一种新型的RFP的记者，以帮助在眼成虫光盘的可视化果蝇</em

摘要

我们描述了一种新型红色荧光蛋白（RFP）的记者，具体表现在果蝇眼睛。我们详细解剖眼成虫光盘的方法，以及如何记者可用于援助在解剖和鉴定特定的细胞类型，在发展中国家的眼睛。

摘要

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研究方案

1. 首先放置在解剖显微镜下的PBS下降到Sylgard菜。
2. 下取出一小瓶或一瓶使用抹刀几个流浪第三龄幼虫，在PBS。
3. 开始解剖用左手镊子（如果你是右撇子）掌握三分之二的方式对后，幼虫，然后使用另一对深色口钩举行前结束。
4. 现在，轻轻一拉幼虫除了从镊子都对远离对方。的口器，应该从身体的其余部分附加的眼睛/大脑复杂。
5. 放置30-45分钟就冰在4％多聚甲醛/ PBS液染色，免疫修复光盘在这一点上，眼睛光盘。然后用PBST洗光盘四次，然后与相应的抗体染色。
6. 成虫组织是半透明的，所以刚开始时的眼睛光盘是很难辨别。为了使其更容易识别它们使用解剖显微镜与荧光能力。用眼RFP记者线眼光盘可以清楚地看到红色荧光叠加的球形（图1）视叶的组织。
7. 如果您使用的是光纤冷光源，直接在幻灯片的斜角的光，因为这会给光盘较大的反差。眼睛/触角光盘是通过光纤在后的秸秆视叶和来自前触角光盘通过秸秆的口器。
8. 解剖眼光盘用一个镊子的口器和使用另一对分开幼虫大脑的眼睛光盘。分开的口器眼光盘。最后从幻灯片中删除，因为这些都可以防止盖玻片从平躺的口器。
9. 光盘现在已经准备好，要么epifluorescence或共聚焦显微镜成像（图2）。

代表性的结果

图1。初步解剖的眼睛/眼RFP三龄果蝇幼虫的大脑复杂。眼/触角成虫光盘（概述）中可以看出，口器（MP）和覆盖大脑视叶（OL）。图像是使用荧光解剖镜下显示RFP的眼睛光盘表达。前路是到左边。比例尺：300微米。

图2。眼眼成虫光盘RFP的记者表达。三龄眼（ED）/触角光盘（AD）的显示RFP表达（红色），从眼，RFP的幼虫解剖。光盘沾上鬼笔环肽（绿色），污渍根尖细胞表面，显示形态畦（箭头）。 RFP的表达在周围的MF前体细胞，在光感受器1,6,7和视锥细胞。前路是到左边。比例尺：25微米。

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讨论

解剖果蝇眼睛成虫光盘很简单，但可以利用的时间掌握。关键步骤是确定眼睛的光盘和清扫远离幼虫大脑。眼盘的鉴定是比较容易的，使用这里描述的眼RFP的线。可能修改删除触角光盘或peripodial膜，或离开视叶附以可视化的公关轴突进入大脑。

眼RFP的路线是通过克隆产生特有的一种新型的眼睛^， 从2指出的P2基因的第二内含子增强剂的PRED的H -毒刺^增?...

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