非侵入性的评估微血管和内皮功能

摘要

毛细管显微镜是一种非侵入性的，相对廉价的直接可视化的微循环的方法。前臂血流技术提供接受血管内皮功能的非侵入性的措施。

摘要

作者们利用甲襞微循环和前臂血流技术调查的微血管功能障碍在心血管疾病的发病机制中的作用。毛细管显微镜是一种非侵入性的，相对廉价的直接可视化的微循环的方法。毛细管招聘百分比评估，将毛细血管密度的增加引起的闭塞后反应性充血（闭塞后反应性充血毛细血管密度减去基线毛细血管密度），最大毛细血管密度（被动静脉阻塞的过程中观察到的）。百分比灌注毛细血管代表所有的毛细血管目前，灌注功能活跃，比​​例的计算方法是将闭塞后反应性充血的毛细血管密度最大的毛细血管密度。两者％的毛细管招聘和百分之灌注毛细血管反映毛细血管功能。前臂血流（FBF）技术公关ovides接受血管内皮功能的非侵入性的措施：该比率FBF _最高 / FBF _碱作为血管舒张的估计值，计算除以四个FBF由四个FBF _基值的平均值的_最大值的平均值。前臂血管阻力最大的血管扩张（FVR _最大值 ）计算的平均动脉压（MAP）除以FBF _最大 。甲襞微循环和前臂技术，易于接受的患者，可以学得很快。

的微血管和内皮细胞的功能，使用本文介绍的方法可能有未来效用在临床病人的心血管疾病的危险减贫战略措施。正如我们所发表的报告表明，微血管和内皮功能障碍被发现在初始阶段包括高血压前期，高血压，血管和内皮细胞功能的措施最终可能会有助于早期识别，终末期血管病变的危险分层和预防，其潜在的致命后果。

研究方案

病例报告 （如适用）：不适用，这仍然是一个实验的研究过程，尚未应用于临床。

诊断，评估和计划 （必填，如果适用）：不适用，这仍然是一个实验的研究过程，尚未应用于临床。

过程 （必填）：这部分应包括有关程序一步一步的描述，下面的指导方针。

1。毛细管显微镜（ 图1）

1. 我们的甲襞微循环技术被改编从Serne和他的同事们^1。在此过程中的排除标准是胶原血管疾病，，因为胶原血管疾病称为毛细管变化。
2. 至少10小时通宵速度快，20分钟层次的休息，微血管的测量进行了一个半小时，在7上午11时，在一个安静的温控室（保持在21.5-22.5°C之间），在心脏水平的坐姿，左手的主题。
3. 甲襞毛细血管中的第三个手指背皮肤是采用体视显微镜（奥林巴斯中心谷，PA），与4万像素的的SPOT洞察单色数码相机（型号IN-1400：诊断仪器;斯特林高地，MI），和一台笔记本电脑（戴尔Latitude D600戴尔奥斯汀，德克萨斯州）。要限制运动，左手和前臂松散地覆盖有一个折叠的毯子，并搁在显微镜的基础上定位在另一个折起的毯子。
4. 甲床照明是实现一个250-W卤素光纤光纤灯（KL 2500LCD：肖特-Fostec艾姆斯佛德，纽约）;额外照明的补充150W光纤光缆卤素光源（B＆B显微镜有限公司，Warrendale，PA）的使用在深色个人。
5. 可视化的毛细血管，使用3.2倍物镜​​（奥林巴斯3.2/0.07）与系统总放大倍数为38.4x。
6. 使用相同的标准SPOT软件功能（拉伸光明和黑暗的水平），以最大限度地提高知名度的毛细血管，在所有科目使用SPOT成像相机随附的软件在毛细管的照片，光/暗对比度增强。
7. 量化毛细血管密度，数字显微照片，每3-5秒在每个分三个阶段，在休息的基线，在闭塞后反应性充血，并在静脉闭塞。 （一）在休息基线，显微检测毛细血管灌注在休息三分钟的时间内，被接管。 （b）在闭塞后反应性充血，显微采取量化功能灌注的毛细血管（基线加上储备毛细血管），如下所示。首先，左上臂的遮挡扎口膨胀收缩压为10分钟以上至40毫米汞柱。显微照片，然后在第E首先分钟后立即释放所有功能灌注的毛细血管动脉闭塞，可视化。反应性充血的毛细血管密度显示功能受损毛细血管招聘，和因此功能稀薄。 （c）在静脉闭塞显微照片采取量化最大的毛细血管密度，其中既包括灌注（活性红血细胞（RBC）的运动）和未注满（充满停滞，非移动的红细胞）毛细血管³如下。经过10分钟的休息后，闭塞后反应性充血过程，手臂袖口膨胀到60毫米汞柱，持续60秒，被动地迫使血液进入所有专利毛细血管目前，在这段时间内采取显微照片。由于毛细血管密度最大，包括所有的毛细血管结构，减少毛细血管密度最大表示结构疏松。
8. 毛细血管密度被定义为每平方密耳的毛细血管的数目limeter甲襞的皮肤，并且被计算为四个测量值的平均值，得到的四个最清晰的图像，至少扭曲运动。在我们的研究中，已被用于毛细管计数的典型值（毛细血管个/ mm ^2）55-80为基线，65-90的局部缺血后，和90-105静脉闭塞。 ％毛细管征聘的值通常是在5％和25％（平均〜10-15％）之间，和％灌注毛细管之间的70％和95％（意思〜80-90％），其值较低，比正常血压的高血压。三个观察员进行独立评估的10个不同主题的照片（ 图2）手动计数过程的重现性得到了验证。观察员的身份和血压这些科目被蒙蔽。后来独立进行的计数培训，表现出高度认同。平均评分和评分间差异的奥德r的2-3毛细血管/月^2，组内相关系数均大于0.90。短期的甲襞微循环变化的措施的评分和评分间差异的同一量级（约2毛细血管/毫米^2），但观察到2-3年的长期的变化是一个数量级更大的（约15毛细管/毫米^2），表明纵向变化，可以容易地区别于评价者变化。的毛细作用的措施的可靠性也高（组内相关系数为0.84，％的毛细招聘和0.82％的灌注毛细血管）。

9. 调查人员现在利用以计算机为基础的方法量化毛细血管密度使用Image-Pro Plus的成像软件（版本6.2，Media Cybernetics公司，马里兰州贝塞斯达， 图3）。基线，缺血后，和肝静脉之间的Pearson相关我们充血计数完成10个科目的软件和相应的手动计数分别为0.78，0.78和0.71​​（P <0.05），表明两种方法之间的合理的协议。基于计算机的计数的可靠性是略低于手动计数，但仍处于高位（组内相关系数= 0.91为基准，静脉闭塞缺血后0.86和0.84）。我们有未公布的数据也证明了该协会的自动计数与多种心血管危险因素，包括高血压，这是我们目前正在准备出版。

10. 表1总结了毛细血管密度的测定和计算。除以毛细血管密度的增加引起的闭塞后反应性充血（闭塞后反应性充血的毛细血管密度，减去基线毛细血管密度），的毛细血管密度最大的（无源静脉观察毛细管招聘百分比进行评估我们阻塞）。百分比灌注毛细血管代表所有的毛细血管目前，灌注功能活跃，比​​例的计算方法是将闭塞后反应性充血的毛细血管密度最大的毛细血管密度。两者％的毛细管招聘和百分之灌注毛细血管反映毛细血管功能。较低的值对这些措施表示功能的毛细管稀疏。

2。血管内皮功能的评估

1. 血管内皮功能的评估之前和之后闭塞后的反应性充血，使用非侵入性的体积描记法测量前臂的血流量，根据该方法^，4 Sivertsson利用内皮依赖性的刺激诱 ​​导的血管舒张反应性充血。
2. 平卧休息10分钟后，在坐姿的主题，水银的橡胶应变计拉长到10％，超出了它的休息长度的循环around为主体的前臂5厘米以下的肘前窝。
3. 应变计连接到一个体积描记器（EC-4：DE霍坎森公司;贝尔维尤，WA），而这又是连接到多普勒记录（CW-1，DE霍坎森公司; Belleveue，WA）。
4. 上臂闭塞袖口，和手臂被暂停使用吊​​带绷带连接到一个可调节的静脉极舒适心脏水平。收缩压和舒张压血压和心脏率DINAMAP特全公司的100自动BP袖口（GE Healthcare公司，新泽西州Piscataway，）放置在相反的手臂。
5. 儿科袖带膨胀到200毫米汞柱堵塞流的手绕在手腕上。上臂袖带充气至50毫米汞柱，瘪1.5秒，然后迅速重新充气之前每个前臂血流量的测量，通过扩展的应变计对周围的前臂下得到。
6. 前臂血流量（FBF）休息基线（FBF _基地 ）和一个测量吨闭塞后充血引起的最大血管舒张（FBF _最大 ）。对于基线血流量测量，连续四个FBF曲线是在30秒内（FBF _基地 ）。
7. 的遮挡扎口，然后膨胀，收缩压为10分钟以上至40毫米汞柱。释放后动脉闭塞（闭塞后反应性充血），在第一个30秒的流量（FBF _最大 ）四个连续的的FBF曲线获得。
8. 计算的比率FBF _最高 / FBF _碱作为血管舒张的估计值，由四个FBF _基值的平均值除以四个FBF _max值的平均值^。5前臂血管阻力在最大血管舒张（FVR _最大 ）被计算为平均动脉压（MAP）除以FBF _最大 。 ：FBF _最大反应性充血时被直接有关FBF最大输注动脉内乙酰胆碱后，内皮依赖性的血管扩张剂^。6 的因此，FBF _max和比FBF _最大 / FBF _基地的被接受的非侵入性的血管内皮功能的措施^。6-8此外，FBF _max和FVR _最大反映电阻动脉的结构变化（增加壁/管腔比）的⁹

结果

在血压正常和高血压个体之间的微血管的外观的差异是显而易见的，通过比较图4和图5。组织良好的行中的血压正常的个体中， 图4示出了典型的网络直毛细血管。相比之下， 图5显示了一个弄乱模式，皱缩，卷曲的毛细血管。

作者有持续的兴趣的微血管功能障碍在心血管疾病的发病机制中的作用。在他们的第一NIH / NHLBI资助?...

讨论

毛细管显微镜（毛细血管显微镜）的毛细管结构是一个非标准的措施。然而，目前有没有为直接毛细管structure.Furthermore评估的标准方法，毛细血管显微镜已被广泛用于直接评价capillarydensity发表的作品^{，12日，13日，10日，11日，14日至18日}在大，越来越多的。此外，我们已经证实了的毛细血管显微镜技术的关联甲襞微循环的研究结果与前臂血流，血管功能的一个行之有效的措施^{，10日，11?...}