从大鼠脑的解剖脑表面血管及相关脑膜和脉络丛的可视描述，

摘要

该视频演示了一种方法收获的两个最重要的的高度血管结构，支持前脑功能。它们是血管以及与相关的脑膜（MAV）和脉络膜丛这是必要的大脑血液流量和脑脊髓液（CSF）的稳态的脑表面（表面）。

摘要

该视频演示显示的方法收获​​的两个最重要的血管结构，而不是居住在大脑中正确的，即支持前脑功能。它们是血管以及与相关的脑膜（MAV）和脉络膜丛这是必要的大脑血液流量和脑脊髓液（CSF）的稳态的脑表面（表面）。收获的组织是适合生理和生化分析，和MAV已被证明是敏感的损坏所产生安非他明和热疗^1,2。同时，在MAV的主要和轻微脑vasculatures的，收获的是调查震荡，头部外伤时，潜在的高利率。在此演示文稿中的MAV解剖的软脑膜和蛛网膜少硬脑膜的脑膜及脑表面血管的主要和次要一些。脉络丛的解剖结构驻留在升抵押品脑室所描述的Oldfield和麦金利^3,4,5,6。收获这两个组织所采用的方法，也有利于区域皮质组织缺乏脑膜及脑表面血管的收获，是兼容的收获大脑的其他组织，如纹状体，下丘脑，海马，等这两个组织需要的解剖从总5到10分钟。可以发现，如图所示，在此演示文稿中的基因表达水平的解剖MAV和脉络丛，在GSE23093（MAV）和GSE29733（脉络膜丛）在NCBI的GEO资料库。此数据已经，正在，用于帮助进一步了解MAV和脉络丛的功能和神经中毒的事件，如严重的高热和AMPH如何影响他们的功能。

研究方案

虽然未示出，在视频，第一给定大鼠，用过量的戊巴比妥钠300毫克/公斤，导致在少于3分钟内麻醉，然后断头处死。他们的大脑进行迅速，但仔细从头骨中取出，在冰冷的生理盐水中冷却5分钟。重要的是让大脑冷却这解剖MAV使得MAV是可以分开的皮层的表面（层I的顶部）之前的时间量。大脑，然后放置在底部的玻璃陪替氏培养皿搁在冰满（1厘米深）的冰冷的生理盐水或0.1M磷酸钠缓冲盐水的pH = 7.4。所有的解剖完成与脑的大部分浸入盐水。

1。去除松果体

1. 放置在脑背侧向上（相对于陪替氏培养皿的底部）。就到t喙两个半球之间的松果体是位于最尾端腹侧区他小脑（松果体凹槽），并且是正下方的表面或在上丘的脑膜。删除的的松果体第一个使用两个小弯尖镊子。它是粉红色的颜色，如皮质，但经常被包围在从大脑切除残留的血液和血管的残余。

2。删除的MAV

1. 翻转大脑的“倒挂”和椎动脉，小动脉和脑膜，桥前脑脑膜和血管的分离。前脑MAV，然后开始拆除。
   重要的是要开始腹部比较大的Willis环的动脉，大脑中动脉（MCA）和前动脉在解剖过程中是最强的，作为“脚手架”，其中较小的表面的软脑膜动脉和微动脉膜然后可以除去从皮层与脑膜的其余部分。审查Scremin ⁷米矿石的脑表面血管的可视化图形和细节。
2. 从任一半球，使用小弯尖镊子切断后交通动脉，颈内动脉关头后的。因此，分离前脑的前部和后部的动脉树。对侧半球重复同样的过程。
3. 马华和前动脉的镊子夹住，轻轻拉和周围嗅束前背的方向，使覆盖的腹前部皮层（梨状，嗅结节），MAV解除。这消除了很多的MAV覆盖前皮层（扣和轨道）。
4. 转动脑在45〜90°角的陪替氏培养皿。横向的，更靠前的区域周围的MAV外侧皮质区（颗粒孤立的，次要的体感和听觉皮层）可以从皮质中解脱出来，抓住MCA和相关阿尔特指背，轻轻地拉动沿皮层。如果有必要，可以使用的端部的钳子来抬起并从皮质释放的主要动脉剥离时。
5. 现在删除的MAV后外侧地区。 （注意，它最好是从一个半球切换的其他在此收获过程，以确保的MAV保持冷和水合。此外，如果从皮质释放的MAV电阻上遇到一个半球开关对侧半球暂时，然后再回到原来的半球）。
6. 要删除的最背侧区域周围的初级躯体的MAV和运动皮质转动脑背侧向上（相对于陪替氏培养皿的底部）。为了最终释放，从大脑的MAV，使用的端部的钳子沿矢状窦。
   收获MAV的这部分可以被暂时存放在冰冷的生理盐水中，直到测试和分析，或冻结，购买处理。常MAV覆盖最后/尾鳍地区的皮质（嗅，视觉和最尾端的听觉皮层）保持连接的皮质。其去除后视频时，MAV之间的扣带皮质和覆盖丘解剖。

3。去除脉络丛

1. 脑背侧的位置并保持在与较大的钳子的小钳子推通过中线之间的半球，然后使用皮质和胼胝体（≈-3.3毫米来自囟）的端部通过穿刺入的顶部的地方中线的海马状突起。
2. 使用镊子远离背海马和隔拉皮质胼胝体，露出最侧脑室的。脉络丛可以定位和识别的红色波浪线划定的主要动脉，运行它的长度。使用的两个端部的钳子撬第三法师的侧壁tricle和扩大它在最尾端（≈-4.3毫米从囟^8）。
3. 使用小镊子，将这个脉络丛免费。前区≈1.6毫米前囟门）之间的隔膜和尾状核/壳（最喙的程度，然后去和镊子的脑室扩大本节拉脉络丛免费。对侧半球上执行相同的过程，以获得所述第二其它脉络膜丛。
   同样，这组织可以被暂时存放在冰冷的生理盐水中，直到测试和分析，或冻结，购买处理。

4。去除余下的MAV尾鳍地区的Cortex包括扣带，听觉和视觉皮层丘脑和丘以及上覆^第三脑室

1. 删除整个海马的两个半球暴露在丘脑和丘MAV。的去除这部分的MAV是比除去的MAV皮质不太困难。
2. 拉动这部分的MAV免费的把握较大的血管覆丘脑的前部，然后轻轻拉动尾部。此血管连接到上文丘网络和血液供给向背侧海马和背侧丘脑网络。拉了尾部，并逐步supracollicular网络，直到到达最后一个部分的尾动脉环血管。
   在这一点上，必须采取更多的照顾，以消除任何剩余的后表面上的颗粒扣带，初级听觉和视觉皮层腹侧MAV。与MAV的其他部分覆盖的前端部分的皮质，这个组织可以暂时留在冰冷的盐水，直到测试和分析或冻结后处理的。任何剩余的后腹MAV收获第二个MAV部分的，应该被删除D添加到第一解剖MAV覆盖皮层部分，如果它们是单独进行分析。

5。代表性的成果

当清扫正确执行，导致的MAV组织应该在两个完整的实体，重约35至45毫克总。初步解剖MAV周围的皮质，重约25毫克和的MAV覆盖的丘脑，丘和枕叶皮质重约15毫克。它应该是稍微带粉红色的颜色从残留的血液在血管。脉络膜丛双边收获应该是在两个完整的组织样本与每个称量1〜2毫克。虽然多余的水可以被删除前的MAV储存或处理，如用纸巾在清洁镜头使用，以避免组织损失，这是不是一个好主意，以消除多余的水分从解剖脉络丛。生成图1比较的表达访问过的在三个区域（纹状体，顶叶皮层和MAV）在控制条件下，使用安捷伦ES-014879全大鼠基因组4x44K 60mer寡核苷酸阵列（G4131F，安捷伦科技公司，帕洛阿尔托，加利福尼亚州NCBI GEO加入GPL7294; GSE23093和GSE29733存在NCBI的GEO库）。图中的两条曲线图示显示1）中的表达相比，顶叶皮质纹状体和2）相比的MAV顶叶皮质。很显然，纹状体和顶叶皮质的关系更加紧密地相互比MAV。脉络丛的MAV比较，数据将被呈现在未来的出版物。但是，它很可能在MAV和脉络丛的表达谱的关系更为密切，相互比他们的纹状体和顶叶皮质。 图2显示了基因的差异表达热疗（EIH）与AMPH相比，MAV控制和对方。

内容“>超过11,000个基因与官方NCBI基因符号对照组动物在MAV相比，那些记录在纹状体和顶叶皮质的基因表达。以上这些基因中有2000年的2.5倍或更多不同的表达在MAV相比，两个神经元丰富的组织，和550的基因有一个大10倍的表达差异。略多于40％（253），这些基因的表达减少10倍或更MAV有关神经功能。相比，顶叶皮层和纹状体表达的MAV超过10倍或以上的343个基因，这种基因列表为出发点，以确定基因在MAV具有非常高的富集。 1列出了大于15倍的表达MAV基因相比，顶叶皮层和纹状体和分类 ​​方面的功能。其中许多基因都与血管系统和/或免疫系统。这些TYPES应富集的基因约5 - 至10 - 倍，因为增加的血管本身和血液本内。然而，即使是与已知的一般血管功能的基因，同比增长15倍以上，表明富集在MAV。也有倍的变化是非常大的多的基因; 1）胞外基质蛋白（不是特别相关，脉管系统），2）溶质转运和3）脂质和视黄酸代谢。由于好，一些生长和分化的基因或转录因子被发现。

图1。 MAV与顶叶皮层和纹状体基因表达的比较。火山情节比较基因表达水平的顶叶皮层和纹状体（上图）和顶叶皮层和MAV（下图）。红色的符号表示的基因，是显着不同的，即可连续通连接P <0.05和地区的1.5倍或更大的区域差异表达。黑色符号代表不显着的区域之间不同（P> 0.05）的基因，并小于1.5倍不同的表达式中。粉红色的符号表示的基因不到一个1.5倍的表达差异，但在统计学上显着性差异，P <0.05。黄色符号识别基因表达的1.5倍或更高，但这种变化在统计上并不显着，P <0.05。

缩略语

AMPH安非他明
EIH环境引起的高热
MAV的脑膜和相关脑血管
规范常温控制

图2。热疗和安非他明MAV基因表达的影响。火山情节比较基因表达水平的MAV后，在3小时的时间点的生理盐水，EIH或AMPH。红色符号表示的基因被认为是显着不同，而黑点/圆圈代表不显着不同地区之间的基因。其他统计分析，以验证其表达控制和治疗之间的差异其实是统计上显著。

MAV表达脑表达	NCBI基因符号	组织特异性或报告功能（S）
> 50倍	ANXA2 一个 ，COL8A1，德，Esm1，Glycam1，KL 一个 ，Lect1，LEPR，LUM，MYH11，OGN，TAGLN，THBS2，TNNT2	血管及心脏
> 50倍	CCL19，CD74 一 ，DEFB1，Lrrc21，MGL1，MRC1，MSLN，PLa2g5，Prg4，RT1，RT1-DA-BB	免疫系统
> 50倍	ADH1，Aebp1的，ALDH1A2，GSTM2	维甲酸与脂质处理
> 50倍	CDH1，COL3A1，COL1A2，Colec12，Cpxm2，氯丙嗪，DCN，EMP3，GPC3，Nupr1，OMD，PCOLCE Slamf9，Tmem27，Tspan8	细胞外基质和细胞 - 细胞连接处
> 50倍	AQP1，Asgr1，Kcnj13，Slc5a5，Slc6a13，Slc6a20，Slc22a6，Sned1，TTR	离子和溶质稳态
> 50倍	Alx3，CDKN1C，FOXC2，IGFBP2，IFITM1，Ifitm2，Nkx6-1，OSR1，Prrx2，SFRP1，TBX15。 Upk1b，WISP2，Wnt6	发展与转录调控
> 50倍	Gpha2，Mfap5，Mpzl2 Plac8的，Scgb1c1，Sostdc1，Steap1	未知及杂项
30〜50倍	ANXA1 一个 ，Angpt2，C6 一 ，GJB2，Ptgis，Thbd，TIMP1	血管及心脏
30〜50倍	Casp12，CCL2，CCR1，CD14，CXCL10，Ifitm3，Klra5，Lgals1，LGALS3，Ms4a4a，MS4A7，PLSCR1，SPP1，XCL1	免疫系统
30〜50倍	COL6A3，Cpxm1，Efemp1，FMOD，MGP，NID2	细胞外基质和细胞 - 细胞连接处
30〜50倍	CP，，SCT Cubn，GCGR，S100A6，Scn7a：Slc4a5，Slc16a11，Slco1a5	离子和溶质平衡
30〜50倍	CFD，Ch25h，CRABP2，Rarres2	维甲酸与脂质处理
30〜50倍	BMP6，Casp12，DAB2，FOLR1，IGF2，MSX1，Tbx18 TWIST1，Wnt5b	发展与转录调控
30〜50倍	Cela3b，Cln6，C1qtnf7，Copz2，Dhrs7c，Gng11，Prss23时，Vim，SRPX	未知及杂项
15〜30倍	ADM，Angpt1，血管生成素样蛋白，BGN，CKLF 一 ，Cnn1，Cox8h，CTSK，F13a1，GJA5，KLF4，液氧，LYZ，Myl9，PROCR，PROS1，RT1巴，Serpinb10，SERPING1，SERPINF1，TGM2，Tnmd，Trim63，TXNIP 一 ，Vamp5，VTN	血管及心脏
15〜30倍	阿达一 ，BST2，CCL6，CD40，CD68，CTSC，磷酸二铵，Faim3，Fkbp9，FXYD5，FMO1，GLIPR1，IER3，Ifi47，Igsf6，硕士，Nfatc4，RT1-DB1，Serpinb1a，Tir4，Tubb6	免疫系统
15〜30倍	Adamtsl4，COL1A1，Crb3的，DPT，Egfl3，FBN1，FBLN1，Fbln5，FN1，ITGB4，LAMA2，Lgals3bp，LOXL1，Mfap4，MMP14，Mmp23，PPIC，SERPINH1，TIMP3	细胞外基质和细胞 - 细胞连接处
15〜30倍	CYBRD1，SELENBP1，Slc2a4，Slc9的A2，Slc13a3，Slc16a4，Slc22a8，SLC22A18	离子和溶质平衡
15〜30倍	Agpat2，Bdh2，Cyp26b1，Lpar3，LTB4DH，OLR1，PON3，RBP1，RBP4	维甲酸与脂质处理
15〜30倍	ATF3，DKK4，EYA2，Ifitm7，Ltbp1，Mustn1，NR2F2，Ptrf，Sphk1，TGFBI，Tcea3 Tcfap2b，Wnt2b，而Wnt5a，ZIC1	发展与转录调控
15〜30倍	C1R Adamts12，Adamtsl3，Crispld2，Crygn，CYP1B1，DSE，ENPEP，ENPP2，Epn3，FLNA，FMO3，GNMT，GPRC5C，HSPB1，Klc3，KRT18，KRT19，MDK，Mesp1，Ms4a6a，Ms4a6b，Ms4a11，NET1，Pdlim2， PLP2 Phactr2，，Ppp1r3b，Pqlc3，RIN3，Spag11，SULT1A1，Tmem106a，WFIKKN2	未知及杂项

^*表中的基因都必须是超过15倍以上表达在纹状体和pariet的人皮层和5倍以上的背景水平。这两个比率（MAV /纹状体MAV /顶叶皮层），每个基因被用于分组。

^一个基因被发现在血管内皮细胞，但也有可能在介导的免疫反应中发挥了重要作用。

表1。了15倍^*或更增加了表达的MAV相比，纹状体和顶叶皮层的基因。

讨论

技术方面的MAV和脉络丛解剖

至关重要的是在剥离的MAV有大脑“淹没”的大部分时间在生理盐水或钠的磷酸盐缓冲盐水。 MAV和皮质脱水剥离时，将导致在MAV坚持紧紧皮质层一，这与MAV和/或造成无法删除这些坚持MAV部分，从皮质的皮质组织，收获量会增加。剥离时，耐心是必要的。同样，如果删除的MAV从一个半球皮质剥离时，遇到了一些阻力，切换到另一半球，回去以后遇到反抗的一侧。这种方法确实需要一些练习来完善，并需要约5〜15“实践”解剖之前，实现均匀一致的收获的MAV组织的。开始的解剖和圣雷莫的方法，在脑底动脉环的MAV val且便于去除脑膜通过使用较大的血管为支持“脚手架”。

大部分血液最初在MAV血管后牺牲应在剥离喷出，和小于5％的RNA收获MAV应该是血源性。这是可能的，以除去几乎所有的血液灌流动物用50至70毫升的生理盐水中，用组织学技术之前，去除斩首和脑。但是，它是可视化的MAV解剖组织中要困难得多。三个最可能的“污染”的MAV组织来源是松果体，皮质层I组织和残余嗅球组织，但它是在该制剂中，也有可能得到垂体组织。在MAV松果体污染被检测到由MAV含有一个圆形的1至2毫米直径的球体是有色的暗红色。的主要功能松果体通常被认为是从MAV是完全不同的。它的主要功能是产生褪黑激素，调节各方面的昼夜节律^9，和¹⁰脂质前体lipoxygenation。虽然该基因的低 ，调节脂肪氧化酶活性，被认为是目前在成人主要是在松果体^10，我们的结果表明，它是在显着水平MAV也始终存在。残余在幅状的粉红色MAV组织具有约1​​至2毫米的致密组织，是很大括在在颜色苍白的的皮质或嗅球污染结果。这可以通过“浮动”的MAV的缓冲液的表面上，然后使用两个解剖钳除去较重的皮质或灯泡组织发现。

如果污染的MAV由我组织的皮质层，下丘脑组织或松果体存在，那么将有一个显着的几个基因着地表达比通常存在于一个“干净”解剖。污染的MAV松果体会导致高表达芳烷脘N-乙酰转移酶（AANAT），这是必要的褪黑激素合成。不幸的是，如果松果体污染过程中发生MAV夹层，MAV 液氧在水平将不能够被精确地确定。皮质组织的MAV的污染会导致神经元特异性基因，如hippocalcin（HPCA），小白蛋白（Pvalb）和/或神经元五聚的受体（Nptxr）中高表达。下丘脑组织的MAV污染会导致在高表达的生长激素1（GH1），阿黑皮素原（POMC）。事件，确实存在一定的污染，在收获组织，大部分这些基因可以被识别，而不是用在基因表达分析。这是特别重要的基因，存在于循环BLO外径，MAV或脉络膜丛的可能仍然存在。

影视之收获MAV和脉络丛的基因表达数据

血管以及与相关的脑膜（MAV）和脉络丛的脑表面（表面）是必要的大脑血液流量和脑脊髓液（CSF）的动态平衡^{4,11，12，13，14，15，16，17。}该组织的收获是适合生理和生化分析，MAV已被证明是敏感的损坏生产的安非他明和热疗^1,2通过基因表达分析。这些结果是相称的，也被称为严重的高热和安非他明的脑血管一般^18,19,20曝光。人体临床数据支持的信念，硬膜下血管容易损坏的安非他明和甲基安非他明^21,22。同时，主要和次要的的脑vasculatures含ING在软脑膜层的脑膜，MAV的收获是潜在的高利率调查震荡的头部外伤^{23,24 25}时。目前的基因的表达谱产生的MAV表示，可能是软脑膜和蛛网膜脑脊膜膜可能会发挥更大的作用比预期的调节CSF组成。在未来，通过解剖显微镜技术的使用，它可以是可能的，以进一步分离的组织，包括使得软脑膜和蛛网膜膜可以从较大的​​动脉血管本分离，并可能从每个其他的MAV。这将使更好的诠释了这3个组成部分的收获MAV的功能。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
的试剂/设备名称	公司	目录编号	评论（可选）
生理盐水（盐水/9克，1升H 2 O）	在内部		解剖缓冲
0.1 M磷酸钠pH值7.4	在内部		解剖缓冲
骨咬骨钳	Roboz	RS-8300	去除颅骨
钳弯尖（4“长，0.8毫米宽的尖）	Roboz	RS-5135或RS-5137	解剖钳
钳直头（5.5“）	Roboz	RS-8124或RS-8104	拇指敷料钳