Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

Antibodies provide the ability to gain novel insight into various events taking place in living systems.  The ability to produce highly specific ...

Veterans Administration Medical Center, Memphis, TN

University of Tennessee Health Science Center, Memphis, TN

Abbiamo ipotizzato che imita molecolare tra virus umano linfotropico T tipo 1 (HTLV-1) e umana autoantigens sono stati basati su modifica alberino-di traduzione di proteine bersaglio. Le proteine purificate da MT-2 (HTLV-1 infettata) e le cellule Jurkat (HTLV-1 negativo) sono state utilizzate per macchiarsi occidentale con HTLV-1 associato mielopatia/tropical paraparesi spastica (prosciutto/TSP) IgG. In contrasto con la normale IgG, immunoreacted prosciutto/TSP IgG con proteine in cellule MT-2 a 22-24 kDa, pI 8.0, che furono identificati come perossiredossina 1 e HTLV-1-p24-(gag) di spettroscopia di massa. Western blot dopo purificazione glicoproteina ha mostrato che HAM/TSP IgG ha reagito con PrX-1 e p24 in cellule MT-2, ma non in cellule Jurkat, indicando che le proteine bersaglio simulando erano glicosilata. Questi dati suggeriscono che glicosilazione alberino-di traduzione di target le proteine possono giocare un ruolo nella patogenesi di prosciutto/TSP.

Alberino-di traduzione glicosilazione delle proteine bersaglio che coinvolgono mimetismo molecolare nella patogenesi della malattia neurologica associata HTLV-1.

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; T &#xAE30;&#xAC04; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD0C0;&#xC785; 1 (HTLV-1) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC2EB;&#xC5B4; &#xD558;&#xC9C0; &#xADF8; &#xAC00;&#xC124;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; autoantigens &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC0C1; &#xC218;&#xC815;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. MT-2 (HTLV-1&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC815;&#xD654;&#xC640; Jurkat (HTLV 1 &#xBD80;&#xC815;) &#xC140; &#xC5F0;&#xACB0; HTLV 1 myelopathy/&#xC5F4; &#xB300; &#xACBD;&#xB828; paraparesis&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC11C; &#xBD80; blotting (&#xD584;/TSP) Igg&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; IgG, 22-24 Kda&#xC5D0; MT-2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; immunoreacted &#xD584;/TSP IgG&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; peroxiredoxin 1&#xC640; htlv-1-p24-(gag)&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; 8.0 &#xD30C;&#xC774;. &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xADF8; &#xD584;/TSP IgG &#xBC18;&#xC751; PrX 1 &#xBC0F; MT 2 &#xC140; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Jurkat &#xC138;&#xD3EC; p24 &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2F9;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB2E2; glycosylation &#xC81C;&#xC548; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD584;/TSP&#xC758; pathogenesis&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E2; glycosylation &#xC5F0;&#xB8E8; HTLV-1 &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; pathogenesis &#xBD84;&#xC790; &#xD749;&#xB0B4;.

&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x64EC;&#x614B;&#x30D2;&#x30C8; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x5411;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#xFF08;HTLV-1) &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;MT 2 &#xFF08;HTLV-1) &#x611F;&#x67D3;&#x304B;&#x3089;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3001;&#xFF08;HTLV 1 &#x8CA0;&#xFF09; Jurkat &#x7D30;&#x80DE; HTLV-1 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x810A;&#x9AC4;&#x75C7;&#x30FB;&#x71B1;&#x5E2F;&#x6027;&#x75D9;&#x6027;&#x5BFE;&#x9EBB;&#x75FA;&#x3092; (&#x30CF;&#x30E0;/TSP) IgG &#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x901A;&#x5E38; IgG &#x3068;&#x5BFE;&#x7167;&#x3092;&#x306A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CF;&#x30E0;/TSP IgG immunoreacted MT 2 &#x30BB;&#x30EB;&#x3067; 22 24 kDa &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068; pI &#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x3068; HTLV-1-p24-(gag) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 8.0&#x3002;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x6B21;&#x306E;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30CF;&#x30E0;/TSP IgG PrX 1 &#x3068; p24 Jurkat &#x7D30;&#x80DE;&#x3067; MT 2 &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7CD6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x306E;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x63D0;&#x6848;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30CF;&#x30E0;/TSP &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x7CD6;&#x9396; HTLV-1 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x64EC;&#x614B;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B; 1 (&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403;-1) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x62DF;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x81EA;&#x8EAB;&#x6297;&#x4F53;&#x9776;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x4F9D;&#x636E;&#x662F;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x9970;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EAF;&#x5316;&#x540E;&#x7684;&#x5C71;-2 &#xFF08;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x611F;&#x67D3;&#xFF09;&#xFF0C;&#xFF08;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x8D1F;&#xFF09; Jurkat &#x7EC6;&#x80DE;&#x5E76;&#x7528;&#x4E8E;&#x5370;&#x8FF9;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x810A;&#x9AD3;&#x75C5;/&#x70ED;&#x5E26;&#x75C9;&#x631B;&#x6027;&#x8F7B;&#x622A;&#x762B; (&#x706B;&#x817F;/TSP) IgG&#x3002;&#x4E0E;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5728; 22-24 kDa &#x5C71; 2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x706B;&#x817F;/TSP IgG immunoreacted pI 8.0&#xFF0C;&#x5C31;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x8FC7;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x548C; HTLV-1-p24-(gag) &#x7684;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x79BB;&#x7EAF;&#x5316;&#x540E;&#x7684;&#x897F;&#x65B9;&#x6C61;&#x70B9;&#x8868;&#x660E;&#x706B;&#x817F;/TSP IgG PrX 1 &#x548C;&#x53CD;&#x5E94; p24 &#x5C71; 2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; Jurkat &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x6A21;&#x62DF;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x706B;&#x817F;/TSP &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7275;&#x8FDE;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

We hypothesized that molecular mimics between human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) and human autoantigens were based upon post-translational modification of target proteins. Proteins purified from MT-2 (HTLV-1 infected) and Jurkat (HTLV-1 negative) cells were used for western blotting with HTLV-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) IgG. In contrast to normal IgG, HAM/TSP IgG immunoreacted with proteins in MT-2 cells at 22-24 kDa, pI 8.0, which were identified as peroxiredoxin 1 and HTLV-1-p24-(gag) by mass spectroscopy. Western blots following glycoprotein purification showed that HAM/TSP IgG reacted with PrX-1 and p24 in MT-2 cells but not in Jurkat cells, indicating that the mimicking target proteins were glycosylated. These data suggest that post-translational glycosylation of target proteins may play a role in the pathogenesis of HAM/TSP.

Post-translational glycosylation of target proteins implicate molecular mimicry in the pathogenesis of HTLV-1 associated neurological disease.

Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se qu&#39;imite mol&eacute;culaire entre human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) et les antig&egrave;nes humains reposaient sur les modification post-traductionnelle des prot&eacute;ines cibles. Les prot&eacute;ines purifi&eacute;es &agrave; partir 2&egrave;me (infect&eacute;s par HTLV-1) et les cellules Jurkat (HTLV-1 n&eacute;gatif) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour &eacute;ponger occidental avec parapar&eacute;sie spastique de my&eacute;lopathie tropicale (HTLV-1 associ&eacute; (HAM/TSP) IgG. Contrairement aux IgG normal, jambon/TSP IgG immunoreacted avec des prot&eacute;ines dans les cellules MT-2 &agrave; 22-24 kDa, pI 8.0, qui ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s comme peroxiredoxin 1 et HTLV-1-p24-(gag) par spectroscopie de masse. Transferts Western apr&egrave;s la purification de la glycoprot&eacute;ine a montr&eacute; que jambon/TSP IgG a r&eacute;agi avec PrX-1 et p24 dans des cellules MT-2, mais pas dans les cellules Jurkat, indiquant que les prot&eacute;ines cibles imitant &eacute;taient glycosyl&eacute;es. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que glycosylation post-traductionnelle de la cible de prot&eacute;ines peuvent jouer un r&ocirc;le dans la pathogen&egrave;se du jambon/TSP.

Glycosylation post-traductionnelle des prot&eacute;ines cibles impliquent un mim&eacute;tisme mol&eacute;culaire dans la pathog&eacute;n&egrave;se des maladies neurologiques associ&eacute;s de HTLV-1.

Wir die Hypothese, dass Molekulare imitiert zwischen menschlichen T-lymphotropes Virustyp 1 (HTLV-1) und menschliche Autoantigene beruhten auf post-translationale Modifikation von Zielproteinen. Proteine gereinigt von MT-2 (HTLV-1 infiziert) und Jurkat (HTLV-1 negativ) Zellen wurden f&uuml;r das westliche Beflecken mit HTLV-1-assoziierten Myelopathie/Tropische Spastische Paraparese (HAM/TSP) IgG verwendet. Im Gegensatz zu normalen IgG Schinken/TSP IgG Immunoreacted mit Proteinen in MT-2 Zellen mit 22-24 kDa, pI 8.0, das als Peroxiredoxin 1 und HTLV-1-p24-(gag) von Massenspektroskopie identifiziert wurden. Western Blot nach Glykoprotein Reinigung zeigte, dass Schinken/TSP IgG reagierte PrX-1 und p24 in MT-2-Zellen aber nicht in Jurkat Zellen, darauf hinweist, dass die Nachahmung Zielproteinen glykosyliert wurden. Diese Daten legen nahe, dass POSTTRANSLATIONELLE Glykosylierung des Ziels k&ouml;nnen Proteine spielen eine Rolle in der Pathogenese von HAM/TSP.

POSTTRANSLATIONELLE Glykosylierung von Zielproteinen implizieren Molekulare Mimikry in der Pathogenese von HTLV-1-assoziierten neurologischen Erkrankung.

Presumimos a m&iacute;mica molecular entre el tipo de virus Linfotr&oacute;pico T humano 1 (HTLV-1) y autoant&iacute;genos humanas fueron basadas sobre modificaci&oacute;n post-translacional de las prote&iacute;nas blanco. Prote&iacute;nas purificaron de MT-2 (infectados con HTLV-1) y c&eacute;lulas Jurkat (HTLV-1 negativo) se utilizaron para borrar occidental con HTLV-1 asociado mielopat&iacute;a/paraparesis esp&aacute;stico tropical (HAM/TSP) IgG. En contraste con IgG normal, immunoreacted HAM/TSP IgG con prote&iacute;nas en c&eacute;lulas de MT-2 de 22-24 kDa, pI 8.0, que fueron identificados como peroxirredoxina 1 y HTLV-1-p24-(gag) por espectrometr&iacute;a de masas. Manchas blancas /negras occidentales despu&eacute;s de la purificaci&oacute;n de la glicoprote&iacute;na demostraron que HAM/TSP IgG reaccion&oacute; con PrX-1 y p24 en c&eacute;lulas MT-2 pero no en c&eacute;lulas Jurkat, indicando que las prote&iacute;nas m&iacute;mico de destino eran glicosilada. Estos datos sugieren que glicosilaci&oacute;n poste-de translaci&oacute;n de destino prote&iacute;nas pueden desempe&ntilde;ar un papel en la patogenesia de HAM/TSP.

Poste-de translaci&oacute;n glicosilaci&oacute;n de prote&iacute;nas objetivo implicar m&iacute;mica molecular en la patogenesia de la enfermedad neurol&oacute;gica asociada HTLV-1.

&#x591A;&#x53D1;&#x6027;&#x786C;&#x5316; (MS) &#x60A3;&#x8005;&#x4F7F;&#x5F02;&#x6784;&#x6838; ribonuclear &#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x4F53; A1 &#xFF08;hnRNP-A1&#xFF09;&#xFF0C;&#x80DE;&#x6838;&#x80DE;&#x8D28;&#x8FDE;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x8FD9;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;&#x4ECE; MS &#x60A3;&#x8005;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E0E; hnRNP-A1-&#39;M9&#39;&#xFF0C;&#x5176;&#x6838;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x6297; M9 &#x6297;&#x4F53;&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x635F;&#x4F24;&#x548C;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x4E0E; hnRNP-A1 &#x804C;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x810A;&#x9AD3;&#x6027;&#x622A;&#x762B;&#x57FA;&#x56E0; (SPGs) &#x7684; RNA &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x5728;&#x51C0;&#x5316;&#x4ECE; MS &#x5927;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x786E;&#x8BA4;&#x4E86; SPG RNA &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; spastin &#xFF08;&#x7F16;&#x7801;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; SPG4&#xFF09; &#x548C; hnRNP-A1 &#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x3001; &#x4E34;&#x5E8A;&#x8868;&#x578B;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x6BEB;&#x79D2;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x3002;

&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;

Multiple sclerosis (MS) patients make antibodies to heterogeneous nuclear ribonuclear protein A1 (hnRNP-A1), a nucleocytoplasmic protein. We hypothesized this autoimmune reaction might contribute to neurodegeneration. Antibodies from MS patients reacted with hnRNP-A1-'M9', its nuclear translocation sequence. Transfection of anti-M9 antibodies into neurons resulted in neuronal injury and changes in transcripts related to hnRNP-A1 function. Importantly, RNA levels for the spinal paraplegia genes (SPGs) decreased. Changes in SPG RNA levels were confirmed in neurons purified from MS brains. Also, we show molecular interactions between spastin (the encoded protein of SPG4) and hnRNP-A1. These data suggest a link between autoimmunity, clinical phenotype and neurodegeneration in MS.

A potential link between autoimmunity and neurodegeneration in immune-mediated neurological disease.

Les patients de scl&eacute;rose en plaques (MS) faire des anticorps &agrave; la prot&eacute;ine ribonuclear nucl&eacute;aire h&eacute;t&eacute;rog&egrave;ne A1 (hnRNP-A1), une prot&eacute;ine nucl&eacute;ocytoplasmique. Nous avons suppos&eacute; que cette r&eacute;action auto-immune pourrait contribuer &agrave; la neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence. Anticorps de patients atteints de SEP a r&eacute;agi avec hnRNP - A1-&laquo; M9 &raquo;, sa s&eacute;quence de translocation nucl&eacute;aire. Transfection des anticorps anti-M9 en neurones a entra&icirc;n&eacute; une l&eacute;sion neuronale et changements dans les relev&eacute;s de notes li&eacute;es &agrave; la fonction hnRNP A1. Ce qui est important, les niveaux d&#39;ARN pour les g&egrave;nes de la colonne vert&eacute;brale de parapl&eacute;gie (SPGs) a diminu&eacute;. Changements dans les niveaux d&#39;ARN SPG ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s dans les neurones purifi&eacute;es &agrave; partir de cerveaux de MS. En outre, nous montrons les interactions mol&eacute;culaires entre spastin (la prot&eacute;ine cod&eacute;e de SPG4) et hnRNP-A1. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent un lien entre l&#39;auto-immunit&eacute;, ph&eacute;notype clinique et neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence dans la SP.

Un lien potentiel entre l&#39;auto-immunit&eacute; et neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence dans la maladie neurologique auto-immune.

Patienten mit multipler Sklerose (MS) stellen Antik&ouml;rper gegen heterogene nukleare Ribonuclear Protein A1 (HnRNP-A1), ein Nucleocytoplasmic-Protein. Wir vermutete, dass diese Autoimmun-Reaktion zu Neurodegeneration beitragen. Antik&ouml;rper von MS-Patienten reagierten mit HnRNP - A1 - &#39;M9&#39;, seine nuklearen Translokation-Sequenz. Transfektion von Anti-M9-Antik&ouml;rper in Neuronen ergab neuronaler Sch&auml;digung und &Auml;nderungen in &quot;Protokolle&quot;, mit Bezug zu HnRNP-A1-Funktion. Wichtig ist, RNA-Level f&uuml;r die Wirbels&auml;ule Paraplegie-Gene (SPGs) verringert. &Auml;nderungen im SPG-RNA-Level wurden gereinigt von MS Gehirn Neuronen best&auml;tigt. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir Molekulare Wechselwirkungen zwischen Spastin (kodierten Proteins des SPG4) und HnRNP-A1. Diese Daten legen nahe, eine Verbindung zwischen Autoimmunit&auml;t, klinische Ph&auml;notyp und Neurodegeneration in MS.

Eine m&ouml;gliche Verbindung zwischen Autoimmunit&auml;t und Neurodegeneration in immun-vermittelte neurologische Erkrankung.

Pazienti con sclerosi multipla (MS) fare anticorpi eterogenei ribonuclear nucleare proteina A1 (hnRNP-A1), una proteina di nucleo-citoplasmatici. Abbiamo ipotizzato che questa reazione autoimmune potrebbe contribuire alla neurodegenerazione. Gli anticorpi da pazienti affetti da MS ha reagito con hnRNP - A1 - &#39;M9&#39;, la sua sequenza di traslocazione nucleare. Transfezione di anticorpi anti-M9 in neuroni ha provocato lesioni neuronali e cambiamenti nelle trascrizioni relative alla funzione hnRNP A1. Importante, sono diminuiti i livelli di RNA per i geni di paraplegia spinale (SPGs). Cambiamenti nei livelli di SPG RNA sono stati confermati in neuroni purificati dal cervello di MS. Inoltre, vi mostriamo le interazioni molecolari tra spastin (proteina codificata di SPG4) e hnRNP A1. Questi dati suggeriscono un legame tra autoimmunit&agrave;, fenotipo clinico e neurodegenerazione nella SM.

Un potenziale legame tra autoimmunit&agrave; e neurodegenerazione nella malattia neurologica immuno-mediata.

&#x591A;&#x767A;&#x6027;&#x786C;&#x5316;&#x75C7; &#xFF08;MS&#xFF09; &#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x7570;&#x7A2E;&#x6838; ribonuclear &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; A1 &#x6297;&#x4F53; (hnRNP A1)&#x3001;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MS &#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5FDC; hnRNP A1 - &#39;M9&#39;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C1; M9 &#x6297;&#x4F53;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x3068; hnRNP A1 &#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x7E3E;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x9AC4;&#x9EBB;&#x75FA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (Spg) RNA &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MS &#x306E;&#x8133;&#x304B;&#x3089;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; SPG RNA &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;spastin &#xFF08;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; SPG4 &#x306E;&#xFF09; &#x3068; hnRNP A1 &#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x306E; MS &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4ECB;&#x5728;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3002;

&#xB2E4; &#xBC1C;&#xC131; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D; (MS) &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xD575; ribonuclear &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; A1 (hnRNP-a 1&#xC744;), nucleocytoplasmic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD655;&#xC778;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xAC83;&#xC744; &#xAC00;&#xC124; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; neurodegeneration&#xC744; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MS &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; A1-Hnrnp&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#39;M9&#39;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD575; &#xC804; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;. &#xC548;&#xD2F0;-M9 &#xD56D; &#xCCB4;&#xB85C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD80;&#xC0C1; hnRNP A1 &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD00;&#xB828; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xCC99;&#xC218; &#xD558;&#xBC18;&#xC2E0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (SPGs)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; RNA &#xC218;&#xC900;&#xC774; &#xAC10;&#xC18C;. SPG RNA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; MS &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; spastin (spg4&#xC758; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xACFC; hnRNP-a 1 &#xC0AC;&#xC774; &#xBD84;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC548; &#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED;, &#xC784;&#xC0C1; &#xD45C;&#xD604; &#xD615; &#xBC0F; MS&#xC5D0;&#xC11C; neurodegeneration &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xD06C;.

&#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; neurodegeneration &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB9C1;&#xD06C;.

Pacientes de esclerosis m&uacute;ltiple (EM) hacen anticuerpos ribonuclear nuclear heterog&eacute;neo prote&iacute;na A1 (hnRNP-A1), una prote&iacute;na NUCLEOCITOPLASM&Aacute;TICO. Presumimos que esta reacci&oacute;n autoinmune podr&iacute;a contribuir a la neurodegeneraci&oacute;n. Anticuerpos de pacientes con em reaccionaron con hnRNP - A1 - &#39;M9&#39;, su secuencia de translocaci&oacute;n nuclear. Transfecci&oacute;n de anticuerpos anti-M9 en neuronas result&oacute; en lesiones neuronales y cambios en las transcripciones relacionadas con funci&oacute;n de hnRNP-A1. Lo importante, disminuyeron los niveles de ARN de los genes de la paraplejia espinal (SPGs). Cambios en los niveles de ARN del SPG fueron confirmados en neuronas purificadas de MS cerebros. Adem&aacute;s, mostramos las interacciones moleculares entre Spastina (la prote&iacute;na codificada de SPG4) y hnRNP-A1. Estos datos sugieren un v&iacute;nculo entre la autoinmunidad, el fenotipo cl&iacute;nico y la neurodegeneraci&oacute;n en MS.

Un posible v&iacute;nculo entre la autoinmunidad y la neurodegeneraci&oacute;n en la enfermedad neurol&oacute;gica inmune-mediada.

&#x53D1;&#x82BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x9700;&#x8981;&#x534F;&#x8C03;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x7EB3;&#x5165;&#x5176;&#x4E2D;&#x6A21;&#x4EFF; 3D &#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x7D27;&#x5F20;&#x7D20;-1 &#x7684;&#x6B63;&#x662F;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7B56;&#x5212;&#x68AF;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x751F;&#x7406;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F7F;&#x671F;&#x95F4;&#x53D1;&#x82BD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x96C6;&#x4F53;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x72EC;&#x81EA; VEGF &#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5C16;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6602; 1 &#x52A0;&#x5165; VEGF &#x6E10;&#x53D8;&#x589E;&#x5F3A;&#x63D0;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x96C6;&#x4F53;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x79F8;&#x79C6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;VEGF &#x6E10;&#x53D8;&#x7684;&#x5C16;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x5438;&#x5F15;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0A;&#x8C03;&#x67E5;&#x6602; 1 &#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x9610;&#x660E; 3D &#x5408;&#x4F5C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x63D0;&#x793A;&#x548C;&#x79F8;&#x79C6;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6602; 1 &#x589E;&#x5F3A;&#x830E;&#x5C16;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8FDE;&#x63A5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;/&#x6216;&#x830E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x3002;

&#x4F53;&#x5916; 3D &#x96C6;&#x4F53;&#x53D1;&#x82BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x4E0B;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7B56;&#x5212;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x7D27;&#x5F20;&#x7D20;-1 &#x548C; VEGF &#x6E10;&#x53D8;&#x3002;

Sprouting angiogenesis requires a coordinated guidance from a variety of angiogenic factors. Here, we have developed a unique hydrogel incorporating microfluidic platform which mimics the physiological microenvironment in 3D under a precisely orchestrated gradient of soluble angiogenic factors, VEGF and ANG-1. The system enables the quantified investigation in chemotactic response of endothelial cells during the collective angiogenic sprouting process. While the presence of a VEGF gradient alone was sufficient in inducing a greater number of tip cells, addition of ANG-1 to the VEGF gradient enhanced the number of tip cells that are attached to collectively migrated stalk cells. The chemotactic response of tip cells attracted by the VEGF gradient and the stabilizing role of ANG-1 were morphologically investigated, elucidating the 3D co-operative migration of tip and stalk cells as well as their structures. We found that ANG-1 enhanced the connection of the stalk cells with the tip cells, and then the direct connection regulated the morphogenesis and/or life cycle of stalk cells.

In vitro 3D collective sprouting angiogenesis under orchestrated ANG-1 and VEGF gradients.

Germination d&#39;angiogen&egrave;se n&eacute;cessite une orientation coordonn&eacute;e d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de facteurs angiog&eacute;niques. Ici, nous avons d&eacute;velopp&eacute; un hydrogel unique int&eacute;grant la plate-forme microfluidique qui imite le microenvironnement physiologique en 3D sous un gradient pr&eacute;cis&eacute;ment orchestr&eacute; de facteurs angiog&eacute;niques soluble, VEGF et ANG-1. Le syst&egrave;me permet l&#39;enqu&ecirc;te quantifi&eacute; en r&eacute;ponse chimiotactique des cellules endoth&eacute;liales durant le collectif angiog&eacute;nique processus de germination. Alors que la pr&eacute;sence d&#39;un gradient VEGF seul &eacute;tait suffisante pour induire un plus grand nombre de cellules de l&#39;apex, addition de ANG-1 au gradient VEGF augmente le nombre de cellules de l&#39;apex qui sont attach&eacute;s aux cellules de tige collectivement migr&eacute;s. La r&eacute;ponse chimiotactique des cellules de l&#39;apex, attir&eacute;s par le gradient VEGF et le r&ocirc;le stabilisateur de l&#39;ANG-1 ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s morphologiquement, &eacute;lucider la migration coop&eacute;rative 3D de pointe et la tige de cellules ainsi que leurs structures. Nous avons trouv&eacute; que ANG-1 am&eacute;lior&eacute; la connexion des cellules de tige avec les cellules de l&#39;apex, et puis la connexion directe r&eacute;glement&eacute; la morphogen&egrave;se et/ou le cycle de vie des cellules de tige.

In vitro 3D collective sprouting angiogen&egrave;se sous des gradients ANG-1 et VEGF orchestr&eacute;es.

Sprie&szlig;ende Angiogenese erfordert eine koordinierte F&uuml;hrung aus einer Vielzahl von angiogenen Faktoren. Hier haben wir einen einzigartigen Hydrogel Einbeziehung Microfluidic-Plattform, die imitiert die physiologische Mikromilieu in 3D unter genau orchestrierte Steigung l&ouml;sliche angiogenen Faktoren VEGF und ANG-1 entwickelt. Das System erm&ouml;glicht die quantifizierte Untersuchung chemotaktische Reaktion der Endothelzellen w&auml;hrend der kollektiven angiogenen sprie&szlig;en Prozess. W&auml;hrend das Vorhandensein eines VEGF-Verlaufs allein in eine gr&ouml;&szlig;ere Anzahl von Tipp-Zellen induzieren ausreichend war, verbessert zus&auml;tzlich ANG-1 zu den VEGF-Farbverlauf die Anzahl der Tipp-Zellen, die kollektiv migrierten Stiel Zellen zugeordnet sind. Die chemotaktische Reaktion der Tipp Zellen angezogen durch die VEGF-Verlauf und die stabilisierende Rolle der ANG-1 wurden morphologisch untersucht, die die 3D kooperative Migration der Spitze und der Stiel Zellen sowie deren Strukturen. Wir fanden, dass ANG-1 die Verbindung der Zellen Stiel mit den Tipp-Zellen verbessert, und dann die direkte Verbindung, der Morphogenese und/oder Lebenszyklus Stiel Zellen geregelt.

In-vitro-3D kollektive Sprie&szlig;ende Angiogenese unter orchestrierte ANG-1 und VEGF-Farbverl&auml;ufe.

Germinazione angiogenesi richiede un orientamento coordinato da una variet&agrave; di fattori angiogenetici. Qui, abbiamo sviluppato un idrogel unica piattaforma microfluidica che imita il fisiologico microambiente in 3D sotto un gradiente precisamente orchestrato di fattori angiogenetici solubile, VEGF e ANG-1. Il sistema consente l&#39;indagine quantificato in risposta chemiotattica delle cellule endoteliali durante la collettiva angiogenic processo di germinazione. Mentre la presenza di un gradiente di VEGF da sola era sufficiente ad indurre un maggior numero di cellule di punta, aggiunta di ANG-1 per il gradiente VEGF potenziato il numero di cellule di punta che sono attaccati al gambo collettivamente migrati cellule. La risposta chemiotattica delle cellule punta attratto dal gradiente VEGF e il ruolo stabilizzante di ANG-1 sono state studiate morfologicamente, chiarimento della migrazione cooperativa 3D di punta e il gambo di cellule cos&igrave; come le loro strutture. Abbiamo trovato che ANG-1 rafforzata la connessione delle cellule del gambo con le cellule di punta, e poi la diretta connessione regolata la morfogenesi e/o il ciclo di vita delle cellule del gambo.

In vitro 3D collettivo germogliatura angiogenesi sotto orchestrate gradienti ANG-1 e VEGF.

&#x767A;&#x82BD;&#x3057;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x7684;&#x6307;&#x5C0E;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3 D &#x3067;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x7BA1;&#x5F26;&#x697D;&#x306B;&#x7DE8;&#x66F2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x52FE;&#x914D;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x56E0;&#x5B50; VEGF &#x3068; ANG-1 &#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x6A21;&#x5023;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x767A;&#x82BD;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x4E2D;&#x306E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x72EC;&#x3067; VEGF &#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306E; ANG 1 VEGF &#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3066;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x830E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x4ED8;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5148;&#x7AEF;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x5F37;&#x5316;&#x3002;VEGF &#x52FE;&#x914D;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5148;&#x7AEF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x96C6;&#x3081;&#x3066;&#x3001;ANG 1 &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3001;3 D &#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x7D44;&#x5408;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x830E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;ANG 1 &#x5F37;&#x5316;&#x306E;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x7D9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x7D9A;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

In vitro &#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x96C6;&#x56E3;&#x767A;&#x82BD;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x4ED5;&#x7D44;&#x307E;&#x308C;&#x305F; ANG 1 &#x3068; VEGF &#x52FE;&#x914D;&#x4E0B;&#x3002;

&#xC2E0;&#xC0DD; &#xB3CB; &#xC544; angiogenic &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC815; &#xB41C; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; hydrogel VEGF&#xC640; &#xC911;&#xC559; 1 &#xC131; angiogenic &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC544;&#xB798; 3d&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xB9AC; microenvironment&#xC744; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xD1B5;&#xD569; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB3CB; &#xC544; &#xC9D1;&#xB2E8; angiogenic &#xC911; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD608; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB7C9;&#xB41C; &#xC870;&#xC0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. VEGF &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xD63C;&#xC790; &#xC874;&#xC7AC; &#xD301; &#xC140; &#xB354; &#xB9CE;&#xC774; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC548;, VEGF &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC559; 1&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xCD1D;&#xCE6D; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xB41C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xD301; &#xC140; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD301; &#xC140;&#xC758; &#xD608; &#xC751;&#xB2F5; VEGF &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC559;-1&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC5ED;&#xD560; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xD301; &#xBC0F; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xACF5;&#xB3D9; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; elucidating. &#xC911;&#xC559; 1 &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD301; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xBC0F; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5F0;&#xACB0; morphogenesis &#xBC0F; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xBA85; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xC911;&#xC559; 1 &#xBC0F; VEGF &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC544;&#xB798; &#xCCB4; &#xC678; 3D &#xC9D1;&#xB2E8; &#xB3CB; &#xC544; &#xC2E0;&#xC0DD;.

Brotaci&oacute;n angiog&eacute;nesis requiere una direcci&oacute;n coordinada de una variedad de factores angiog&eacute;nicos. Aqu&iacute;, hemos desarrollado un hidrogel &uacute;nico que incorpora la plataforma de microfluidos que imita el microambiente fisiol&oacute;gico en 3D bajo un gradiente precisamente orquestado de factores angiog&eacute;nicos soluble, VEGF y ANG-1. El sistema permite la investigaci&oacute;n cuantificada en respuesta quimiot&aacute;ctica de c&eacute;lulas endoteliales durante el colectivo angiog&eacute;nicos proceso de brotaci&oacute;n. Mientras que la presencia de un gradiente VEGF solo era suficiente para inducir a un mayor n&uacute;mero de c&eacute;lulas de la punta, adem&aacute;s de ANG-1 el gradiente VEGF hab&iacute;a mejorado el n&uacute;mero de c&eacute;lulas de punta que se unen a las c&eacute;lulas tallo colectivamente migrados. La respuesta quimiot&aacute;ctica de punta c&eacute;lulas atra&iacute;dos por el gradiente VEGF y morfol&oacute;gicamente se investigaron el papel estabilizador de ANG-1, dilucidar la migraci&oacute;n cooperativa 3D de las c&eacute;lulas de la punta y tallo as&iacute; como sus estructuras. Encontramos que ANG-1 hab&iacute;a mejorado la conexi&oacute;n de las c&eacute;lulas tallo con las c&eacute;lulas de la punta, y luego la conexi&oacute;n directa hab&iacute;a regulada la morfog&eacute;nesis o ciclo de vida de las c&eacute;lulas del tallo.

Angiog&eacute;nesis despunte colectiva 3D in vitro bajo gradientes orquestadas de ANG-1 y VEGF.

&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x901A;&#x7528;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7CBE;&#x786E;&#x63A7;&#x5236;&#x7EBF;&#x6027;&#x6E10;&#x53D8;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F18;&#x5F02;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x548C;&#x539F;&#x4F4D;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x68AF;&#x5EA6;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5316;&#x5B66;&#x68AF;&#x5EA6;&#x53D7;&#x5206;&#x5B50;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E72;&#x6270;&#x5B83;&#x3002;&#x6444;&#x52A8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5B9E;&#x9645;&#x6E10;&#x53D8;&#x4E00;&#x76F4;&#x4E0D;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x53D9;&#x8FF0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7531; analyte(VEGF) &#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6A21;&#x62DF;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x68AF;&#x5EA6;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6838;&#x5B9E;&#x4E86; 1 &#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x652F;&#x67B6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x5355;&#x5C42;&#x4EBA;&#x8110;&#x9759;&#x8109;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x8110;) &#x53D1;&#x82BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6A21;&#x62DF;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x5B9E;&#x9645;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x65B0;&#x7684;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5C06;&#x80FD;&#x591F;&#x91CF;&#x5316;&#x5F62;&#x6001;&#x5EFA;&#x6210;&#x7684;&#x8110;&#x4E0B;&#x6241;&#x5E73;&#x3001; &#x8F83;&#x9661;&#xFF0C;&#x6216;&#x9661;&#x5CED;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#x3002;

&#x89C4;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5C42;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5316;&#x5B66;&#x68AF;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x53D1;&#x82BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x3002;

Microfluidic cell culture assays are versatile tools for studying cell migration, particularly angiogenesis. Such assays can deliver precisely controlled linear gradients of chemical stimuli to cultured cells in a microfluidic channel, offering excellent optical resolution and in situ monitoring of cellular morphogenesis in response to a gradient. Microfluidic cell culture assays provide a chemical gradient subject to molecular diffusion, although cellular metabolism can perturb it. The actual gradient perturbed by cells has not been precisely described in the context of regulated cellular morphogenesis. We modeled the chemical gradient in a microfluidic channel by simulating the analyte(VEGF) distribution during cellular interactions. The results were experimentally verified by monitoring sprouting angiogenic response from a monolayer of human umbilical vein endothelial cells (hUVECs) into a type 1 collagen scaffold. The simulation provided a basis for understanding a real distribution of the analyte interrupted by cells in microfluidic device. The new protocol enables one to quantify the morphogenesis of hUVECs under a flat, less-steep, or steep gradient.

Sprouting angiogenesis under a chemical gradient regulated by interactions with an endothelial monolayer in a microfluidic platform.

Essais de culture de cellules microfluidiques sont des outils polyvalents pour l&#39;&eacute;tude de la migration cellulaire, en particulier de l&#39;angiogen&egrave;se. Ces tests peuvent fournir pr&eacute;cis&eacute;ment contr&ocirc;l&eacute;s des d&eacute;grad&eacute;s lin&eacute;aires des stimuli chimiques &agrave; des cellules cultiv&eacute;es dans un canal microfluidique, offrant une r&eacute;solution optique excellente surveillance in situ de la morphog&eacute;n&egrave;se cellulaire en r&eacute;ponse &agrave; un gradient. Essais de culture de cellules microfluidique fournissent un gradient chimique soumis &agrave; la diffusion mol&eacute;culaire, bien que le m&eacute;tabolisme cellulaire il peut perturber. Le gradient r&eacute;el perturb&eacute; par des cellules n&#39;a pas &eacute;t&eacute; pr&eacute;cis&eacute;ment d&eacute;crit dans le contexte de la morphog&eacute;n&egrave;se cellulaire r&eacute;glement&eacute;. Nous avons mod&eacute;lis&eacute; le gradient chimique dans un canal microfluidique en simulant la distribution de analyte(VEGF) pendant les interactions cellulaires. Les r&eacute;sultats ont &eacute;t&eacute; v&eacute;rifi&eacute;s exp&eacute;rimentalement en surveillant la r&eacute;ponse angiog&eacute;nique repousse une monocouche de cellules endoth&eacute;liales de veine ombilicale humaine (HUVEC) sur un &eacute;chafaudage de collag&egrave;ne de type 1. La simulation constitue une base pour comprendre une distribution r&eacute;elle de l&#39;analyte, interrompu par les cellules en dispositif microfluidique. Le nouveau protocole permet de quantifier la morphog&eacute;n&egrave;se des hUVECs sous un gradient de plat, moins-raide ou raide.

Germination d&#39;angiogen&egrave;se sous un gradient chimique r&eacute;glement&eacute; par des interactions avec une monocouche endoth&eacute;liale dans une plate-forme microfluidique.

Mikrofluidische Zellkulturproben sind vielseitige Werkzeuge f&uuml;r das Studium der Zellmigration, besonders Angiogenesis. Solche Tests k&ouml;nnen genau kontrollierte lineare Farbverl&auml;ufe chemische Reize an kultivierten Zellen in einem Microfluidic-Kanal, bietet hervorragende optische Aufl&ouml;sung und in-situ-&Uuml;berwachung von zellul&auml;ren Morphogenese als Reaktion auf einen Farbverlauf liefern. Mikrofluidische Zellkulturproben bieten einem chemischen Gradienten unterliegen Molekulare Diffusion, obwohl Zellstoffwechsels es verl&auml;ngern kann. Der tats&auml;chliche Verlauf gest&ouml;rt durch Zellen wurde nicht im Zusammenhang mit der regulierten zellul&auml;ren Morphogenese genau beschrieben. Wir modelliert den chemischen Farbverlauf in einem Microfluidic-Kanal durch die Simulation der analyte(VEGF)-Verteilungs w&auml;hrend zellul&auml;re Interaktionen. Die Ergebnisse wurden experimentell verifiziert durch &Uuml;berwachung Sprie&szlig;ende angiogenen Antwort eine Monolage menschliche Nabelschnur Venen endothelial Zellen (hUVECs) in einen Typ-1-Kollagen-Ger&uuml;st. Die Simulation bot die Grundlage f&uuml;r das Verst&auml;ndnis einer tats&auml;chlichen Verteilungs des Analyten durch Zellen in mikrofluidische Ger&auml;t unterbrochen. Das neue Protokoll erm&ouml;glicht es einem, die Morphogenese von hUVECs unter einen flachen, weniger steil oder steile Verlauf zu quantifizieren.

Sprie&szlig;en Angiogenese unter einem chemischen Farbverlauf von Interaktionen mit einer endothelialen Monolage einer Plattform und mikrofluidische geregelt.

Microfluidica cella cultura analisi sono strumenti versatili per studiare la migrazione delle cellule, specialmente l&#39;angiogenesi. Tali dosaggi in grado di fornire precisamente controllate Gradienti lineari di stimoli chimici di cellule coltivate in un canale di microfluidica, che offre eccellente risoluzione ottica e monitoraggio in situ della morfogenesi cellulare in risposta ad un gradiente. Saggi di cultura cellulare microfluidica forniscono un gradiente chimico soggetto a diffusione molecolare, sebbene metabolismo cellulare pu&ograve; perturbare. La pendenza effettiva perturbata dalle cellule non &egrave; precisamente descritta nel contesto della morfogenesi cellulare regolamentato. Abbiamo modellato il gradiente chimico in un canale di microfluidica simulando la distribuzione di analyte(VEGF) durante le interazioni cellulari. I risultati sono stati verificati sperimentalmente da monitoraggio germogliatura risposta angiogenic da un monostrato di cellule endoteliali di vena ombelicale umana (hUVECs) in un&#39;impalcatura di collagene di tipo 1. La simulazione fornito una base per la comprensione di una reale distribuzione dell&#39;analita interrotto dalle cellule nel dispositivo microfluidico. Il nuovo protocollo consente di quantificare la morfogenesi del hUVECs sotto un gradiente piatto, meno ripida o ripido.

Germinazione angiogenesi sotto un gradiente chimico regolato da interazioni con un monostrato endoteliale in una piattaforma microfluidica.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;, &#x7279;&#x306B;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x52C9;&#x5F37;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x591A;&#x5F69;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8A66;&#x91D1;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DDA;&#x5F62;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5316;&#x5B66;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5149;&#x5B66;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B; in situ &#x76E3;&#x8996;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x8DEF;&#x3092;&#x914D;&#x4FE1;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x304B;&#x304D;&#x4E71;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x5316;&#x5B66;&#x52FE;&#x914D;&#x5206;&#x5B50;&#x62E1;&#x6563;&#x4E88;&#x544A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x969B;&#x306E;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x30BB;&#x30EB;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; analyte(VEGF) &#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x8DEF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5316;&#x5B66;&#x52FE;&#x914D;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13; 1 &#x578B;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x8DB3;&#x5834;&#x306B;&#x3072;&#x3068;&#x81CD;&#x5E2F;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;) &#x306E;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x82BD;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E2D;&#x65AD; analyte &#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3092;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x967A;&#x3057;&#x3044;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6025;&#x52FE;&#x914D;&#x4E0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x5316;&#x5B66;&#x52FE;&#x914D;&#x4E0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x82BD;&#x3002;

&#xBBF8;&#xC138; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB38;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xD2B9;&#xD788; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACBD;&#xC791; &#xC140; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xAD11;&#xD559; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; morphogenesis &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xD654;&#xD559; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB41C; &#xC120;&#xD615; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xC138; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB38;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xB780; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBD84;&#xC790; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD654;&#xD559; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD50;&#xB780;&#xB41C; &#xC2E4;&#xC81C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; morphogenesis&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; analyte(VEGF) &#xBC30;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD558; &#xC5EC; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD654;&#xD559; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 1 &#xD615; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0EF; &#xC904; &#xC815; &#xB9E5; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (hUVECs)&#xC758; &#xB2E8;&#xCE35;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CB; &#xC544; angiogenic &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBD84;&#xC11D; &#xC140; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xB2E8;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD558;&#xB098; &#xD50C;&#xB7AB;, &#xB35C; &#xAC00;&#xD30C;&#xB978; &#xB610;&#xB294; &#xAC00;&#xD30C;&#xB978; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC544;&#xB798; hUVECs morphogenesis &#xACC4;&#xB7C9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD654;&#xD559; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBBF8;&#xC138; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB0B4; &#xD53C; &#xB2E8;&#xCE35;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xC544;&#xB798; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xB3CB; &#xC544;.

Ensayos de cultura de c&eacute;lula microflu&iacute;dicos son herramientas vers&aacute;tiles para el estudio de la migraci&oacute;n celular, particularmente la angiog&eacute;nesis. Estos ensayos pueden entregar precisamente controlados degradados lineales de est&iacute;mulos qu&iacute;micos a c&eacute;lulas cultivadas en un canal de microfluidos, que ofrece excelente resoluci&oacute;n &oacute;ptica y seguimiento in situ de la morfog&eacute;nesis celular en respuesta a un gradiente. Ensayos de cultura de c&eacute;lula microflu&iacute;dicos proporcionan un gradiente qu&iacute;mico sujeto a difusi&oacute;n molecular, aunque metabolismo celularlo puede perturbar. El gradiente real perturbado por las c&eacute;lulas no se ha descrito precisamente en el contexto de la morfog&eacute;nesis celular regulado. Modelamos el gradiente qu&iacute;mico en un canal de microfluidos simulando la distribuci&oacute;n de analyte(VEGF) durante interacciones celulares. Los resultados fueron verificados experimentalmente mediante el control de brotes respuesta angiog&eacute;nica de una monocapa de c&eacute;lulas endoteliales de la vena umbilical humana (hUVECs) en un andamio de col&aacute;geno tipo 1. La simulaci&oacute;n proporciona una base para entender una distribuci&oacute;n real del analito interrumpido por las c&eacute;lulas en dispositivo microflu&iacute;dico. El nuevo protocolo permite cuantificar la morfog&eacute;nesis de hUVECs bajo una pendiente escarpada, plana o menos-escarpado.

Angiog&eacute;nesis despunte bajo un gradiente qu&iacute;mico regulada por interacciones con una monocapa endotelial en una plataforma de microfluidos.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x6700;&#x8FD1;&#x786E;&#x5B9A;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2; type-1-p24-(gag) &#xFF08;HTLV-1-p24-(gag)) &#x548C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x8FD8;&#x86CB;&#x767D;-1 (PrX-1&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7CD6;&#x5316;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#x7CD6;&#x4FA7;&#x94FE;&#x4E0E;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x9633;&#x6027;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E32;&#x884C;&#x9176;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53BB;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x548C;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x9633;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x5305;&#x542B;&#x5206;&#x652F; oligomannose &#x4FA7;&#x94FE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5177;&#x4F53;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; oligomannose &#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x4E3B;&#x673A;&#x6297;&#x539F;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x4EFF;&#x5E76;&#x4E14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; oligomannose &#x7CD6;&#x5316;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x5728;&#x7B2C;&#x4E09;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x7403; 1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

Our lab recently identified a cross-reactive antibody response between human T-lymphotropic virus type-1-p24-(gag) (HTLV-1-p24-(gag)) and peroxiredoxin-1 (PrX-1) as potentially contributing to the pathogenesis of HTLV-1 associated neurological disease via molecular mimicry. These targets proteins were glycosylated, yet the glycan side chains immunoreactive with the immunoglobulins were unknown. Using a combination of lectin isolation and serial enzymatic deglycosylation of glycoproteins, we determined that the immunoreactive epitopes contained branched oligomannose side chains. These data suggest that post-translational glycosylation specifically related to oligomannose immunoreactivity to both the infecting and host antigens may contribute to molecular mimicry and be important in the pathogenesis of HTLV-1 associated neurological disease.

Cross-reactive antibodies to target proteins are dependent upon oligomannose glycosylated epitopes in HTLV-1 associated neurological disease.

Notre laboratoire a r&eacute;cemment identifi&eacute; une r&eacute;ponse anticorps une r&eacute;action crois&eacute;e entre human T-lymphotropic virus type-1-p24-(gag) (HTLV-1-p24-(gag)) et peroxiredoxin-1 (PrX-1) comme des contributeurs potentiels &agrave; la pathogen&egrave;se de la maladie neurologique HTLV-1 li&eacute; par mim&eacute;tisme mol&eacute;culaire. Ces prot&eacute;ines cibles &eacute;taient glycosyl&eacute;es, mais les cha&icirc;nes lat&eacute;rales de glycane immunor&eacute;actives avec les immunoglobulines n&#39;&eacute;taient pas connus. En utilisant une combinaison de l&#39;isolement de la lectine et serial d&eacute;glycosylation enzymatique des glycoprot&eacute;ines, nous avons d&eacute;termin&eacute; que les &eacute;pitopes immunor&eacute;actives contenues ramifi&eacute; oligomannose des cha&icirc;nes lat&eacute;rales. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que glycosylation post-traductionnelle sp&eacute;cifiquement associ&eacute;e &agrave; oligomannose immunor&eacute;activit&eacute; aux antig&egrave;nes de l&#39;infecter et h&ocirc;te peut contribuer au mim&eacute;tisme mol&eacute;culaire et important dans la pathogen&egrave;se de la maladie neurologique associ&eacute;s de HTLV-1.

Anticorps crois&eacute;es aux prot&eacute;ines cibles d&eacute;pendent oligomannose glycosyl&eacute;e &eacute;pitopes dans la maladie neurologique associ&eacute;s de HTLV-1.

Unserem Labor identifiziert vor kurzem eine kreuzreagierenden Antik&ouml;rper-Reaktion zwischen menschlichen T-lymphotropes Virus type-1-p24-(gag) (HTLV-1-p24-(gag)) und Peroxiredoxin-1 (PrX-1) als potenziell Beitrag zur Pathogenese der HTLV-1-assoziierten neurologischen Erkrankung &uuml;ber molekulare Mimikry. Diese Ziele-Proteine wurden glykosyliert, doch die Glykan-Seitenketten sind mit der Immunglobuline waren unbekannt. Mit einer Kombination von Lektin-Isolierung und serielle enzymatische Deglycosylation von Glykoproteinen, haben wir festgestellt, dass die enthaltenen immunreaktivem Epitope Oligomannose Seitenketten verzweigt. Diese Daten legen nahe, dass POSTTRANSLATIONELLE Glycosylation im Zusammenhang mit Oligomannose-Immunoreactivity zu infizieren und Host-Antigene zur Molekulare Mimikry und Bedeutung in der Pathogenese von HTLV-1-assoziierten neurologischen Erkrankung sein kann.

Kreuzreagierenden Antik&ouml;rper gegen Zielproteine sind abh&auml;ngig von Oligomannose HbA1c Epitopes in HTLV-1-assoziierten neurologischen Erkrankung.

Il nostro laboratorio ha recentemente identificato una risposta anticorpale interferenti tra human type-1-p24-(gag) virus T-linfotropico (HTLV-1-p24-(gag)) e perossiredossina-1 (PrX-1) come potenzialmente contribuire alla patogenesi della malattia neurologica HTLV-1 connesso attraverso il mimetismo molecolare. Queste proteine obiettivi erano glicosilata, eppure le catene laterali glycan immunoreattive con le immunoglobuline erano sconosciute. Usando una combinazione di lectin isolamento e seriale deglycosylation enzimatica di glicoproteine, abbiamo determinato che gli epitopi immunoreattivi contenuti ramificata catene laterali oligomannose. Questi dati suggeriscono che glicosilazione alberino-di traduzione specificamente correlata alla oligomannose immunoreattivit&agrave; per infettare sia ospite degli antigeni possa contribuire al mimetismo molecolare ed essere importante nella patogenesi della malattia neurologica associata HTLV-1.

Interferenti anticorpi a proteine bersaglio dipendono oligomannose glicosilata epitopi nella malattia neurologica associata HTLV-1.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30E9;&#x30DC;&#x304C;&#x6700;&#x8FD1;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x9593;&#x30D2;&#x30C8; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x5411;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; type-1-p24-(gag) (HTLV-1-p24-(gag)) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;-1 (PrX-1&#xFF09; &#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x64EC;&#x614B;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; HTLV-1 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3002; &#x8B58;&#x5225;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x7CD6;&#x5074;&#x9396;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x967D;&#x6027;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x9175;&#x7D20; deglycosylation &#x3068;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x967D;&#x6027;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x5074;&#x9396;&#x5206;&#x5C90;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x514D;&#x75AB;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x305D;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x7CD6;&#x9396;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5206;&#x5B50;&#x64EC;&#x614B;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3001;HTLV-1 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x5341;&#x5B57;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6297;&#x4F53; HTLV-1 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x306F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B0;&#x30EA;&#x30B3; &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5F0;&#xAD6C;&#xC18C;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; (HTLV-1-p24-(gag)) &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xD749;&#xB0B4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; HTLV-1 &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; peroxiredoxin 1 (PrX-1) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; T &#xAE30;&#xAC04; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; type-1-p24-(gag) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; cross-reactive &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC18;&#xC751; &#xD655;&#xC778;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2F9;&#xD654;, &#xC544;&#xC9C1; glycan &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; immunoreactive&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB410;&#xB2E4;. Lectin &#xACA9;&#xB9AC;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xACFC; glycoproteins&#xC758; &#xC9C1;&#xB82C; &#xD6A8;&#xC18C; deglycosylation&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; immunoreactive epitopes &#xBD84;&#xAE30; oligomannose &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB2E2; glycosylation &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; oligomannose immunoreactivity &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xD749;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; HTLV-1 &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cross-reactive &#xD56D; &#xCCB4; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; HTLV-1 &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; oligomannose &#xB2F9;&#xD654; epitopes &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nuestro laboratorio identificado recientemente una respuesta de anticuerpos Cruz-reactivo entre human T-lymphotropic virus type-1-p24-(gag) (HTLV-1-p24-(gag)) y Peroxirredoxina-1 (PrX-1) potencialmente contribuyen a la patog&eacute;nesis de la enfermedad neurol&oacute;gica de HTLV-1 asociado mediante m&iacute;mica molecular. Estas prote&iacute;nas objetivos fueron glicosilada, pero desconoc&iacute;an las cadenas laterales de glicanos immunoreactive con las inmunoglobulinas. Utilizando una combinaci&oacute;n de aislamiento de lectinas y serial deglycosylation enzim&aacute;tica de glicoprote&iacute;nas, determinamos que los epitopos immunoreactive contenidos ramificaron cadenas laterales de oligomannose. Estos datos sugieren eso glicosilaci&oacute;n post-traduccionales relacionados espec&iacute;ficamente con la inmunoreactividad de oligomannose a los ant&iacute;genos que infecta tanto anfitri&oacute;n puede contribuir a la m&iacute;mica molecular y ser importante en la patogenia de la enfermedad neurol&oacute;gica asociada HTLV-1.

Cruz-reactivo anticuerpos contra las prote&iacute;nas blanco dependen oligomannose glicosilada epitopos en enfermedad neurol&oacute;gica asociada HTLV-1.

Hier berichten wir &uuml;ber eine einzigartige Methode, die Auswirkungen der in Vivo-&auml;hnlichen extrazellul&auml;ren Matrix (ECM) f&uuml;r die Leitung der Differenzierung von neuronalen Stammzellen (NSCs) in dreidimensionale (3D) Mikroumgebungen verwenden quantitative Real-Time Polymerase-Kettenreaktion (qRT-PCR) zu quantifizieren. Wir erfolgreich &uuml;berwacht und Differenzierung der NSCs in kleinen Volumen ECMs quantifiziert und festgestellt, dass die Differenzierung der NSCs, vor allem diejenigen, die Differenzierung gegen&uuml;ber neuronalen und oligodendrocytic Linien, von 3D Mikroumgebungen im mikrofluidische Kan&auml;le rekonstituiert erheblich verst&auml;rkt wird.

Dreidimensionale extrazellul&auml;re Matrix-vermittelte neuronale Stammzellen Differenzierung in einem Microfluidic-Ger&auml;t.

Riportiamo un unico metodo per quantificare gli effetti di in vivo-come matrice extracellulare (ECM) per guidare la differenziazione delle cellule staminali neurali (NSCs) in tridimensionale (3D) microambienti mediante reazione a catena della polimerasi in tempo reale quantitativa (qRT-PCR). Abbiamo correttamente monitorati e quantificati differenziazione di NSCs nel piccolo volume ECMs e trovato che differenziazione di NSCs, specialmente quelli differenziare verso lignaggi neuronale e oligodendrocytic, &egrave; notevolmente migliorato da 3D microambienti ricostituiti nei canali microfluidici.

Tridimensionale extracellular matrix-mediata neurale cellule staminali differenziazione in un dispositivo microfluidico.

&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6837;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x6307;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09; &#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5B9A;&#x91CF;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (qRT PCR) &#x7684;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x76D1;&#x6D4B;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x9648;&#x9E4F;&#x4F53;&#x79EF;&#x5C0F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5206;&#x5316;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C; oligodendrocytic &#x7684;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x9274;&#x522B;&#x5927;&#x5927;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x6E20;&#x9053;&#x91CD;&#x7EC4; 3D &#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;

&#x4E09;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

Here, we report a unique method to quantify the effects of in vivo-like extracellular matrix (ECM) for guiding differentiation of neural stem cells (NSCs) in three-dimensional (3D) microenvironments using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). We successfully monitored and quantified differentiation of NSCs in small volume ECMs and found that differentiation of NSCs, especially those differentiating towards neuronal and oligodendrocytic lineages, is significantly enhanced by 3D microenvironments reconstituted in the microfluidic channels.

Three-dimensional extracellular matrix-mediated neural stem cell differentiation in a microfluidic device.

Nous rapportons ici une m&eacute;thode particuli&egrave;re pour quantifier les effets in vivo-comme la matrice extracellulaire (ECM) pour guider la diff&eacute;renciation des cellules souches neurales (CNS) dans des micro-environnements en trois dimensions (3D) using quantitative Real-Time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Nous avons r&eacute;ussi surveill&eacute;s et quantifi&eacute; la diff&eacute;renciation des CNS en petit volume SEGDA et trouv&eacute; que la diff&eacute;renciation des CNS, surtout ceux de diff&eacute;renciation vers les lign&eacute;es neuronales et oligodendrocytic, est consid&eacute;rablement renforc&eacute;e par des micro-environnements 3D reconstitu&eacute;s dans les canaux microfluidiques.

Diff&eacute;renciation en trois dimensions extracellulaire induite par la matrice de cellules souches neurales dans un dispositif microfluidique.

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (qRT PCR) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143; (3 D) &#x5FAE;&#x5C0F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;NSCs&#xFF09; &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (ECM) &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x76E3;&#x8996;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0; ECMs NSCs &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x767A;&#x898B; NSCs &#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; oligodendrocytic &#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3078;&#x306E;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F; 3&#x6B21;&#x5143;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E; 3&#x6B21;&#x5143;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC19;&#xC740; &#xBE44;&#xBCF4; &#xC815;&#xB7C9; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR qRT)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) microenvironments&#xC5D0;&#xC11C; (NSCs) &#xC2E0;&#xACBD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC9C8; (ECM)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xACE0; &#xCE21;&#xC815;&#xD560; &#xC791;&#xC740; &#xBCFC;&#xB968; Ecms&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Nscs&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; oligodendrocytic &#xACC4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; Nscs&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; 3D microenvironments &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC1C;&#xACAC;.

3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0;.

Presentamos un m&eacute;todo &uacute;nico para cuantificar los efectos de en vivo-como matriz extracelular (MEC) para guiar la diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas madre neurales (NSCs) en tres dimensiones (3D) microambientes usando la reacci&oacute;n en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativo (qRT-PCR). Con &eacute;xito monitoreados y cuantificado diferenciaci&oacute;n de NSC en peque&ntilde;o volumen ECMs y encontr&oacute; que diferenciaci&oacute;n de NSCs, especialmente aquellos que se diferencian hacia linajes neuronales y oligodendrocytic, es mejorada significativamente por 3D microambientes reconstituidos en los canales de microfluidos.

Tridimensional extracelular mediada por matriz neural stem diferenciaci&oacute;n celular en un dispositivo microflu&iacute;dico.

&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x4F46;&#x6709;&#x529B;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x548C;&#x4E8C;&#x7EF4; (2D) &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5E73;&#x53F0;&#x5305;&#x62EC;&#x8868;&#x9762;&#x53EF;&#x5FAE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x7EB3;&#x5165;&#x5206;&#x5EAD;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5E73;&#x53F0;&#xFF0C;&#x660E;&#x786E;&#x754C;&#x5B9A;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x523A;&#x6FC0;&#x53EF;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B; &lt; 1 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x590D;&#x5236;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x6D41;&#x91CF;&#x548C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x89C2;&#x5BDF;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x4E3A;&#x3001; &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x901A;&#x4FE1;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x52A8;&#x6001;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F02;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x3001; &#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x5728;&#x53D7;&#x63A7;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3002;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5305;&#x62EC;&#x4EE5;&#x524D;&#x86EE;&#x8352;&#x4E4B;&#x5730;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x751F;&#x5316;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x56E0;&#x7D20;&#x8C03;&#x8282;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x82B1; 3 d &#x5236;&#x4F5C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FD0;&#x884C;&#x591A;&#x8FBE;&#x51E0;&#x5468;&#x3002;

&#x540C;&#x65F6;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x5728;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x6216;&#x5185;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

This protocol describes a simple but robust microfluidic assay combining three-dimensional (3D) and two-dimensional (2D) cell culture. The microfluidic platform comprises hydrogel-incorporating chambers between surface-accessible microchannels. By using this platform, well-defined biochemical and biophysical stimuli can be applied to multiple cell types interacting over distances of <1 mm, thereby replicating many aspects of the in vivo microenvironment. Capabilities exist for time-dependent manipulation of flow and concentration gradients as well as high-resolution real-time imaging for observing spatial-temporal single-cell behavior, cell-cell communication, cell-matrix interactions and cell population dynamics. These heterotypic cell type assays can be used to study cell survival, proliferation, migration, morphogenesis and differentiation under controlled conditions. Applications include the study of previously unexplored cellular interactions, and they have already provided new insights into how biochemical and biophysical factors regulate interactions between populations of different cell types. It takes 3 d to fabricate the system and experiments can run for up to several weeks.

Microfluidic assay for simultaneous culture of multiple cell types on surfaces or within hydrogels.

Ce protocole d&eacute;crit une simple mais robuste microfluidique dosage combinant en trois dimensions (3D) et &agrave; deux dimensions (2D) de culture cellulaire. La plate-forme microfluidique comprend hydrogel-incorporant des chambres entre MICROCANAUX surface accessible. En utilisant cette plateforme, des stimuli biochimiques et biophysiques bien d&eacute;finies peuvent &ecirc;tre appliqu&eacute;es &agrave; plusieurs types de cellules interagissent sur des distances de &lt; 1 mm, reproduisant ainsi les nombreux aspects du microenvironnement in vivo. Capacit&eacute;s existent pour la manipulation de flux et de gradients de concentration, mais aussi une imagerie en temps r&eacute;el pour observer le comportement spatio-temporel de cellule unique, communication de cellule-cellule, interactions cellule-matrice et la dynamique des populations cellulaires d&eacute;pendant du temps. Ces tests de type cellule h&eacute;t&eacute;rotypiques peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour &eacute;tudier la survie des cellules, prolif&eacute;ration, migration, morphogen&egrave;se et diff&eacute;renciation dans des conditions contr&ocirc;l&eacute;es. Applications comprennent l&#39;&eacute;tude des interactions cellulaires auparavant inexplor&eacute;es, et ils ont d&eacute;j&agrave; fourni de nouvelles connaissances sur les facteurs comment biochimiques et biophysiques r&eacute;gulent les interactions entre les populations des diff&eacute;rents types de cellules. Il faut 3 d pour fabriquer le syst&egrave;me et exp&eacute;riences peuvent fonctionner pendant jusqu&#39;&agrave; plusieurs semaines.

Dosage microfluidique pour la culture simultan&eacute;e de plusieurs types de cellules &agrave; la surface ou au sein des hydrogels.

Dieses Protokoll beschreibt eine einfache, aber robuste mikrofluidische Assay kombiniert dreidimensionale (3D) und zweidimensionale (2D) Zellkultur. Die Microfluidic-Plattform umfasst Hydrogel-Einbeziehung von Kammern zwischen Oberfl&auml;che zug&auml;nglichen Mikrokan&auml;len. Mithilfe dieser Plattform k&ouml;nnen auf mehrere Zelltypen, die Interaktion &uuml;ber Entfernungen von klar definierten biochemische und biophysikalische Reize angewendet werden &lt; 1 mm, somit viele Aspekte der in-vivo Mikromilieu replizieren. M&ouml;glichkeiten gibt es f&uuml;r zeitabh&auml;ngige Manipulation von Str&ouml;mung und Konzentration Steigungen sowie hochaufl&ouml;sende Echtzeit zur Beobachtung von Raum-zeitliche einzellige Verhalten, Zell-Zell-Kommunikation, Zelle-Matrix-Interaktionen und Zelle Populationsdynamik. Diese heterotypischen Zelle Typ Proben k&ouml;nnen verwendet werden, um Zelle &uuml;berleben, Proliferation, Migration, Morphogenese und Differenzierung unter kontrollierten Bedingungen zu studieren. Anwendungen geh&ouml;ren die Untersuchung der zuvor unerforschte zellulare Wechselwirkungen, und sie haben bereits neue Erkenntnisse wie biochemischen und biophysikalischen Faktoren Interaktionen zwischen Populationen verschiedener Zelltypen zu regulieren. Es dauert 3-d, das System zu fabrizieren und Experimente laufen k&ouml;nnen bis zu mehreren Wochen.

Mikrofluidische Assay f&uuml;r gleichzeitige Kultur mehrere Zelltypen auf Oberfl&auml;chen oder in Hydrogele.

Questo protocollo descrive un semplice ma robusto microfluidica dosaggio combinando tridimensionale (3D) e bidimensionali (2D) delle cellule di cultura. La piattaforma microfluidica comprende camere che incorporano idrogel tra superficie accessibile microcanali. Usando questa piattaforma, stimoli biochimici e biofisici ben definiti possono essere applicati a molteplici tipi di cellule interagendo su distanze di &lt; mm 1, replicando quindi molti aspetti del microambiente in vivo. Funzionalit&agrave; esistono per la manipolazione del tempo-dipendente del flusso e gradienti di concentrazione, nonch&eacute; di imaging ad alta risoluzione in tempo reale per osservare il comportamento di cella singola spazio-temporale, comunicazione cellula-cellula, interazioni cellula-matrice e dinamica di popolazione di cellule. Questi dosaggi di tipo cella heterotypic possono essere utilizzati per studiare la sopravvivenza delle cellule, proliferazione, migrazione, morfogenesi e differenziazione in condizioni controllate. Le applicazioni includono lo studio delle interazioni cellulari in precedenza inesplorate, e che hanno gi&agrave; fornito nuove intuizioni come biochimiche e biofisiche fattori regolano le interazioni tra le popolazioni dei diversi tipi di cellule. Ci vogliono 3 d per fabbricare il sistema e possono eseguire esperimenti per fino a parecchie settimane.

Microfluidica dosaggio per la cultura contemporanea di pi&ugrave; tipi di cellule sulla superficie o all&#39;interno di idrogel.

&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3064;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E; 3 &#x6B21;&#x5143; (3 D) &#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3001;2&#x6B21;&#x5143; (2 D) &#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x30C1;&#x30A7;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x8868;&#x9762;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9593;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x7269;&#x7406;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x9060;&#x8DDD;&#x96E2;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B; &lt; 1 &#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3068;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x3068;&#x6642;&#x7A7A;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x52D5;&#x614B;&#x89B3;&#x6E2C;&#x7528;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6709;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x672A;&#x8E0F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x7269;&#x7406;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x65E2;&#x306B;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 D &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x88FD;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6570;&#x9031;&#x9593;&#x307E;&#x3067;&#x3002;

&#x540C;&#x6642;&#x6587;&#x5316;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x578B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;

&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D)&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; 2 &#xCC28;&#xC6D0; (2D) &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xBC0F;. &#xBBF8;&#xC138; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; &#xC0AC;&#xC774; &#xD45C;&#xBA74; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; microchannels &#xCC54;&#xBC84; hydrogel&#xC744; &#xD1B5;&#xD569; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xAC70;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &lt; 1 m m, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; microenvironment&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xD750;&#xB984; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC6B8;&#xAE30; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xB3D9;&#xC791;, &#xC140; &#xD1B5;&#xC2E0;, &#xC138;&#xD3EC;-&#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; heterotypic &#xC140; &#xC720;&#xD615; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;, &#xC99D;&#xC2DD;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, morphogenesis &#xBD84;&#xD654; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC774;&#xC804; &#xBBF8;&#xAC1C;&#xCC99;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC774;&#xBBF8; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC81C;&#xACF5;. 3 D &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xAC78;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBA87; &#xC8FC;&#xAE4C;&#xC9C0;.

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB610;&#xB294; hydrogels &#xB0B4; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xC138; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;.

Este protocolo describe un simple pero robusto microflu&iacute;dicos ensayo combinando tridimensional (3D) y cultivo celular de dos dimensiones (2D). La plataforma de microfluidos comprende c&aacute;maras de hidrogel-incorporando entre microcanales superficie accesible. Mediante el uso de esta plataforma, est&iacute;mulos bien definidos de bioqu&iacute;micos y biof&iacute;sicos pueden aplicarse a m&uacute;ltiples tipos de c&eacute;lulas interactuando sobre distancias de &lt; 1 mm, replicando as&iacute; muchos aspectos del microambiente in vivo. Capacidades existen para manipulaci&oacute;n dependiente del tiempo de flujo y gradientes de concentraci&oacute;n as&iacute; como imagen alta resoluci&oacute;n en tiempo real para observar el comportamiento espacial y temporal de unicelulares, comunicaci&oacute;n c&eacute;lula-c&eacute;lula, interacciones c&eacute;lula-matriz y din&aacute;mica de la poblaci&oacute;n celular. Estos ensayos de tipo celular heterot&iacute;pico pueden utilizarse para estudiar la supervivencia celular, proliferaci&oacute;n, migraci&oacute;n, morfog&eacute;nesis y diferenciaci&oacute;n en condiciones controladas. Las aplicaciones incluyen el estudio de interacciones celulares previamente inexplorados, y ya tienen siempre nuevas ideas sobre c&oacute;mo bioqu&iacute;micos y biof&iacute;sicos factores regulan las interacciones entre las poblaciones de diferentes tipos de c&eacute;lulas. Tarda 3 d para fabricar el sistema y pueden ejecutar experimentos para hasta varias semanas.

Ensayo de microfluidos para cultura simult&aacute;nea de m&uacute;ltiples tipos de c&eacute;lulas en superficies o dentro de los hidrogeles.

&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x56F0;&#x96BE;&#x548C;&#x708E;&#x75C7;&#x4F53;&#x5916;&#x91CD;&#x7EC4;&#x53D7;&#x5230;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x708E;&#x75C7;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4E09;&#x7EF4;&#x8F6E;&#x56DE;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x540C;&#x65F6;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x708E;&#x75C7;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0B;&#x5185;&#x8033;&#x8FC1;&#x79FB;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;

&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x6837;&#x5185;&#x8033;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Spatiotemporal analysis of the inflammatory response has been limited by the difficulties of in vivo imaging and reconstitution of inflammation in vitro. Here, we present a novel method for establishing in vivo-like inflammatory models in a microfluidic device and quantitatively measuring the three-dimensional transmigration of neutrophils during the inflammatory process. This enabled us to concurrently characterize transendothelial migration behaviors of neutrophils under the influence of various inflammatory stimuli.

A versatile assay for monitoring in vivo-like transendothelial migration of neutrophils.

Analyse spatio-temporelle de la r&eacute;ponse inflammatoire a &eacute;t&eacute; limit&eacute;e par les difficult&eacute;s d&#39;imagerie in vivo et la reconstitution de l&#39;inflammation in vitro. Nous pr&eacute;sentons ici une m&eacute;thode originale pour &eacute;tablir en vivo mod&egrave;les inflammatoires dans un dispositif microfluidique et mesurer quantitativement la transmigration en trois dimensions des neutrophiles au cours du processus inflammatoire. Cela nous a permis de caract&eacute;riser les comportements migration transendoth&eacute;liale des neutrophiles sous l&#39;influence de divers stimuli inflammatoires simultan&eacute;ment.

Un dosage polyvalent pour la surveillance dans la migration transendoth&eacute;liale de vivo-comme des neutrophiles.

Raumzeitliche Analyse der Entz&uuml;ndung wurde durch die Schwierigkeiten der in-vivo Bildgebung und Rekonstitution der Entz&uuml;ndung in-vitro-begrenzt. Hier pr&auml;sentieren wir eine neue Methode f&uuml;r die Einrichtung in Vivo-&auml;hnlichen entz&uuml;ndlichen Modelle in einem Microfluidic-Ger&auml;t und quantitativ Messen der dreidimensionalen Transmigration von Neutrophilen w&auml;hrend des entz&uuml;ndlichen Prozesses. So konnten wir um Transendothelial Migration Verhaltensweisen der Neutrophilen unter dem Einfluss von verschiedene entz&uuml;ndliche Reize gleichzeitig zu charakterisieren.

Eine vielseitige Assay f&uuml;r die &Uuml;berwachung in Vivo-&auml;hnlichen Transendothelial Migration von Neutrophilen.

Spatiotemporal analisi della risposta infiammatoria sono stato limitato dalle difficolt&agrave; di imaging in vivo e ricostituzione dell&#39;infiammazione in vitro. Qui, vi presentiamo un nuovo metodo per stabilire in vivo-come modelli infiammatorie in un dispositivo di microfluidica e misurare quantitativamente la trasmigrazione tridimensionale dei neutrofili durante il processo infiammatorio. Questo ci ha permesso di caratterizzare contemporaneamente comportamenti migrazione transendoteliale dei neutrofili sotto l&#39;influenza di vari stimoli infiammatori.

Un dosaggio versatile per il monitoraggio della migrazione transendoteliale vivo-come dei neutrofili.

&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;in vivo &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x3068;&#x708E;&#x75C7;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x3067;&#x78BA;&#x7ACB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x708E;&#x75C7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306B;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x8F2A;&#x5EFB;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x4E0B;&#x3067;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x5185;&#x76AE;&#x56DE;&#x904A;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5185;&#x76AE;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x76E3;&#x8996;&#x7528;&#x591A;&#x76EE;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3002;

&#xC5FC;&#xC99D; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; spatiotemporal &#xBD84;&#xC11D; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xACFC; &#xC5FC;&#xC99D; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xBE44;&#xBCF4; &#xAC19;&#xC740; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC591;&#xC801; &#xCE21;&#xC815; &#xC5FC;&#xC99D; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD658;&#xC0DD; &#xC18C;&#xC124; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xC544;&#xB798;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; transendothelial &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB3D9;&#xC791;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xBE44;&#xBCF4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; transendothelial &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;.

An&aacute;lisis espacio-temporal de la respuesta inflamatoria ha sido limitado por las dificultades de imagen in vivo y reconstituci&oacute;n de inflamaci&oacute;n in vitro. Aqu&iacute;, presentamos un novedoso m&eacute;todo para establecer en modelos inflamatorios vivo en un dispositivo de microfluidos y medir cuantitativamente la transmigraci&oacute;n tridimensional de neutr&oacute;filos durante el proceso inflamatorio. Esto nos permiti&oacute; caracterizar al mismo tiempo transendothelial comportamientos de migraci&oacute;n de neutr&oacute;filos bajo la influencia de varios est&iacute;mulos inflamatorios.

Yoojin Shin

Research service

Veterans Administration Medical Center, Memphis, TN

Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

Yoojin Shin

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Research service

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Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

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