有效的人工剔骨方法编写完整的鼠标鼻组织与保存的解剖组织

摘要

摘要

哺乳动物的鼻子是一个多功能的器官，具有复杂的内部结构。鼻腔内衬各种上皮细胞，如嗅觉，呼吸，和鳞状上皮细胞明显不同的解剖位置，形态和功能。在成年小鼠中，与各种颅骨覆盖鼻子，限制了实验获得的内部结构，尤其是在后等为主体的嗅觉上皮细胞（MOE）。在这里，我们描述了一个有效的方法，获得几乎整个完整的鼻腔组织与腌制解剖组织。使用手术工具，在解剖显微镜下，我们依次取出头骨周围鼻腔组织。这个程序可以进行多聚甲醛固定，解剖新鲜，皮肤的鼠标头。去骨整个过程约需20-30分钟，这是明显短于传统化工为主的实验所需时间钙化。此外，我们提出了一个简单的方法来去除气泡被困鼻甲之间，这是获得完整的细水平线或者冠状或矢状切面​​鼻组织准备的关键。鼻组织用我们的方法制备可用于整个装载整个上皮细胞的观察，以及形态，免疫细胞化学，RNA 原位杂交，和生理的研究，尤其是在特定区域的检查和比较，还研究。

引言

哺乳动物鼻腔包含各种类型的组织和器官，服务于不同的功能。鼻腔，使上呼吸道的入口部分，它允许空气流入和流出肺部旅行。吸入的空气通过鼻腔的温度和湿度进行调节^1，以及作为清洁或过滤除去刺激性和毒性的物质和感染性微生物的^2。这两种治疗方法进行鼻上皮及上皮下的组织，包括腺体和血管，是至关重要的保护下呼吸道和肺部。除了它的作用在呼吸和上皮防御，鼻组织也包含外周感觉的嗅觉和三叉神经系统，使空气中的化学物质的检测范围广泛的设备。根据该系统被激活，在鼻子的化学品的感官检测既可以引起感的气味，刺激或疼痛^3,4。

的外周的嗅觉系统是复杂的，由几个解剖分离鼻腔内的嗅觉器官。其中，主要的嗅觉上皮细胞（MOE）是最大的，它构成了约45-52％的鼻上皮细胞在啮齿类动物中⁵和位于后方区域。在腹侧区域中，有一对管状结构被称为犁鼻器^6，坐在沿鼻中隔的每一侧。两个额外的嗅感觉神经元的小分组，称为室间隔器官马塞拉^7,8和在Gruneberg神经节^9，位于沿腹隔垫和背进入区域的鼻腔。这些外周器官中含有神经上皮细胞形态特色鲜明，细胞标记物的表达，和生理功能。他们共同检测成千上万的气味分子与精致的灵敏度^10-12。

除了嗅觉器官，鼻腔内还设有其他感官系统。它是已知的，三 ​​叉神经肽能神经纤维....

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研究方案

1。鼠标鼻子准备

在本研究中，我们使用成人的C57BL / 6背景的小鼠。所有动物护理和程序批准的动物护理和使用委员会（IACUC）美国马里兰大学巴尔的摩县。

1.1获取鼻子从paraformaldahyde固定小鼠

图1。鼠标头骨骨骼的头骨背视图。B：除去下颌骨的头骨与腹面观。从40日龄小鼠头骨。个别骨头的颜色更好的可视化。 点击这里查看大图 。

1. 灌注transcardially解决个别的小鼠日É林， 等。协议^{，（2008）16。}简单地说，小鼠深度麻醉，三溴乙醇（圣阿韦坦250微克/克体重），....

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结果

使用这种方法，可以可靠地获得几乎完全完整的鼻组织图2A示出的图像的成年人鼻试样从多聚甲醛固定磁头。在这个标本，所有四个子嗅觉感官器官，包括教育部，室间隔器官中，Gruneberg节，VNO，都完好无损。此外，呼吸道上皮细胞和上皮下的组织，如腺体和血管，将被保留。我们已经成功地使用此方法，在一些研究中，我们调查形态，分布，神经的神经支配，细胞标记的表达在各专.......

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讨论

在这里，我们展示了一个隔离完好鼠标鼻子的嗅觉和呼吸道组织的顺序取出骨头，同时保留周围组织的一步一步的过程。我们发现，小心骨去除的全部，甚至可以保留最微妙的组织。我们也分享洞察可能修改这项技术，我们在其中分离大脑和鼻子组织共同维护神经连接。这种新方法提供了一个隔离装置，用于在一个单一的免疫组化，RNA 原位杂交，以便进一步处理和生理实验标本的整个嗅觉.......

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dissection
Rongeur, 1.0 mm Jaw width	World Precision Instruments (WPI)	501333
Fine forceps, Dumont 3	WPI	503235
Fine forceps, Dumont 55	WPI	14099
Fine forceps, Dumont AA	Fine Science Tools (FST)	11210-20
Specimen forceps, Serrated	VWR	82027-440
Operating scissors	WPI	501753
Iris scissors, Straight	Miltex	V95-304
Dissection microscope	Olympus	SZ40
[header]
Tissue embedding
Optimum cutting temperature (OCT) compound	Sakura Finetek	4583
Plastic embedding mold	VWR	15160-215
Aspirator vacuum pump	Fisher Scientific	09-960-2
[header]
Section staining
Neutral red	ACROS Organic	CAS 553-24-2	Nuclei staining