双胞胎贫血红细胞增多症序列胎盘色差的评价

摘要

在具有双胞胎贫血红细胞增多症序列 （TAPS） 的单绒毛膜双胞胎中，供体双胞胎及其相应的胎盘份额苍白，而受体双胞胎及其胎盘份额则具有过多的方面。这里介绍的是一种量化出生后 TAPS 胎盘母体侧色差的方案。

摘要

双胞胎贫血红细胞增多症序列 （TAPS） 发生在 5% 的单绒毛膜双胞胎中，其特征是双胞胎间血红蛋白差异较大。TAPS 的出生后诊断标准基于血液学参数和胎盘特征。出生后的胎盘检查显示，贫血和红细胞增多症双胞胎的胎盘区域之间的母体侧颜色明显不同。与急性围产期胎胎输血的单绒毛膜胎盘相比，TAPS 胎盘的颜色差异更高;因此，这被用作 TAPS 的附加诊断标准。ImageJ 等软件可以对 TAPS 胎盘中的颜色强度进行基于计算机的测量。然而，尚未描述计算 TAPS 胎盘贫血和红细胞增多成分之间颜色差异的详细方法。此处介绍的协议提供了一种使用 ImageJ 软件分析 TAPS 胎盘母体侧颜色差异的分步方法。

引言

TAPS 是一种慢性胎儿输血综合征，其特征是双胞胎血红蛋白 （Hb） 差异较大，无羊水过多序列的迹象¹。TAPS 的主要发病机制与独特的胎盘血管结构有关，只有几个微小的吻合口允许从供体（贫血双胞胎）到受体（红细胞增多症双胞胎）进行慢性和低速输血^2,3,4。TAPS 的出生后诊断基于血液学检查显示较大的 Hb 差异和较大的网织红细胞计数差异和/或胎盘注射显示仅显示微小的吻合口⁵。然而，出生时并不总是测量网织红细胞计数，大多数胎儿医学中心也不常规进行胎盘注射。额外的诊断标准可能有助于诊断无网织红细胞计数测量和无胎盘染料注射的病例。供体双胞胎苍白的皮肤和受体双胞胎的多血性皮肤之间的显着色差一直存在于 TAPS 双胞胎出生时。在肉眼检查中，贫血和红细胞增多症双胞胎的胎盘区域之间也检测到母体侧的相似色差。

最近有人假设，这种胎盘色差可以用作一种简单而准确的方法来确认出生后 TAPS 诊断⁶。与胎盘注射相比，TAPS 胎盘色差的量化更节省时间。此外，与网织红细胞计数相比，TAPS 胎盘色差的定量更具成本效益。该方法中使用的材料在临床环境中很容易获得因此，该方法为 TAPS 的诊断提供了简单准确的标准。该方案描述了一种用 TAP 定量单绒毛膜胎盘母体侧颜色差异的详细方法。

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研究方案

该方案得到了莱顿大学医学中心伦理委员会的批准，人类单绒毛膜双胎盘的产后检查是莱顿大学医学中心标准护理的一部分。莱顿大学医学中心免除对人单绒毛膜双胎盘进行产后检查的同意。

1. TAPS 胎盘采集和大体检查

1. 使用所有人单绒毛膜双胎盘，并在任何胎龄分娩 TAPS。保持人单绒毛膜双胎盘尽可能完整。如果需要手动取出，应尽可能轻柔地输送单绒毛膜胎盘。
   注意：出生后，助产士或新生儿科医生应将 TAPS 胎盘转移到塑料盒中，然后转移到实验室。
2. 当第一个婴儿出生时，用一个夹子夹住脐带，将出生顺序标记为第一个。当另一个婴儿出生时，用两个夹子夹住脐带，将出生顺序标记为第二个。
3. 肉眼检查胎盘，包括胎盘完整性、脐带插入类型、脐血管数量和裂膜的大体检查，以确认绒毛膜性。收集双胞胎膜用于单绒毛膜的病理诊断。TAPS 胎盘的直径取决于胎龄。
   注意：应在分娩后 1 周内进行检查，以避免在母体一侧形成粘连性血凝块。
4. 如果需要，将胎盘冷藏 （1-4 °C） 放在干燥的塑料盒中，直到检查。

2. 胎盘母体侧的准备

1. 用剪刀沿胎盘边缘修剪羊膜。注意膜上的血管，以及是否存在帆状脐带插入处，以防止血液从胎盘块流出。
   注意：在脐带插入中，脐带的血管在附着到胎盘块之前移动到羊膜表面一段距离。如果“裸露的”血管被切断，胎盘团的血液可能会流出并弄得一团糟。
2. 小心去除血凝块，以防止损伤胎盘叶。
3. 组织母体一侧的胎盘叶，以消除叶之间的间隙。胎盘通常有大约 15 个叶，可以在母体一侧识别。

3. 准备文档

1. 将胎盘放在塑料板上，母体面朝上。
2. 将胎盘的母体侧暴露在光线下（在左侧和右侧使用两个相同的灯均匀分布）。使用具有调节光强度功能的灯。
3. 为了减少反射，请在微弱的光线条件下使用相机（材料表）拍摄数码照片，并避免直接暴露在光源下。
4. 垂直于胎盘母体侧拍照。

4. 使用 ImageJ 进行计算机测量

1. 通过单击软件图标在计算机上打开 ImageJ。
2. 单击“文件”，然后单击“打开”以打开胎盘图片。打开所需的图像后，单击“图像” | “Color（颜色）”，然后选择“Channels Tool（通道工具）”，从下拉列表中选择“Color”（颜色）。
   注意： 该软件可以自动识别被测物体的颜色。胎盘是红色的。在软件中，点击“颜色”后，胎盘图片会自动转换为红色光谱通道。
3. 单击“手绘选择”，通过目视检查胎盘母体侧的不同颜色强度，分别勾勒出红细胞增多症和贫血双胞胎的过多和苍白胎盘份额。
4. 点击“分析” | “直方图”。分别选择过多区域或苍白区域后获得颜色强度直方图。强度直方图中显示的模式表示所选胎盘区域中最明显的颜色。
5. 通过将贫血双胞胎的颜色强度模式除以多细胞增多症双胞胎的颜色强度模式来计算色差比。

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结果

胎盘检查为 TAPS 的诊断提供了有价值的信息。TAPS 胎盘的特征是存在很少的小血管吻合^{口 1} （图 1、 图 2）。TAPS 胎盘的这一特征与 TAPS 的发病机制有关，是出生后诊断标准。与新生儿出生时的颜色相似，TAPS 中受体双胞胎的胎盘份额通常是深色和多色的，而供体双胞胎的胎盘份额是苍白和贫血的（

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讨论

根据我们的经验，实现最佳检查的关键点包括：1） 尽可能轻柔地娩出胎盘以避免损坏，尤其是当需要手动取出时;2） 出生后尽快检查 MC 胎盘，以避免形成粘着凝块（最好在几天内）;3） 温和去除所有血栓，避免损伤胎盘叶;4） MC 胎盘的母体侧暴露于均匀的光照条件下并最小化光反射;5） 在注射胎侧染料之前拍摄母体侧的照片，然后使用 ImageJ 量化色差比。在该协议中，I...

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
20 ml syringes	BD Plastipak	300613
Color dye	Royal Talens Schoolverf	36716010 (blue); 36715010 (green); 36712350 (yellow); 36713570 (pink)
Digital camera	Canon Inc.	ixus 125 hs
ImageJ	National Institute of Health	For Windows ImageJ bundled with 64-bit Java 1.8.0_112
Umbilical catheters	Vygon	1270.08 (8 F) 1270.08 (5 F) 1270.04 (4 F) 1270.03 (3.5 F) 1270.02 (2.5 F)