在高效液相色谱法 (HPLC) 中,洗脱过程对于分析物的分离和色谱结果的质量至关重要。洗脱描述了化合物如何通过色谱柱并根据其与流动相和固定相的相互作用进行分离。该过程决定了色谱图中的分辨率、峰形和停留时间,这些对于识别和量化复杂混合物中的成分至关重要。了解洗脱过程有助于解释色谱数据并提高分离效率。
HPLC 使用高纯度的 HPLC 级溶剂来确保杂质的干扰最小。高纯度溶剂是必不可少的,因为即使是微量的污染物也会干扰洗脱过程、扭曲色谱峰并降低样品检测时的灵敏度。此外,溶剂可能含有溶解气体,例如氮气和氧气,这也会干扰样品检测。使用真空泵或氦气吹扫来消除这些气体,以保持分离和检测过程的完整性。
然后,通过高压泵将脱气的溶剂从流动相储液器中抽出,往复泵是最常用的类型。该泵由一个活塞和两个止回阀组成,利用活塞的来回运动抽取溶剂。然而,往复泵的一个缺点是它会产生脉冲溶剂流。因此,现代 HPLC 系统在泵上连接了一个脉冲阻尼器以解决这个问题。其他泵,如螺杆驱动的位移泵,虽然可用,但可能存在溶剂容量较小和承压能力低等限制,这使得它们在更换溶剂时不太方便。
洗脱过程有两种类型:等度洗脱和梯度洗脱。等度洗脱在整个分离过程中使用单一溶剂或流动相,而梯度洗脱涉及分离过程中成分的变化。该方法提高了分离效率,缩短了分析时间,提高了分辨率,从而使色谱图中的峰更清晰。梯度洗脱提供了更好的分辨率,并产生了更清晰、分离的峰,与等度洗脱相比,更容易解释复杂混合物的色谱图。
在流动相进入色谱柱之前,使用带有双位阀的环注射器引入样品。该阀门有助于将流动相引导至色谱柱。由于 HPLC 中的压力较高,因此不能像气相色谱 (GC) 那样进行样品注入。固定体积从 0.5 微升到 2 毫升的取样环可以互换。
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