女答：埃及伊蚊蚊的dsRNA注入

摘要

反向遗传方法已被证明非常有用，确定哪些基因底层电阻载体病原体在蚊子。这个视频协议，说明了由詹姆斯实验室用于注入雌性埃及伊蚊的蚊子，海港登革热病毒的双链RNA的方法。校准注射针头，注射设置进行操作，并注入胸廓的dsRNA的技术说明。

摘要

反向遗传方法已被证明非常有用，确定哪些基因底层电阻载体病原体在蚊子。这个视频协议，说明了由詹姆斯实验室用于注入雌性埃及伊蚊的蚊子，海港登革热病毒的双链RNA的方法。校准注射针头，注射设置进行操作，并注入胸廓的dsRNA的技术说明。

研究方案

1. 拉玻璃毛细管微量注射针。我们用针拉马，从萨特仪器有限公司（模型P - 2000）。针拉马程序规范是：
   
   热：275
   FIL：3
   VEL：37
   DEL：250
   PUL：125
   
   
2. 针装入一个已知体积的水（例如，1μL）和手动标记与罚款sharpie的规模。
3. 成立了蚊子注射后杯。首先削减1000μL枪头最外层提示。然后，切在洞杯边，并插入枪头杯的剩余部分。把一个净或盖杯上。
4. 用冰填充两个泡沫塑料箱。将冰盒＃1立体显微镜下，放置在冰面上的玻璃表面玻璃。
5. 麻醉与CO ₂和地点与杯，冰盒＃2，成人的成蚊。
6. 准备的dsRNA注射针。将填补与双链RNA注射块塑料软管针（注射块的描述见下文）。
7. 移动杯钳手表玻璃麻醉蚊子。打破注射针尖对蚊子角质层。放弃这种蚊子。
8. 注射针插入到蚊子的胸部。使用另一只手，从“休息的位置”调整阀对喷油器“注射位置”，并压缩活塞，直到所需的dsRNA量已注入。
9. 将注入后注射杯蚊子。

注射块成立

1. 修正了一个50毫升的注射器煤渣块。
   
2. 将一个可调的1路阀注射器年底，至少有两个出风口。
   
3. 不透气的塑料软管连接到1风口。
   
4. 插入软管的自由端的一个微量适配器。
   

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