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Method Article
Multilayer microfluidic devices often involve the fabrication of master molds with complex geometries for functionality. This article presents a complete protocol for multi-step photolithography with valves and variable height features tunable to any application. As a demonstration, we fabricate a microfluidic droplet generator capable of producing hydrogel beads.
Microfluidic systems have enabled powerful new approaches to high-throughput biochemical and biological analysis. However, there remains a barrier to entry for non-specialists who would benefit greatly from the ability to develop their own microfluidic devices to address research questions. Particularly lacking has been the open dissemination of protocols related to photolithography, a key step in the development of a replica mold for the manufacture of polydimethylsiloxane (PDMS) devices. While the fabrication of single height silicon masters has been explored extensively in literature, fabrication steps for more complicated photolithography features necessary for many interesting device functionalities (such as feature rounding to make valve structures, multi-height single-mold patterning, or high aspect ratio definition) are often not explicitly outlined.
Here, we provide a complete protocol for making multilayer microfluidic devices with valves and complex multi-height geometries, tunable for any application. These fabrication procedures are presented in the context of a microfluidic hydrogel bead synthesizer and demonstrate the production of droplets containing polyethylene glycol (PEG diacrylate) and a photoinitiator that can be polymerized into solid beads. This protocol and accompanying discussion provide a foundation of design principles and fabrication methods that enables development of a wide variety of microfluidic devices. The details included here should allow non-specialists to design and fabricate novel devices, thereby bringing a host of recently developed technologies to their most exciting applications in biological laboratories.
在过去的15年里,微流体作为一个领域经历了快速的增长,随着新技术使流体的操控在微米尺度1的爆炸。微流体系统是湿实验室功能吸引力平台,因为小的体积必须实现更快的速度和灵敏度的潜力,而在同一时间急剧增加的吞吐量和通过利用比例2,3的经济降低成本。多层微流体系统已在高通量生化分析应用中尤其显著的影响,如单细胞分析4,5,6,单分子分析( 例如,数字PCR 7),蛋白质晶体8,转录因子结合测定F"> 9,10,和细胞筛选11。
微流体的一个核心目标是能够在单个设备中执行复杂的流体操作总生化分析12设备"芯片上的实验室"的发展。的多层软光刻技术的发展已帮助实现通过使芯片上阀,混合器的创作这一目标,和泵小体积13,14,15内主动地控制流体。尽管他们的优势和应用证明,许多微流体技术仍然由非专业的用户主要是unharnessed。广泛采用已经在部分具有挑战性,由于难以获得微细加工设施,也由于制造技术沟通不足。这是FO更是如此- [R多层微流体装置设有阀门或复杂的几何结构:关于重要的设计参数和制造技术的详细,实用的信息的缺乏往往在开始涉及这些设备的设计和创作项目阻止新的研究人员。
本文旨在通过展示制作多层微流体装置与阀和高度可变的特点,从设计参数,并开始通过各种制造步骤移动一个完整的协议,以解决这方面的知识差距。通过专注于制造的最初的光刻工序,该协议其他补充协议的微流控芯片16,描述从模具铸造设备和运行具体实验下游步骤。
与单片芯片上阀的微流体设备是由两层组成:一个"流"层,其中,所关注的流体在微操纵通道,和一个"控制"层,其中含有空气或水的微通道可以选择性地调节在流动层14的流体流动。这两层分别制造在一个单独的硅成型的主人,其随后在称为方法用于聚二甲基硅氧烷(PDMS)复制品成型"软光刻17"。以形成多层器件中,每个的PDMS层都浇铸在它们各自的成型主人,然后对准彼此,从而形成具有在每一层信道的复合PDMS设备。在那里流和控制信道彼此交叉并仅通过一个薄膜被分开的位置形成阀门;控制信道的加压挠曲该膜以阻塞流动通道,并在本地移动所述流体( 图1)。
活性片上阀可以以多种方式来制造,这取决于所需的最终应用。阀门可以在任何一个"下推"或"推"几何构造,这取决于控制层是否高于或流层的下方( 图1)15。 "向上推"的几何形状允许较低关闭压力和防止脱层更高的器件稳定性,而"下推"几何结构允许流动通道是在与键合衬底直接接触,赋予基板表面的选择性官能化或图案化的优点供以后功能18,19。
阀也可以是故意泄漏"筛子"阀或完全密封的,这取决于流动通道的横截面轮廓。筛阀门是用于捕获珠,细胞或其它macroanalytes 1是有用的,并通过使用典型的负光致抗蚀剂( 即,SU-8系列),其公顷被制造已经矩形轮廓。当一个控制信道被加压超过这些阀的区域中,控制和流层之间的PDMS膜各向同性偏转到阀的矩形轮廓,而不密封所述角落,允许流体流动,但是捕集宏观尺度颗粒( 图1)。相反,完全密封的微流体阀由包括阀位置的圆形光致抗蚀剂的一小片制成。与此几何,控制信道的加压偏转膜对圆形流层以完全密封通道,停止流体流动。在流动层圆形轮廓通过典型的光刻步骤后熔化和正性光刻胶( 例如,AZ50 XT或SPR 220)的回流产生的。之前我们已经证实,阀地区的回流焊后高度取决于所选特征尺寸21。此协议演示了这两种阀的几何形状与制造在一个胎圈合成装置。
图1:多层微流体阀的几何形状。为筛典型的"推"器件结构和前(上)和后(底)加压完全密封的阀。 请点击此处查看该图的放大版本。
设备也可以包括复杂的被动功能,例如混沌混合器13和片上需要一个单一的流动层内的多个不同高度的特征电阻20。实现可变高度流动层,不同的组已经采用许多方法,包括印刷电路板蚀刻22,多层的PDMS浮雕对准23,或多工序Photolithography 24。我们小组发现在单个模制主多步光刻是一种有效的和可再现的方法。要做到这一点,采用建设层负性光刻胶(例如 SU-8系列光刻胶)厚渠道没有发展的每一层的应用程序之间的一个简单的光刻技术。每一层是根据在硅基主其使用厚度制造商的说明25在负光致抗蚀剂纺丝。这种高度的特征然后被图案化到用固定到玻璃掩膜板和对准曝光之前的先前纺丝层的特定透明掩模( 图2)的层。在多步光刻,各层之间的精确对准是在形成完整的可变高度流动通道的关键。对准之后,各层经受依赖厚度曝光后烘烤。没有发展,下一层是卡ilarly图案。以这种方式,高大特征可以通过使用多个掩模来建立一个单一的流动晶片上层 - 层。跳过每个步骤之间的发展,以前光致抗蚀剂层可以被用于产生复合高度特征( 即两个25微米的层可以使一个50微米的功能)24。此外,通道地面的功能,如乱搅拌机字槽13可使用与先前曝光的功能层进行。最后显影步骤结束处理,创建具有可变高度( 图3)的功能的单个流晶片。
这里,提供了一种用于多步光刻完整的协议,其中包括的必要制造芯片上阀和具有多个高度流动通道的所有过程的例子。该制造协议在多层微流体珠合成需要阀门和variab的上下文中提出的乐高为特点的功能。该装置包括T连接在油鞘生成水滴,片电阻通过控制泊肃性,混沌混合器均化液滴组件以调节流速,并且两个完全密封和筛阀,以使涉及多个试剂自动化工作流输入。使用多步光刻,这些特征各自不同的层上,根据高度或光致抗蚀剂制成;下面层在这个协议来构建:(1)流量圆形阀层(55微米,AZ50 XT)(2)流动的低层(55微米,SU-8 2050)(3)流动的高层(85微米,SU- 8 2025年,30微米添加剂高度),和(4)人字槽(125微米,SU-8 2025年,40微米添加剂高度)( 图3)。
水凝胶珠可被用于各种应用,包括选择表面官能用于下游分析,药物包封,拉迪otracing和成像测定法,和细胞掺入;我们以前使用的这些装置的更加复杂的版本以产生含有镧系纳米发光材料20光谱方面经编码的PEG水凝胶珠。这里讨论的设计都包含在其他资源任何实验室在他们的研究工作如果需要使用。我们预计,该协议将提供专家和非专家在制造多层微流体装置阀门或复杂的几何形状,以降低壁垒微流体进入和提高制造成功的机会都感兴趣的一个开放的资源。
1.多层器件设计
注:不同的高度和/或光致抗蚀剂的特性必须按顺序在晶片中不同的制造步骤来创建最终复合功能被加入。因此,被包括为每个单独的高度和光致抗蚀剂图案在晶片必须在其自身的掩模( 图4)进行打印。
表1:设计参数与建议。设计考虑在微流体装置的CAD设计过程中避免常见的陷阱。 请点击这里查看此表。 (右键点击下载)。
2.准备一个晶圆光刻
注意:这些步骤还出现在表格式见表2。
制造圆形阀门
3.编造在串联可变高度功能
4.控制晶圆制造
5.硅烷晶圆处理,便于PDMS电梯-OFF
6. PDMS副本成型
7.从生产水凝胶液滴的珠
这里,我们通过使能够从液滴生成的聚乙二醇(PEG)水凝胶珠的设备展示阀,可变高度的多层微流体模具的制造 ( 图2)。完整的制造过程的概要包括在图3.使用从以前的工作的设计元素,珠合成采用4的高度在其流动层包括:(1)倒圆为层流调制(55微米)(2)流动AZ50 XT阀低信道为在较高电阻(55微米)将试剂(3)流动高通道在到出...
这项工作表明用于与阀和可变高度的几何形状的多层微流体装置可被调整为具有简单的修改根据我们的在线工具26和制造商的说明书25工艺参数的任何应用程序的完整多步光刻协议。该协议旨在神秘面纱多层光刻为希望构建微流体器件超越了简单的,被动层模具的研究人员。
多层微流体装置使单个软聚合物装置中追求先进功能的应用范围从?...
The authors declare that they have no competing financial interests.
The authors thank Scott Longwell for helpful comments and edits to the manuscript and Robert Puccinelli for device photography. The authors acknowledge generous support from a Beckman Institute Technology Development Grant. K.B. is supported by a NSF GFRP fellowship and the TLI component of the Stanford Clinical and Translational Science Award to Spectrum (NIH TL1 TR 001084); P.F. acknowledges a McCormick and Gabilan Faculty Fellowship.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Materials | |||
Mylar Transparency Masks, 5" | FineLine Plotting | ||
5" Quartz Plates | United Silica | Custom | |
4" Silicon Wafers, Test Grade | University Wafer | 452 | |
SU8 2005, 2025, 2050 photoresist | Microchem | Y111045, Y111069, Y111072 | |
Az50XT | Integrated Micromaterials | AZ50XT-Q | |
SU8 Developer | Microchem | Y020100 | |
AZ400K 1:3 Developer | Integrated Micromaterials | AZ400K1:3-CS | |
Pyrex 150 mm glass dish | Sigma-Aldrich | CLS3140150-1EA | |
Wafer Petri Dishes, 150 mm | VWR | 25384-326 | |
Wafer Tweezers | Electron Microscopy Sciences (EMS) | 78410-2W | |
Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane (PFOTS) | Sigma-Aldrich | 448931-10G | |
2" x 3" glass slides | Thomas Scientific | 6686K20 | |
RTV 615 elastomeric base and curing agent PDMS set | Momentive | RTV615-1P | |
Tygon Tubing, 0.02" O.D. | Fischer Scientific | 14-171-284 | |
Capillary PEEK tubing, 510 μm OD, 125 μm ID | Zeus | Custom | 360 μm PEEK is readily available by Idex (catalog number: 1571) |
Cyro 4 ml tube | Greiner Bio-One | 127279 | |
Epoxy, 30 min | Permatex | 84107 | |
Metal Pins, 0.025" OD, .013" ID | New England Small Tube | NE-1310-02 | |
Poly(ethylene glycol) diacrylate, Mn 700 | Sigma-Aldrich | 455008-100ML | |
Lithium Phenyl(2,4,6-trimethylbenzoyl)phosphinate photoinitator | Tokyo Chemical Industry Co. | L0290 | We typically synthesize LAP in-house. |
HEPES | Sigma-Aldrich | H4034-25G | |
Light mineral oil | Sigma-Aldrich | 330779-1L | |
Span-80 | Sigma-Aldrich | 85548 | |
ABIL EM 90 | UPI Chem | 420095 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | Equivalent equiptment or homebuilt setups will work equally as well | ||
Mask Aligner | Karl Suss | MA6 | |
Profilometer | KLA-Tencor | Alpha-Step D500 | |
Spin Coater | Laurell Technologies | WS-650-23 | Any spincoater can be used that accepts 100 mm wafers |
Vacuum Dessicator, Bell-Jar Style | Bel-Art | 420100000 | |
Oven | Cole-Palmer | WU-52120-02 | |
UV Spot Curing System with 3 mm LLG option | Dymax | 41015 | UV LEDs, Xenon Arc Lamps, or other UV sources of the same intensity work equally as well |
MFCS Microfluidic Fluid Control System | Fluidgent | MFCS-EZ | Syringe pumps, custom pneumatics or other control systems can also be used |
Automated control scripting | MATLAB | ||
Hotplate | Tory Pines Scientific | HP30 | Any hotplate with uniform heating (i.e., aluminum or ceramic plates) will suffice. |
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