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摘要

提出了一种用于无菌和限菌条件下饲养果蝇的方法。飞胚dechorionated在次氯酸钠，无菌转移到无菌的饮食，并在密闭容器中饲养。接种饮食和胚胎与细菌导致限菌协会，和细菌的存在是通过电镀全身果蝇匀浆证实。

摘要

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is a model for understanding microbial interactions with animal hosts, facilitated by approaches to rear large sample sizes of Drosophila under microorganism-free (axenic) conditions, or with defined microbial communities (gnotobiotic). This work outlines a method for collection of Drosophila embryos, hypochlorite dechorionation and sterilization, and transfer to sterile diet. Sterilized embryos are transferred to sterile diet in 50 ml centrifuge tubes, and developing larvae and adults remain free of any exogenous microbes until the vials are opened. Alternatively, flies with a defined microbiota can be reared by inoculating sterile diet and embryos with microbial species of interest. We describe the introduction of 4 bacterial species to establish a representative gnotobiotic microbiota in Drosophila. Finally, we describe approaches for confirming bacterial community composition, including testing if axenic Drosophila remain bacteria-free into adulthood.

引言

大多数动物密切与细菌（'微生物'）从出生到死亡1有关。免费微生物（'无菌'）和微生物相关的（"传统"）的动物的比较表明微生物影响动物健康的各个方面，包括代谢，营养，血管，肝脏，呼吸系统，免疫，内分泌和神经功能2。果蝇果蝇是用于理解许多微生物3,4的存在下这些方法的并为研究对动物健康5,6-菌群影响的关键模式。没有细菌种类存在于每一个个体（"核心"），但醋酸和乳酸杆菌数字都占据主导地位实验室饲养和野生捕捞D的微生物果蝇 。其他Acetobacteraceae（包括Komagataeibacter和葡萄糖酸 ）， 菲尔米cutes（如肠球菌和明串珠菌 ）和肠杆菌科细菌无论是在低丰度经常出现在果蝇中的个人，或不定期出现在高丰度7-12。

果蝇和哺乳动物的微生物是内和跨世代14,19见异思迁。测量微生物相关的特征时，菌群世态炎凉会导致表型的噪音。例如，Acetobacteraceae影响脂质（甘油三酯）存储在果蝇 15-18。如果Acetobacteraceae是比另外19一小瓶的苍蝇更丰富，同基因苍蝇可以有不同的表型20。自1960年代以来，一种用于小鼠14菌群世态炎凉的问题的解决方案已经在实践中，通过引入定义8优势微生物物种社会的乳鼠每一代新产品（改变Schaedler菌群）确保每个小狗暴露于小鼠菌群的同一主要成员。即使当菌群不研究32的主要目标，并设置先例，以确保密钥的微生物在各种实验条件下的存在于微生物群组成这种做法控制。

上定义果蝇营养微生物的影响下，用于导出无菌飞线几个协议已被开发，包括胚胎次氯酸钠dechorionation（无论是衍生从头每一代或通过转移到无菌的饮食的世代保持）和抗生素治疗13。有益处的不同方法，如方便与快捷为抗生素治疗和串行传输，相对于与从头 dechorionation混杂变量（ 例如 ，卵密度，残留污染微生物，脱靶抗生素效果）的更大的控制。不管该方法的准备，出台规定微生物物种对无菌胚胎允许果蝇的文化与自定义（"悉生'）社区。可替代地，模仿使用Schaedler菌群，该社区可以接种到常规的鸡蛋（以下步骤6-7只），以确保在每个小瓶特质影响微生物的存在，并避免菌群反复无常的并发症。在这里，我们描述了协议用 ​​于通过胚胎从头 dechorionation提高无菌和限菌果蝇 ，并确认导入或污染微生物类群的存在。

研究方案

1.细菌培养（开始采摘〜鸡蛋前1周）

  1. 制备改良的MRS 20（MMRS）板和肉汤管（ 表1）。倾20毫升MMRS琼脂到每个百毫米培养皿并冷却/干燥过夜，和5ml MMRS肉汤分为18 mm试管。
  2. 条纹醋pomorum，A. 热带 ， 短乳杆菌 ，和L.植物上MMRS琼脂平板上。孵育醋杆菌在30℃下过夜。通过在密封前用二氧化碳将所述板在密封容器中，并驱孵育乳杆菌厌氧。在30℃下孵育过夜。
    注:L。短菌落可能是不可见的，直到24-48小时。板可贮存于4℃，菌落可以用于长达3周。
  3. dechorionated蛋转移到无菌的饮食（部分5）前两至三天，挑从MMRS板单菌落置于试管CON泰宁MMRS肉汤。成长醋振荡和静态成长乳杆菌 24小时或直至混浊，都在30℃。

2.准备无菌饮食

  1. 在2升Erlenmeyer烧瓶制备无菌饲料（ 见表2）。微波饮食，直到它已煮3顺序倍;每间熬混合英寸
  2. 广场上的轰动板烧瓶保持在传输饮食，锥形离心管中搅拌。转移7.5毫升饮食至50ml离心管中。松散帽管，并放入有盖，高压灭菌聚丙烯架。
  3. 消毒用在121℃的高压釜中，15磅25分钟飞饮食。从反应釜中取出衣架，立刻水平摇晃每个机架，保证饮食冷却过程中不分离。小心不可撼动的机架垂直，以防止食物转移到盖子或管的边缘。允许饮食，在振动台上冷却正好45分钟，再用手水平摇晃饮食。
    注意:饮食可以储存在4-15°C至一个星期。
  4. 作为替代使用覆盖高压灭菌机架（步骤2.1-2.3），或在含有酸防腐剂饮食提高苍蝇，执行以下步骤:
    1. 与在烧瓶中搅拌棒的2L烧瓶中制备1升液体的饮食。高压灭菌饮食。
    2. 高压灭菌后，加入10 mL防腐剂在加热搅拌盘不断搅拌。当琼脂已冷却至50-60℃，将该烧瓶加热至50-60℃移动到加热的搅拌板上在生物安全柜并保持烧瓶的温度。
    3. 在生物安全柜，吸管〜7.5毫升到单独锥形管。

3.准备产蛋笼

  1. 通过微波100ml水中，将10g啤酒酵母，10g的葡萄糖，和1g琼脂使葡萄果汁琼脂平板上。煮沸3次，在步骤1.1，并添加10克冷冻葡萄汁的合作ncentrate加大对琼脂平板鸡蛋的可见性。
  2. 当琼脂已冷却至55℃，倾20毫升入100 25mm培养皿，并允许固化。
  3. 通过混合1克啤酒酵母用15g水覆盖的酵母膏的琼脂平板的表面上。倒入酵母粘贴到琼脂平板上，确保表面覆盖，然后倒出多余的，留下薄薄的酵母残留落后。如果使用多个板，浆料可以顺序倒入到多个板。
  4. 转移琼脂平板成笼的底部。
    注:32盎司熟食容器是丙烯酸飞笼很好的替代品。
    1. 通过切割在顶部的孔并用无毒胶水空穴胶合一个透气网作出32盎司熟食容器盖。如果胶是水溶性防止水接触到盖子。
  5. 转让200-300飞入容器中，并盖上盖子。盖一个空的培养皿的盖子网状保护孔防止措施从琼脂面T蒸发和根据需要添加湿润薄纸在盖的内部。孵育在25℃下过夜苍蝇为16-20小时。

4.收集鸡蛋

  1. 通过将尼龙网到塑料套管准备鸡蛋收集筛子。
  2. 以检索与在其上的蛋的板，通过转移到一个空的容器从笼中移除苍蝇。如果相同蝇将要使用的第二天，立即转移到含有新鲜yeasted葡萄果汁琼脂平板新笼子。果蝇可用于3-5顺序天
  3. 取下琼脂死苍蝇用干净的画笔，小心不要分手琼脂。
  4. 通过用蒸馏水冲洗琼脂平板上，轻轻地从琼脂表面涂刷鸡蛋，并浇在网状浆料收集鸡蛋。重复3-4次，直到所有或​​大部分卵已经从琼脂平板中移除。

5. Dechorionate鸡蛋，并转移到无菌ðIET

  1. 通过用70％乙醇喷雾内（包括边）制备的生物安全柜中。擦拭用实验室组织的底部，并消毒用UV光对〜15分钟的引擎盖。通过用乙醇喷涂和在生物安全柜立即放置消毒所有非生物用品（样品杯，画笔，镊子，废物容器，加入400ml无菌水和100ml 0.6％次氯酸钠）。用UV光杀菌15分钟。
  2. 通过将与鸡蛋衬套到120ml的样品杯或其它无菌容器开始第一次的2次氯酸钠洗涤。慢慢倒入〜90毫升0.6％的次氯酸钠溶液注入衬套直到刚好低于边缘。
  3. 冲洗鸡蛋2.5分钟。通过使用镊子上下在次氯酸盐溶液移动至衬套定期重新悬浮卵。
  4. 直接传输衬套成第二试样杯，预填充用90毫升漂白剂，生物安全柜的内部。
  5. 重复步骤5.3生物安全柜内。在第二漂白处理结束时，鸡蛋应开始粘附到套管的侧面。
  6. 执行步骤在生物安全柜5.7-5.8。
  7. 丢弃漂白，并用无菌水冲洗套管3次。通过移动与钳套管重悬卵每次洗涤过程中数次。由第三洗涤的端部最蛋应连接到套管的侧。
  8. 使用在乙醇灭菌画笔，从套管的侧转移蛋无菌饮食。单独或小批量传输鸡蛋。瞄准每瓶30-50鸡蛋。离开松瓶盖，让氧气进入管。如果小瓶保持无菌，转移到昆虫孵化器;否则，如下补充细菌。

6.进行悉生蝇使用4种细菌

  1. 准备细菌
    1. 准备好必要的用品消毒生物安全柜（Pipettes，枪头盒，灭菌离心管，MRS肉汤，和试管架）如在步骤4.1。擦拭试管的外面用乙醇浸泡过的实验室生物安全柜放置前擦拭。
    2. 通过第一转印500微升过夜生长至无菌微量离心管沉淀细菌。如果细菌密度低，最多1.5毫升添加到每个管或依次除去上清液，加入额外培养到相同的管中。从生物安全柜，离心在10000克10分钟取出样品。使用过滤嘴，以避免样品间污染。
    3. 通过测量OD 600确定每种培养的密度。如果使用多孔板读取器，转移200μl的每种培养到96孔板中的1-，2-，和4-倍稀释液。
    4. 确定MMRS在其中稀释使用平板读数分光光度计每个细胞沉淀（5.2.2）和下列公式的量。计划添加的肉汤接种50＃956; l每个飞瓶。
      1. 收集的OD 600读数为1:1，1:2和1:在平板读数分光光度计4稀释各细菌培养。选择稀释产生0.1和0.2，并使用这个值和相应的稀释因素，因为在6.1.4.2 6.1.4.3或给出的公式'O'和'D'之间的OD值600各种菌株。
      2. 如果使用4种这里描述的，使用此方程正常化细胞等效集落形成单位（CFU）/ ml的密度（OD 600〜CFU转换确定先前20）:
        E =（（OB）x垂直x深）/ C
        其中E =体积重悬在（微升）颗粒，O = OD 600细菌，B = 600 OD空白介质，D =倍稀释，V =微升细菌培养离心前，预定常数C = OD 600。见补充代码文件使用这些公式计算的例子。对于分光光度计S中的自动空白，代替"OB"使用"O"。
        注意:预定常数（单位OD 600，归一化至10 7 CFU毫升-1，在20导出常数）如下:A.热带 （0.052），A。 pomorum（0.038），L。 短 （0.056），L。杆菌 （0.077）。
      3. 如果使用其他的细菌种类（无CFU / OD 600恒定可用），密度正常化使用这个公式OD 600 = 0.1:
        E =（（OB）x垂直x深）/0.1 OD 600
        注:单位中的相同步骤6.1.4.2。见补充代码文件使用这些公式计算的例子。
    5. 在生物安全柜，除去上清液用枪头重悬新鲜MMRS或PBS颗粒作为步骤6.1.4.2计算。
  2. 细菌接种
    1. 转移50微升细菌到锥形管中，用无菌饮食的d。在生物安全柜dechorionated鸡蛋。加入鸡蛋的细菌转移后，以防止小瓶间污染。
    2. 放置接种管在培养箱中在25℃

对于无菌7.测量负荷CFU /测试

  1. 为了测量整个身体飞匀浆，转移5苍蝇（5-7天后羽化）含有的陶瓷珠125微升和125微升MMRS肉汤1.7 ml离心管中CFU负荷。以4.0米/秒均化使用30秒的组织匀浆苍蝇。
    1. 或者，省略珠和手在微量离心管均质用塑料杵1分钟。
    2. 如果量化肠道菌群，表面消毒苍蝇删除外源性微生物22。转印蝇至含有100μl的70％乙醇1分钟，吸出乙醇，并转移到为homogenizations一个新的离心管离心管。如果肠的DNA含量进行测定，漂洗˚F或1分钟用乙醇洗涤前0.6％次氯酸钠。
  2. 稀释用875微升MMRS，涡旋5秒匀浆，和吸管120微升匀浆到微量滴定板的第一井。
  3. 执行两个连续的1:8使用10微升匀浆和70微升MRS在接下来的两个井稀释。
    1. 从第一井去除10微升，并将其添加到第二阱含有70微升的MRS。调匀第二阱中的内容，传输从第二井10微升到第三孔含有70微升的MRS，调匀。这导致3总浓度原始1000微升匀浆:未稀释的，1:8，和1:64。
  4. 转移10微升每种稀释到MMRS板（如果需要使用多通道移液管）。略微倾斜的菜扩散稀释几毫米下来琼脂表面，并允许液体移动板之前干燥。液体晒干日e盘若快速板2天，减少了两个相邻液滴混合。
  5. 孵育在30℃下1-2天。从培养箱一次不同，单个菌落是可见的除去板，以及从与10-100分离的菌落稀释计数。
  6. 用公式:E = C x深/ P X [V / F，其中每飞E = CFU，C =计数的菌落数，D =稀释，P =微升镀金，V =掺量匀浆计算每飞CFU和F =匀浆蝇数。

结果

无菌蝇饲养成功是没有从D的全身homogenizations CFU的隔离证实果蝇成虫（ 图1）。或者，如果镀覆匀浆得到的菌落，小瓶被污染并应该被丢弃。为限菌苍蝇，四个细菌菌株是从5成年男性池隔离，以表明其与成蝇（ 图1）相关联的总活菌的CFU的差异。每个细菌物种具有不同的形态，并可以在视觉上加以区分（ 图2）。如果没有?...

讨论

此处所描述的方法是几种方法用于胚胎dechorionation 8,11,18,25,26,27之一，饲养无菌蝇，包括无菌的成年人18,27的串行传输或抗生素治疗13,18的替代方法在一起。其他dechorionation方法包括乙醇洗涤，减少11,25,26或延长8次氯酸盐治疗。不同的洗涤步骤可以帮助饲养不同蝇基因型:在先前的研究中最〜的饲养时如这里概述（无乙醇洗涤）100 果蝇基因型无菌的...

披露声明

作者什么都没有透露。

致谢

该协议的一些细节与亚当博士布森，谁也对稿件提供了有益的意见的协助下进行了优化。这项工作是由该基金会为美国国立卫生研究院的支持（FNIH）授权号R01GM095372（JMC，A（CN）W，AJD和AED）。 FNIH授权号码1F32GM099374-01（PDN），和杨百翰大学的启动资金（江铃汽车，MLK，MV）。出版费用由生命科学杨百翰大学学院和植物和野生动物科学系的支持。

材料

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Brewer's YeastMP Biomedicals, LLC.903312http://www.mpbio.com/product.php?pid=02903312
GlucoseSigma Aldrich158968-3KGhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/158968?lang=en&region=US
AgarFisher--Lab Scientificfly802010https://www.fishersci.com/shop/products/drosophila-agar-8-100mesh-10kg/nc9349177
Welch's 100% Grape Juice ConcentrateWalmart or other grocery store9116196http://www.walmart.com/ip/Welch-s-Frozen-100-Grape-Juice-Concentrate-11.5-oz/10804406
Cage: 32 oz. Translucent Round Deli ContainerWebstaurant Store999L5032Yhttp://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-sd5032y-32-oz-translucent-round-deli-container-24-pack/999L5032Y.html
Translucent Round Deli Container LidWebstaurant Store999YNL500http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-ynl500-translucent-round-deli-container-lid-60-pack/999YNL500.html
Stock BottlesGenesee Scientific32-130https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=32-130
Droso-PlugsGenesee Scientific49-101https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=49-101
Nylon MeshGenesee Scientific57-102 https://geneseesci.com/shop-online/product-details/715/?product=57-102
Plastic BushingHome Depot100404002http://www.homedepot.com/p/Carlon-1-in-Non-Metallic-Terminal-Adapter-E943FR-CTN/100404002
Plastic Bushing CapHome Depot100153897http://www.homedepot.com/p/1-1-4- in-Rigid-Plastic-Insulated-Bushing-2-Pack-27529/100153897
Specimen CupMedSupply PartnersK01-207067http://www.medsupplypartners.com/covidien-specimen-containers.html
Repeater M4Eppendorf4982000322https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Manual-Liquid-Handling-44563/Dispensers--Burettes-44566/Repeater-M4-PF-44619.html
50 ml Centrifuge TubesTrueLine Centrifuge TubesTR2003https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=TR2003
Food BoxesUSA Scientific2316-5001http://www.usascientific.com/search.aspx?find=2316-5001
Lysing Matrix D BulkMP Biomedicals, LLC.116540434http://www.mpbio.com/search.php?q=6540-434&s=Search
Filter Pipette Tips, 300 μlUSA Scientific1120-9810http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1120-9810
Petri DishesLaboratory Product SalesM089303https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=M089303
EthanolDecon Laboratories, INC.2701http://www.deconlabs.com/products.php?ID=88
PaintbrushWalmart5133http://www.walmart.com/ip/Chenille-Kraft-5133-Acrylic-Handled-Brush-Set-Assorted-Sizes-colors-8-Brushes-set/41446005
ForcepsFisher08-882https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-medium-pointed-forceps-3/p-128693
Household Bleach (6-8% Hypochlorite)Walmart550646751http://www.walmart.com/ip/Clorox-Concentrated-Regular-Bleach-121-fl-oz/21618295
Universal PeptoneGenesee Scientific20-260https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=20-260
Yeast Extract Fisher ScientificBP1422-500https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-bioreagents-microbiology-media-additives-yeast-extract-3/bp1422500?matchedCatNo=BP1422500
Dipotassium PhosphateSigma AldrichP3786-1KGhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=P3786-1KG&interface=All&
N=0&mode=match%20partialmax&lang=
en&region=US&focus=product
Ammonium CitrateSigma Aldrich25102-500ghttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=25102-500g&interface=All&N
=0&mode=match%20partialmax&lang=
en&region=US&focus=product
Sodium AcetateVWR97061-994https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=97061-994
Magnesium SulfateFisher ScientificM63-500https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?matchedCatNo=M63500
Manganese SulfateSigma Aldrich10034-96-5http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=10034-96-5&interface=CAS%20No.&N=0&mode=match
%20partialmax&lang=en&region
=US&focus=product
MRS PowderSigma Aldrich69966-500Ghttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/69966?lang=en&region=US
96 Well Plate ReaderBioTek (Epoch) NAhttp://www.biotek.com/products/microplate_detection/epoch_microplate_
spectrophotometer.html
1.7 ml Centrifuge TubesUSA Scientific1615-5500http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1615-5500
Filter Pipette Tips, 1,000 μlUSA Scientific1122-1830http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1122-1830
96 Well PlatesGreiner Bio-One655101https://shop.gbo.com/en/usa/articles/catalogue/article/0110_0040_0120_0010/
13243/
Ceramic BeadsMP Biomedicals, LLC.6540-434http://www.mpbio.com/product.php?pid=116540434
Tissue HomogenizerMP Biomedicals, LLC.116004500http://www.mpbio.com/product.php?pid=116004500
Class 1 BioSafety CabinetThermo Scientific Model 1395http://www.thermoscientific.com/en/product/1300-series-class-ii-type-a2-biological-safety-cabinet-packages.html

参考文献

  1. McFall-Ngai, M. J. Giving microbes their due--animal life in a microbially dominant world. J Exp Biol. 218, 1968-1973 (2015).
  2. Smith, K., McCoy, K. D., Macpherson, A. J. Use of axenic animals in studying the adaptation of mammals to their commensal intestinal microbiota. Semin Immunol. 19 (2), 59-69 (2007).
  3. Rieder, L. E., Larschan, E. N. Wisdom from the fly. Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).
  4. Arias, A. M. Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century. Methods Mol Biol. 420, 1-25 (2008).
  5. Lee, W. J., Brey, P. T. How microbiomes influence metazoan development: insights from history and Drosophila modeling of gut-microbe interactions. Annu Rev Cell Dev Biol. 29, 571-592 (2013).
  6. Erkosar, B., Leulier, F. Transient adult microbiota, gut homeostasis and longevity: novel insights from the Drosophila model. FEBS Lett. 588 (22), 4250-4257 (2014).
  7. Chandler, J. A., Lang, J. M., Bhatnagar, S., Eisen, J. A., Kopp, A. Bacterial communities of diverse Drosophila species: ecological context of a host-microbe model system. PLoS Genet. 7 (9), e1002272 (2011).
  8. Broderick, N. A., Buchon, N., Lemaitre, B. Microbiota-induced changes in drosophila melanogaster host gene expression and gut morphology. MBio. 5 (3), 01117 (2014).
  9. Wong, C. N., Ng, P., Douglas, A. E. Low-diversity bacterial community in the gut of the fruitfly Drosophila melanogaster. Environ Microbiol. 13 (7), 1889-1900 (2011).
  10. Staubach, F., Baines, J. F., Kunzel, S., Bik, E. M., Petrov, D. A. Host species and environmental effects on bacterial communities associated with Drosophila in the laboratory and in the natural environment. PLoS One. 8 (8), e70749 (2013).
  11. Brummel, T., Ching, A., Seroude, L., Simon, A. F., Benzer, S. Drosophila lifespan enhancement by exogenous bacteria. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (35), 12974-12979 (2004).
  12. Cox, C. R., Gilmore, M. S. Native microbial colonization of Drosophila melanogaster and its use as a model of Enterococcus faecalis pathogenesis. Infect Immun. 75 (4), 1565-1576 (2007).
  13. Ridley, E. V., Wong, A. C., Douglas, A. E. Microbe-dependent and nonspecific effects of procedures to eliminate the resident microbiota from Drosophila melanogaster. Appl Environ Microbiol. 79 (10), 3209-3214 (2013).
  14. Rogers, G. B., et al. Functional divergence in gastrointestinal microbiota in physically-separated genetically identical mice. Sci Rep. 4, 5437 (2014).
  15. Chaston, J. M., Newell, P. D., Douglas, A. E. Metagenome-wide association of microbial determinants of host phenotype in Drosophila melanogaster. MBio. 5 (5), 01631-01714 (2014).
  16. Huang, J. H., Douglas, A. E. Consumption of dietary sugar by gut bacteria determines Drosophila lipid content. Biology Letters. , (2015).
  17. Shin, S. C., et al. Drosophila microbiome modulates host developmental and metabolic homeostasis via insulin signaling. Science. 334 (6056), 670-674 (2011).
  18. Storelli, G., et al. Lactobacillus plantarum promotes Drosophila systemic growth by modulating hormonal signals through TOR-dependent nutrient sensing. Cell Metab. 14 (3), 403-414 (2011).
  19. Wong, A. C., Chaston, J. M., Douglas, A. E. The inconstant gut microbiota of Drosophila species revealed by 16S rRNA gene analysis. ISME J. 7 (10), 1922-1932 (2013).
  20. Newell, P. D., Douglas, A. E. Interspecies interactions determine the impact of the gut microbiota on nutrient allocation in Drosophila melanogaster. Appl Environ Microbiol. 80 (2), 788-796 (2014).
  21. Broderick, N. A., Lemaitre, B. Gut-associated microbes of Drosophila melanogaster. Gut Microbes. 3 (4), 307-321 (2012).
  22. Ren, C., Webster, P., Finkel, S. E., Tower, J. Increased internal and external bacterial load during Drosophila aging without life-span trade-off. Cell Metab. 6 (2), 144-152 (2007).
  23. Wong, A. C., et al. The Host as the Driver of the Microbiota in the Gut and External Environment of Drosophila melanogaster. Appl Environ Microbiol. 81 (18), 6232-6240 (2015).
  24. Dobson, A. J., et al. Host genetic determinants of microbiota-dependent nutrition revealed by genome-wide analysis of Drosophila melanogaster. Nat Commun. 6, 6312 (2015).
  25. Bakula, M. The persistence of a microbial flora during postembryogenesis of Drosophila melanogaster. J Invertebr Pathol. 14 (3), 365-374 (1969).
  26. Ryu, J. H., et al. Innate immune homeostasis by the homeobox gene caudal and commensal-gut mutualism in Drosophila. Science. 319 (5864), 777-782 (2008).
  27. Blum, J. E., Fischer, C. N., Miles, J., Handelsman, J. Frequent replenishment sustains the beneficial microbiome of Drosophila melanogaster. MBio. 4 (6), 00860 (2013).
  28. Bitner-Mathe, B. C., Klaczko, L. B. Plasticity of Drosophila melanogaster wing morphology: effects of sex, temperature and density. Genetica. 105 (2), 203-210 (1999).
  29. Edward, D. A., Chapman, T. Sex-specific effects of developmental environment on reproductive trait expression in Drosophila melanogaster. Ecol Evol. 2 (7), 1362-1370 (2012).
  30. Ridley, E. V., Wong, A. C., Westmiller, S., Douglas, A. E. Impact of the resident microbiota on the nutritional phenotype of Drosophila melanogaster. PLoS One. 7 (5), e36765 (2012).
  31. Newell, P. D., et al. In vivo function and comparative genomic analyses of the Drosophila gut microbiota identify candidate symbiosis factors. Front Microbiol. 5, 576 (2014).
  32. Dewhirst, F. E., et al. Phylogeny of the defined murine microbiota: altered Schaedler flora. Appl Environ Microbiol. 65 (8), 3287-3292 (1999).
  33. Min, K. T., Benzer, S. Wolbachia, normally a symbiont of Drosophila, can be virulent, causing degeneration and early death. Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (20), 10792-10796 (1997).

Erratum


Formal Correction: Erratum: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions
Posted by JoVE Editors on 8/18/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions. The Protocol was updated.

Step 6.1.4.2 of the Protocol was updated from:

If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation:
E = ((O-B) x V x D)/C
where E = volume to resuspend pellet in (μl), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = µl bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use "O" in place of "O-B".
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.056), L. plantarum (0.077).

to:

If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation:
E = ((O-B) x V x D)/C
where E = volume to resuspend pellet in (μl), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = µl bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use "O" in place of "O-B".
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.053), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.077), L. plantarum (0.056).

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