无创性气管内插管，以研究小鼠肺的病理生理

摘要

采用了一个模型，模拟肺疾病在人类中的条件是用于研究特定疾病的病理生理学和/或病因和用于开发治疗性干预是至关重要的。在这里，可以直接将外源性材料，以小鼠肺一种无创性气管插管方法。

摘要

采用了一个模型，模拟肺疾病在人类中的条件是用于研究特定疾病的病理生理学和/或病因和用于开发治疗性干预是至关重要的。用基因敲除和转基因衍生物，具有遗传信息的大量在一起的日益普及，小鼠为研究肺部疾病的病理和生理的分子机制最好的车型之一。吸入，鼻内滴注，气管内滴注，并且气管内插管是最广泛使用的技术，由一些研究者来管理感兴趣的材料，以小鼠的肺。有优点和缺点这取决于研究的目标，每一种技术。在这里，可以直接将外源性材料，以小鼠肺一种无创性气管插管方法。这种技术被应用到管理博莱霉素对小鼠肺作为一个模型来研究肺纤维化。</ P>

引言

龙是许多严重的疾病，通常诊断的器官。其中，肺癌是第二大癌症诊断在男性和女性癌症死亡的最常见原因。慢性阻塞性肺疾病，也被称为肺气肿和慢性支气管炎，是一种非常严重的疾病和死亡的美国第三大原因。在2011年，据估计，2590万美国人患有哮喘，其中18岁以下的710万儿童。哮喘是住院治疗的15（美国肺脏协会岁以下的儿童的第三大原因http://www.lung.org ）。为了研究这些大病和其相关机制的病理生理及/或病因，运用精确的模型是符合利益肺部各种材料的方便，非侵入性的管理相结合的关键。小鼠提供最好的车型之一研究因为基因敲除和转基因小鼠和现有遗传信息的大量的日益普及病理及肺部疾病的生理的分子机制。

各种方法已被用于许多研究者在不同的设置，以提供感兴趣的材料，以小鼠的肺，包括吸入，鼻内滴注，气管内灌注和气管插管^1-4。后者程序没有被经常使用，因为它被认为是相当难以执行。本文所述气管插管是一种无创，简便，快速的方法来提供感兴趣的小鼠肺部材料，以研究运送材料对基因表达模式，病理学和/或肺⁵的生理效应。这种技术保证了外源性物料的输送到全肺，不涉及任何生存的手术，因此将likelY通过任何机构动物护理和使用委员会的批准。

研究方案

以下协议描述了一种无创，简便，快捷的方式，将感兴趣的材料，以小鼠肺部。这个程序被批准为美国国家癌症研究所的动物护理和使用委员会。

1。麻醉

1. 首先，用氯胺酮和甲苯噻嗪（100毫克/千克体重到10毫克/千克体重，分别）的混合物麻醉小鼠。这是ACUC推荐麻醉和剂量。有了这个量，老鼠是无意识的，至少约20分钟。
2. 为了防止在麻醉过程中眼睛干燥适用兽医药膏鼠​​标的眼睛。
3. 几分钟后，捏鼠标的脚来检查的意识。一旦确认无意识的，请将鼠标上的插管支架角度在〜60℃，并保持在该位置由在位于支架顶部的小橡皮圈钩住它的上门牙。

2。气管内插管

1. 用棉签轻轻缩回鼠标的舌头一侧。
2. 当使用BioLITE插管照明系统，小心将插管系统，直到喉部被可视化的光纤光导的援助。
3. 一旦会厌及杓状软骨是可视化，插入纤维越过会厌及杓状软骨之间，并提前到导管的适当的长度已插入。

注意：为了获得导管被插入到适当长度，最初使用类似大小的做法小鼠预先（ 图1）测量的嘴和支气管分叉点之间的长度。的长度基本上依赖于鼠标的大小。导管的插入应该停止上述分岔点（约1.5厘米小鼠与约25克体重）。这保证了插管材料将去所有叶。至少50个实践麦克风Ë可能需要进行气管插管，成为精通技术的人（精通意味着插管的成功率是95％以上）。

4. 一旦导管插入时，快速地从导管移除光纤导光，使该动物正常呼吸。当不使用时插管照明系统，直接插入所描述的导管。
5. 添加含有感兴趣的导管材料的解决方案。确保将该溶液加入后立即被吸入到肺部。 50微升的〜25克小鼠体重是经常使用。

3。动物恢复

1. 一旦解决方案被吸入肺部，取下鼠标从支架上，并把它放回原笼。
2. 观察鼠标，直到它开始移动。
3. 一旦证实该小鼠处于良好状态，回到笼子到机架上。

结果

最初，绿色染色溶液用于插管老鼠实践。肺部被插管后立即切除来检查颜色是如何被均匀地分布在肺（ 图2）。这种技术被应用于使用C57BL / 6小鼠来研究博莱霉素诱导的肺纤维化。当小鼠气管内插管与1.2单位/公斤博莱霉素或生理盐水作为对照，并剖检后3周，小鼠博莱霉素诱导的肝纤维化在其整个肺部，通过组织学和增加羟脯氨酸含量（ 图3）的支持。使用20X物镜创建肺部...

讨论

这里描述的气管插管是一个简单的，但优秀的无创性的方法来提供均匀的兴趣材料小鼠肺。此方法允许的给药对肺的生理和/或病理的材料的效果和/或作用的研究。给予该材料可以是内源性分子，如细 ​​胞因子，或外源性物质如外源性化学物质/药物，致癌物质，污染物，过敏原，或导致各种肺部疾病，可能代表一个模型用于研究各种人类疾病的^6-10病毒。这种技术也可以用于在重组腺病...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
KetaVed	Vedco		Ketamine
AnaSed Injection 20 mg	LLOYD		Xylazine
BioLite Stand	Braintree Scientific	RIS100	For mice
BioLite Intubation Illumination System	Braintree Scientific	BIO MI-KIT	For mice
22 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2225CA	For mice below 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.
20 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2025CA	For mice over 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.