Cre-loxP (Pax7-CreER:R26R e Myf5-Cre:R26R). Sull&#39;infezione con vettori retrovirali esprimendo i quattro fattori, questi myoblasts ha dato origine alla stirpe miogena tracciante lacZ positivo cellule staminali embrionali (ESC)-come colonie. Queste cellule espressi geni specifici ESC ed erano competenti a differenziarsi in tutti i tre strati germinali e le cellule germinali, che indica la generazione di successo delle iPSCs derivate myoblast. Continua espressione del gene MyoD, un fattore di trascrizione master per la specifica del muscolo scheletrico, inibito questo processo in mioblasti di riprogrammazione. Al contrario, riprogrammazione myoblasts isolati da topi privi del gene MyoD port&ograve; ad un incremento nell&#39;efficienza di riprogrammazione. I nostri dati anche indicato che Oct4 agisce come un soppressore trascrizionale dell&#39;espressione genica MyoD attraverso la sua interazione con la regione enhancer a monte. Presi insieme, questi risultati indicano che la soppressione dell&#39;espressione del gene MyoD di Oct4 &egrave; necessaria per la riprogrammazione iniziale passo nello sviluppo delle iPSCs da mioblasti. Questi dati suggeriscono che il sistema muscolo scheletrico fornisce un modello ben definito differenziazione per elaborare ulteriormente sugli effetti dell&#39;iPSC riprogrammazione di cellule somatiche.

Soppressione gene MyoD di Oct4 &egrave; necessaria per la riprogrammazione in mioblasti per produrre cellule staminali pluripotenti indotte.

4&#x3064;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x3001;OCT4&#x3001;Sox2&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;cMyc&#x3068;&#x3001;KLF4&#x306F;&#x3001;&#x5C02;&#x9580;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x75C7;&#x4F8B;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x6027;IPSC&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x52B9;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x304C;&#x3001;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Cre-loxP&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xFF08;&#xFF1A;R26R&#x3068;Myf5-CRE&#xFF1A;R26R Pax7-CreER&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x885B;&#x661F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 4&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7B4B;&#x539F;&#x6027;&#x7CFB;&#x7D71;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;lacZ&#x967D;&#x6027;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;ESC&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;ESC-&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;iPSCs&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x80DA;&#x8449;&#x3068;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; MyoD&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;MyoD&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6B20;&#x640D;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;MyoD&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Oct4&#x306E;&#x884C;&#x70BA;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Oct4&#x306E;&#x3067;MyoD&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;iPSCs&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;IPSC&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7CBE;&#x5DE7;&#x306B;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5316;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Oct4&#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x308B;MyoD&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7B4B;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x200B;&#x200B;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

4 &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;, &#xC989;, Oct4, Sox2, cMyc, &#xBC0F; Klf4 &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD2B9;&#xD654; &#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544;,, &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD5C;&#xC120;&#xC744; &#xB2E4;&#xD558;&#xACE0; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (myoblasts) &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xCDB0; iPSCs &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD798;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0;. &#xC774; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xC2DC; myoblasts &#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADFC;&#xC721; Cre loxP &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC704;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xACA9;&#xB9AC; (Pax7-Creer:r26r&#xC640; Myf5-Cre:R26R). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; myoblasts retroviral &#xBCA1;&#xD130; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; 4 &#xAC00;&#xC9C0; &#xC694;&#xC18C;, &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; myogenic &#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xCD94;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; lacZ &#xC591;&#xC131; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (ESC)&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4;-&#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xCC98;&#xB7FC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; ESC &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; 3 &#xAC1C; &#xC138;&#xADE0; &#xCE35; &#xBC0F; myoblast &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; Ipscs&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. MyoD &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC0AC;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC2DD; myoblasts &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC774; &#xC800;&#xD574;. &#xBC18;&#xBA74;, myoblasts MyoD &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xC5EC; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Oct4 &#xC5ED;&#xD560; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC99D;&#xAC15; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; MyoD &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; transcriptional &#xC5B5;&#xC555;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; myoblasts&#xC5D0;&#xC11C; Ipscs&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xCD08;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; Oct4 &#xC5EC; MyoD &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; Ipsc&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB354; &#xC815;&#xAD50; &#xD558; &#xAC8C; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBAA8;&#xB378; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

Oct4 &#xC5EC; MyoD &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAC00; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; myoblasts &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Expresi&#xF3;n de los cuatro factores de transcripci&#xF3;n, es decir, Oct4, Sox2, cMYC, y Klf4 se ha demostrado para generar c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) de muchos tipos de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas diferenciadas especializados. A&#xFA;n no est&#xE1; claro, sin embargo, si las c&#xE9;lulas esquel&#xE9;ticas totalmente comprometidos progenitoras musculares (mioblastos) tienen la potencia de someterse a una reprogramaci&#xF3;n para desarrollar iPSCs en l&#xED;nea con los casos reportados previamente. Para probar esto, se han aislado gen&#xE9;ticamente marcadas mioblastos derivados de c&#xE9;lulas sat&#xE9;lite de los m&#xFA;sculos de ratones adultos que utilizan el sistema Cre-loxP (Pax7-CREER: R26R y Myf5 Cre-: R26R). En la infecci&#xF3;n con vectores retrovirales que expresan los cuatro factores, estos mioblastos dio lugar a miog&#xE9;nica linaje marcador lacZ-positivos con c&#xE9;lulas madre embrionarias (ESC)-como colonias. Estas c&#xE9;lulas expresan los genes espec&#xED;ficos de ESC y son competentes para diferenciarse en las tres capas germinales y las c&#xE9;lulas germinales, lo que indica la generaci&#xF3;n exitosa de mioblastos derivados de iPSCs. La expresi&#xF3;n continua del gen MyoD, un factor de transcripci&#xF3;n maestro para la especificaci&#xF3;n del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico, inhibe este proceso de reprogramaci&#xF3;n de mioblastos. En contraste, mioblastos reprogramaci&#xF3;n aisladas de los ratones que carecen del gen MyoD condujo a un incremento en la eficiencia de reprogramaci&#xF3;n. Nuestros datos tambi&#xE9;n indican que Oct4 act&#xFA;a como un supresor transcripcional de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica MyoD a trav&#xE9;s de su interacci&#xF3;n con la regi&#xF3;n aguas arriba potenciador. En conjunto, estos resultados indican que la supresi&#xF3;n de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica por MyoD Oct4 es necesario para el paso inicial reprogramaci&#xF3;n en el desarrollo de iPSCs de mioblastos. Estos datos sugieren que el sistema m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico proporciona un modelo de diferenciaci&#xF3;n bien definida que explique m&#xE1;s detalladamente los efectos de IPSC de reprogramaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas.

La supresi&#xF3;n del gen Oct4 MyoD por el que se requiere para la reprogramaci&#xF3;n de mioblastos para producir c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas

Modification of complex microbial cellular processes is often necessary to obtain organisms with particularly favorable characteristics, but such experiments can take many generations to achieve. In the present article, we accelerated the experimental evolution of Escherichia coli populations under selection for improved growth using one of the restriction-modification systems, which have shaped bacterial genomes. This resulted in faster evolutionary changes in both the genome and bacterial growth. Transcriptome/genome analysis at various stages enabled prompt identification of sequential genome rearrangements and dynamic gene-expression changes associated with growth improvement. The changes were related to cell-to-cell communication, the cell death program, as well as mass production and energy consumption. These observed changes imply that improvements in microorganism population growth can be achieved by inactivating the cellular mechanisms regulating fraction of active cells in a population. Some of the mutations were shown to have additive effects on growth. These results open the way for the application of evolutionary genome engineering to generate organisms with desirable properties.

Evolutionary genome engineering using a restriction-modification system.

Skeletal myoblast transplantation has therapeutic potential for repairing damaged heart. However, the optimal conditions for this transplantation are still unclear. Recently, we demonstrated that satellite cell-derived myoblasts lacking the MyoD gene (MyoD(-/-)), a master transcription factor for skeletal muscle myogenesis, display increased survival and engraftment compared to wild-type controls following transplantation into murine skeletal muscle. In this study, we compare cell survival between wild-type and MyoD(-/-) myoblasts after transplantation into infarcted heart. We demonstrate that MyoD(-/-) myoblasts display greater resistance to hypoxia, engraft with higher efficacy, and show a larger improvement in ejection fraction than wild-type controls. Following transplantation, the majority of MyoD(-/-) and wild-type myoblasts form skeletal muscle fibers while cardiomyocytes do not. Importantly, the transplantation of MyoD(-/-) myoblasts induces a high degree of angiogenesis in the area of injury. DNA microarray data demonstrate that paracrine angiogenic factors, such as stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) and placental growth factor (PlGF), are up-regulated in MyoD(-/-) myoblasts. In addition, over-expression and gene knockdown experiments demonstrate that MyoD negatively regulates gene expression of these angiogenic factors. These results indicate that MyoD(-/-) myoblasts impart beneficial effects after transplantation into an infarcted heart, potentially due to the secretion of paracrine angiogenic factors and enhanced angiogenesis in the area of injury. Therefore, our data provide evidence that a genetically engineered myoblast cell type with suppressed MyoD function is useful for therapeutic stem cell transplantation.

Yoko Asakura

Stem Cell Institute,
Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center,
Department of Neurology,
Stem Cell Institute, Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center, Department of Neurology

University of Minnesota Medical School

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Yoko Asakura

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Stem Cell Institute,Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center,Department of Neurology,Stem Cell Institute, Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center, Department of Neurology

University of Minnesota Medical School

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Stem Cell Institute,
Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center,
Department of Neurology,
Stem Cell Institute, Paul and Sheila Wellstone Muscular Dystrophy Center, Department of Neurology