使用啮齿动物综合低流量麻醉蒸发器、呼吸机和生理监测系统

摘要

在这里，我们提出了一个协议，使用数字低流量麻醉系统与集成呼吸机和生理监测模块安全有效地管理麻醉气体给小鼠。

摘要

低流量数字蒸发器通常使用注射器泵将挥发性麻醉剂直接插入载体气体流中。根据动物福利建议，动物在需要麻醉的程序中受到温暖和监测。常见的麻醉和生理监测设备包括煤气罐、麻醉蒸发器和支架、加热控制器和垫子、机械呼吸机和脉冲氧化计。计算机对于数据收集和运行设备软件也是必要的。在较小的空间或进行现场作业时，在有限的空间中配置所有这些设备可能具有挑战性。

该协议的目的是展示使用低流量数字蒸发器使用压缩氧气和室内空气的最佳做法，以及集成的机械呼吸机、脉冲氧化计和远红外加热，作为适合啮齿动物的全包麻醉和生理监测套件。

引言

涉及动物模型的研究往往需要专门的数据收集设备。有两种常见的麻醉蒸发器，通常用于小型动物手术。传统的麻醉蒸发器依靠基于大气压力和气体流动^{1，2，3，4，5，6，7，8，9，10}的挥发性麻醉剂的被动蒸发。它们设计为以0.5升/分钟至10升/分钟的流速运行，是大型动物模型¹¹的理想之选。

与传统的蒸发器^12、13相比^，我们最近展示了低流量数字蒸发器的效果。低流量的数字麻醉系统可用于保持动物在鼻锥上的极低流速1.5-2.2倍的动物的分钟体积^{14，15，16。}

使用数字麻醉系统有许多好处。它集成了一个内置泵，它吸收环境空气作为载体气体。这允许用户在不使用压缩气体的情况下进行麻醉。最近的研究^17，18表明，使用空气代替氧气作为载体气体可能有利于许多程序。

生理监测和加热功能也可以安装到数字低流量麻醉系统中。在大多数机构中，动物变暖和生理监测需要机构动物护理和使用委员会^{19、20、21、22。}比较麻醉剂的生理影响的研究表明，体温、心脏功能和呼吸功能^23、24、25的剧烈抑郁。通常需要将动物放在加热垫上以监测和维持正常的体温。有许多动物变暖的方法，如热水器，电加热垫和热灯，但每一个都有显著的缺点。在比较不同方法的动物变暖的研究中，远红外变暖被认为是最有益的^26。数字蒸发器包括内置的家热远红外变暖，以保持特定的动物体温。这消除了任何额外的加热垫控制器的需求。

除了监测体温外，脉搏氧化是监测动物心率和氧饱和度的常用方法。这种非侵入性方法简单、准确，可全面评估动物调节血液氧分水平的能力。脉冲氧化学的爪子传感器可以连接到麻醉系统，正如我们之前所证明的^2。

当动物处于较长的麻醉期或需要控制动物呼吸模式时，通常需要机械通风。低流量数字蒸发器具有在压力或体积控制下提供可控呼吸的能力。集成式呼吸机无需外部呼吸机和过多的管子设置要求。

由于所有这些常见的显示器和功能都组合成一个设备，因此油管设置大大简化。此协议的目的是演示一体式数字麻醉系统的设置和使用。

研究方案

所有动物研究都得到了普渡动物护理和使用委员会的批准。

1. 低流量蒸发器的设置

1. 伊索夫卢兰或塞沃夫鲁兰交付
   1. 选择载体气源。要利用内部空气泵，请从系统背面的入口端口取出红色盖，使系统能够接收室内空气。要使用压缩气体，请使用设置为 15 PSI 的压力调节器或减压器，并连接到系统背面的压缩气体端口。
   2. 将木炭罐连接到排气口。
   3. 将附件连接器连接到系统前面的激励和过期端口。将感应室连接到带有蓝色夹子的树枝和鼻锥连接到带有白色夹子的树枝（图 1）。
2. 用于机械通风
   1. 将连接连接器管连接到黄色编码剪辑（图 2）。
   2. 通过执行死空间校准来校准呼吸机。从 通风运行屏幕，触摸 设置，然后 校准和测试。选择 死空间校准 并按 拨号 B。
3. 用于脉冲氧化
   1. 将传感器连接到系统背面的端口，标记为 MouseSTAT。
4. 用于变暖
   1. 将加热垫连接到系统前面的"垫电源"端口。
   2. 将一个传感器连接到"身体传感器"端口，另一个传感器连接到"垫传感器"端口。将垫传感器固定到加热垫上。

2. 配置设置

1. 麻醉
   1. 麻醉系统电源。从 阿内斯特运行屏幕，触摸 设置。
   2. 选择麻醉剂。触摸 类型阿内斯特，然后转动拨号B选择 伊索夫卢兰 或 塞沃夫鲁兰。
   3. 设置注射器大小。触摸 注射器大小，然后转动拨号B以选择大小。
   4. 触摸返回返回到 阿内斯特运行屏幕。
   5. 使用瓶顶适配器，用麻醉剂填充注射器。
   6. 将注射器连接到麻醉系统。如果需要，触摸 删除 以向后移动推手块。
   7. 将注射器主热。触摸并保持 Prime 向前移动推手块，直到推手块接触注射器柱塞的顶部。按住 Prime 按钮时转动 B 会调节推手块速度。
2. 用于机械通风
   1. 触摸 文特运行屏幕 选项卡，然后 设置。
   2. 触摸 体重 并输入动物的重量。
   3. 触摸 优先选择 音量或压力控制通风。体重设置自动设置适当的呼吸速率和潮汐体积。
3. 用于脉冲氧化
   1. 触摸 Oxi 运行屏幕 选项卡，然后 设置。
   2. 触摸 HR 并转动拨号 B 以设置允许的最低心率读数。预设可用。
4. 用于变暖
   1. 从 暖运行屏幕，触摸 设置。选择加热方法和目标温度设置。

3. 开始麻醉分娩

1. 麻醉鼠标
   1. 从 Anest 运行屏幕，触摸 启动感应 开始气流。默认感应流速为 500 mL/min。转动拨号 A 可根据需要调整流速。
   2. 将鼠标放在感应室中，紧紧地合上盖子。将 麻醉剂浓度 表盘调整为 3% 的异氟化剂。
   3. 监测，直到小鼠到达所需的麻醉平面，由呼吸速率下降和右反射丧失时，室倾斜。根据需要调整 麻醉剂浓度 表盘。
   4. 一旦动物失去了右反射，并充分麻醉，触摸 停止感应。
   5. 如果需要，触摸 冲洗室 以清空残留麻醉气体的腔室。
   6. 打开通往鼻锥的夹子，并关闭通向腔室的夹子。
   7. 触摸 启动鼻锥。体重设置确定鼻锥流速率，但可以通过转动拨号 A 手动调整。
   8. 立即安装鼻锥，并将动物放在红外加热垫上。
   9. 将动物传感器插入作为直肠探头。

4. 开始机械通风

1. 灌管动物。
   1. 将动物转移到插管阶段，同时保持动物麻醉。
   2. 使用固定在垂直插管阶段的螺纹（图3）将动物从上切口吊起。
   3. 轻轻地将动物的舌头放在一边，使用灌装套件中提供的灯光可视化气管。
   4. 小心地插入气管，通过将小气囊连接到管子并检查肺部是否膨胀来验证正确位置。
2. 将内脏管连接到通风管。
3. 触摸 停止鼻锥，然后触摸 启动呼吸机。
   注意:体重设置自动确定适当的呼吸速率和潮汐量。要执行压力控制通风，将目标吸入压力设置在 15-18 厘米 H₂O 之间。根据手术方案需要对呼吸机设置进行调整。

5. 开始生理监测

1. 将传感器放在动物的后爪上（图4）。脉冲氧化计将自动开始读取HR和SPO_2。 触摸 Oxi 运行屏幕选项卡 以查看脉冲氧化数据。

结果

10周大，雄性，野生类型C57Bl6j小鼠体重25.41±0.8克用于这项研究。小鼠在鼻锥或插管上麻醉和维持，并在综合机械呼吸机上保持1.5-2.5%的异氟，同时监测心率和氧饱和度。这些动物被集体安置在微隔离箱中，并可免费获得标准啮齿动物和瓶装水。

心率和SpO₂在维护过程中通过脉搏氧化（图5，图6和图7）进行监测。通过红外加热垫和热灯将体温维持在36.5-37.5°C。通风动物在插管过程中通过集成鼻锥的插管支架连续获得异氟兰的分娩。每只小鼠在鼻锥上成功通风或保持低流量，室空气（RA）或氧气（O_2）不超过141毫升/分钟，持续15分钟。动物的心率和血氧饱和度保持稳定，所有组的测量几乎没有显著变化。SpO₂在所有组保持在 82-99% 之间，而体温保持在 36.5-37.5 °C 之间。 我们观察到脉冲轴测仪的位置和体温都影响了SpO₂的测量结果。如果我们从脉冲轴仪中观察到无效读数，我们调整了传感器的位置和加热水平，以保持核心体温稳定。

进行了双向 ANOVA 与 Bonferroni 校正，以确定 图 5、图 6 和 图 7中数据的重要性。低于0.05的 p值被认为是显著的。

图1:麻醉感应和鼻锥维护管设置图。请点击这里查看此数字的较大版本。

图2:麻醉诱导、灌输和通风管设置图。请点击这里查看此数字的较大版本。

图3:小鼠在插管过程中通过集成鼻锥的插管支架连续获得异氟兰。请点击这里查看此数字的较大版本。

图4:集成脉冲氧化计传感器放置在后爪上。请点击这里查看此数字的较大版本。

图5:平均心率超过15分钟±SD与房间空气（RA）或100%氧气（O_2）通过鼻锥或通风通过气管（n=5/组）。没有发现不同组之间的显著差异。 请点击这里查看此数字的较大版本。

图 6:通过低流量麻醉系统进行初始麻醉后记录的心率值 （bpm）。平均心率值在 15 分钟内从 30 秒的时间间隔计算。每个数据点表示每个组中所有动物的平均± SD （n=5）。在15分钟内，没有观察到任何组的心率有显著变化。 请点击这里查看此数字的较大版本。

图7:组织氧饱和度水平（%）在用低流量麻醉系统进行初始麻醉后。平均 SpO₂ 值在 15 分钟内从 30 秒的时间间隔计算。每个数据点表示每个组中所有动物的平均± SD （n=5）。在15分钟内，在任何组中均未观察到SpO₂ 的显著变化。 请点击这里查看此数字的较大版本。

讨论

这种数字低流量麻醉系统将麻醉、通风、发热和生理监测系统集成到单个设备中。此外，该系统还包含一个内部泵，允许它吸收环境空气作为载体气体，从而无需压缩气体来源。

在此过程中，该系统被用作唯一的设备，以取代麻醉蒸发器、机械呼吸机、脉冲氧化计和加热垫。我们之前演示过以100mL/min²的流速进行麻醉分娩。流速设置对于这种麻醉输送技术至关重要，因为流速直接控制使用的液体麻醉剂的体积。我们以前也演示过如何使用低流量来节省麻醉液^1，2。当传统的蒸发器连接到机械呼吸机时，蒸发器必须连续运行，而呼吸机从气流中抽取样品。在带集成呼吸机的数字蒸发器中，只有通风机输出的通风所需的气体。这降低了与麻醉液、载体气体和木炭过滤器相关的成本。

虽然使用低流量数字蒸发器有很多优点，但也有局限性。该系统设计为以低流速运行，非常适合啮齿动物和其他小型哺乳动物，但不会提供高于1000 mL/min流量的麻醉。因此，这种特殊的系统只适合小型动物物种。集成脉冲氧化计仅包括用于爪子的传感器。不建议在尾部使用传感器，这可能是某些外科手术的限制。此外，虽然可以通过这个系统通过爪子传感器监测呼吸速率，但很难在较长时间内获得一致的呼吸记录。最后，与传统的蒸发器不同，这种数字系统需要电力。电池可用于无法供电或停电的情况下，并且可以通过几个小时的使用为系统供电。

此设置和协议证明安全有效地使用数字低流量麻醉系统与集成呼吸机和生理监测模块。这种设置对于任何长凳空间有限的实验室或在手术场附近存放多件设备和管子不可行的地方都是有用的。一体式系统有许多好处，包括消除压缩气箱和单独的生理监测设备。总体而言，使用传统蒸发器不理想的团体可以考虑这一集成系统。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Intubation Kit	Kent Scientific Corporation	ETM-MSE	Includes intubation stage, intubation tube, LED light
Isoflurane Liquid Inhalation 99.9%	Henry Schein, Inc.	1182097	Glass bottle 250mL
MouseSTAT Pulse Oximeter	Kent Scientific Corporation	SS-03	Integrated into SomnoSuite
Oxygen Tank	Indiana Oxygen Company	23-160246	Medical Grade O2 99%
RoVent Automatic Ventilator	Kent Scientific Corporation	SS-04	Integrated into SomnoSuite
SomnoSuite Low Flow Digital Anesthesia System	Kent Scientific Corporation	SS-01	Includes RightTemp Homeothermic Warming control, pad, and temperature sensors
SomnoSuite Mouse Starter Kit	Kent Scientific Corporation	SOMNO-MSEKIT	Includes nose cone, syringes, induction chamber, and charcoal canister