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摘要

这项工作提出了一个自下而上的方法，以工程的局部磁力控制神经元组织。装有磁性纳米粒子（MNPs）的神经元状细胞被镀在上面，由垂直磁化的微模式平台控制。还描述了磁定性、MNP细胞吸收、细胞生存能力和统计分析。

摘要

将神经元引导到有组织的神经网络的能力对再生医学、组织工程和生物面具有重大影响。许多研究旨在利用化学和地形线索引导神经元。然而，关于大面积的微米规模组织控制的报告很少。在这里，描述了一种有效的方法，用于将神经元放置在预设位点，并利用嵌入微模式磁性元素的磁平台，以微米级分辨率引导神经元生长。已经证明，用磁性纳米粒子（MNPs）加载神经元可以将其转换成受磁梯度影响的敏感磁性单位。按照这种方法，制作了一个独特的磁性平台，在该平台上，PC12细胞，一个常见的神经元样模型，被镀层并装载了超参数纳米粒子。沉积了具有稳定垂直磁化的铁磁（FM）多层薄膜，为磁态模式提供有效的吸引力。这些MNP加载的PC12单元，镀层和分化在磁平台上，优先附着在磁性模式上，中性生长与图案形状完全一致，形成定向网络。介绍了磁性、蜂窝MNP吸收、细胞生存能力和结果统计分析的定量表征方法。这种方法能够控制神经网络的形成，并通过磁力的操纵改善神经元到电极的接口，它可以成为网络体外研究的有效工具，并可能提供新的治疗生物接触方向。

引言

神经元的微观模式对组织再生1、2、3、4、5和神经电子设备6、7、8的发展具有巨大的潜力。然而，与生物组织一样，微米比例定位神经元在高空间分辨率下构成重大挑战。在这种尺度上形成预先设计的结构需要通过局部控制索马活力和轴向外生长来指导神经细胞过程。先前的研究表明，使用化学和物理线索9，10，11，12来指导神经元生长。在这里，一种新的方法侧重于通过磁场梯度13、14、15、16、17控制细胞定位，将装有MNP的细胞转变为磁敏单元，可以远程操作。

Kunze等人用磁芯片和MNP加载的细胞来描述诱导细胞反应所需的力，他们证明早期轴向拉长可以通过细胞内部的机械张力触发。Tay等人证实，具有增强磁场梯度的微结构基板允许使用钙指示染料19对与MNPs一起使用的神经回路进行无线刺激。此外，曾等人将纳米粒子凝聚在细胞内，导致局部纳米粒子介质力接近细胞张力20。这导致了微磁基板的定义模式的制造，帮助研究细胞对机械力的反应。通过在细胞20内凝聚纳米粒子，实现了因应用局部纳米粒子介导力而产生的细胞张力。Lee等人开发了一种互补的金属氧化物半导体（CMOS）-微流体混合系统，他们在CMOS芯片中嵌入了一系列微电磁铁，以控制标有磁珠21的单个细胞的运动。

阿隆等人利用微尺度、预编程、磁垫作为磁性"热点"定位细胞22。也可以利用微模式磁阵列在细胞内刺激特定活动，使纳米粒子在特定的亚细胞位置23。细胞MNP的吸收已经成功地证明在水痘，大鼠和小鼠原神经元24，25，26。在这里，这已经证明在老鼠PC12 pheo色细胞细胞系，这之前有报道说，显示高吸收MNPs27。近年来，国会议员的医疗应用多种多方面，包括药物输送和治疗癌症治疗28、29、30、31。具体来说，研究涉及MNP和神经元网络32，33，34，35的应用。然而，在单细胞水平上使用MNP的神经元的磁组织值得进一步研究。

在这项工作中，描述了一种自下而上的方法，通过预先设计的平台设计本地磁力，用于控制神经元排列。介绍了调频多层机型微米尺度模式的制造。这种独特的调频多层结构创造了稳定的垂直磁化，从而对所有磁模式产生有效的吸引力。通过孵化，MNP 被加载到 PC12 单元中，将其转换为磁性敏感单元。在磁平台上镀层和分化的MNP加载单元优先附着在磁性模式上，中性生长与模式形状完全一致，形成定向网络。介绍了几种方法来描述调频多层和MNPs的磁性特性，并介绍了细胞MNP吸收和细胞生存性检测技术。此外，还详细介绍了神经元生长的形态参数和结果的统计分析。

研究方案

注意:在生物安全柜中执行所有生物反应。

1. 磁平台制造

  1. 光刻
    1. 使用抄写笔将玻璃滑入 2 x 2 厘米2。 用丙酮清洁玻璃滑梯，然后在超声波浴缸中分别清洁 5 分钟。用超高纯度 （UHP） 氮干燥。
    2. 在 60s 的 60s 中使用旋转涂层，将玻璃涂上光层，达到 1.5μm 厚度，在 60 年代以 100 °C 烘烤。使用光面罩或无面膜光刻技术，使用合适的波长，使用所需的图案，将样品暴露在光源中。
    3. 开发人员在开发人员中开发 40s，根据制造商的说明在蒸馏水中稀释;在DW中清洗45s，用UHP氮气干燥。检查光学显微镜下的图案。
  2. 溅射沉积
    1. 将样品插入沉积系统的主腔室，等待基本压力（约5×10-8 托尔）。打开气体流:在此设置标准溅射的砷流（28 sccm [标准立方厘米/分钟）。点燃溅射目标，然后将溅射压力设置为 3 mTorr。
    2. 在达到预期速率之前，增加每个目标的功率。
      注:Pd 速率:0.62 A/s = 16s 中的 1.0 nm;Co80Fe20 费率: 0.32 A/s， 0.2 nm 在 6.25 s.
    3. 打开旋转。通过打开和关闭目标百叶窗，将调频多层机位分别存放在 Co80Fe20 和 Pd 目标之间交替。存入 14 个双层 Co80Fe20 （0.2 nm）/Pd （1.0 nm），最后再加 2 nm Pd 封顶层。
    4. 升空:将样品浸泡在丙酮中30分钟，然后用异丙丙酚冲洗。然后，用 UHP 氮干燥，并将样品保存在干净干燥的环境中，直到使用。

2. 通过运输测量对磁性装置进行定性

  1. 使用 Si 基板或玻璃滑梯，其横形磁条宽度为 100μm，存放有 FM 多层（见 图 1C 插图）。使用双面胶带将样品连接到支架上。
  2. 使用钢丝粘合器，将 4 根导线粘结到样品上，在交叉电极的每一段上粘合一根。将样品持有人和样品设置在传输测量系统内，并设置磁场，使磁场与样品垂直。在室温下进行测量。
  3. 对设备进行横向电压 （VT）测量:按照 图1C 中的标记（插图）:在联系人1和3之间应用1 mA电流;测量联系人2和4之间的VT; 然后，在 2 到 4 之间施加电流，测量 1 到 3 之间的电压。最后，计算测量电压和除以 2 以获得 VT的电压之间的差值。使用切换系统在两个测量配置之间自动更改。
  4. 以 5 mT 的步骤扫描 0.4 T 到 -0.4 T 之间的磁场，并测量 VT 作为磁场的函数。绘制横向电阻 （VT/I）与磁场，以确定异常大厅信号，这与薄膜中的垂直磁化成正比。

3. 通过磁测量对 MNP 和磁多层进行特征测量

  1. FM 多层的磁度测量
    1. 将调频多层机位存放在 Si 基板上（见第 1.2 节）。将样品切成 6 个正方形，尺寸为 4 x 4 mm2。 将样品一个堆叠在另一个上面，并将其排列在垂直于磁场方向的胶囊中（见 图1D 插图）。
    2. 将胶囊插入磁力计，并在室温下测量磁化。在 -0.4 T 和 0.4 T 之间扫除磁场。
    3. 考虑磁层厚度、样品大小和基材数量，计算磁性材料的总体积。将磁化除以磁性材料的总体积。
    4. 绘制磁化（单位体积）与磁场。从高磁场响应中减去基板的磁性背景，从图形中推断调频的饱和磁化。
  2. MNP 的磁度测量
    1. 将指定质量的 MNP 插入合成聚合物胶囊中。如果测量小磁化饱和值，请考虑更大的体积。
    2. 如果 Mps 被悬挂在溶剂中， 通过让胶囊通宵开放来干燥 Mps 。将胶囊插入磁力计，并在室温下测量磁化。在 -0.2 T 和 0.2 T 之间扫除磁场。
    3. 通过将指定体积乘以粒子浓度来计算议员的总质量。将结果标准化为 1 g。
    4. 绘制规范化磁化（每克）与磁场。从图表中推断出 MP 的磁化饱和度。

4. 胶原蛋白涂层协议

  1. 涂层塑料菜肴
    1. 通过将 490 μL 的 HCl 添加到 500 mL 的高压双蒸馏水 （DDW） 中，准备 0.01 M HCl。
      注意:仅在化学罩中执行此步骤。
    2. 稀释胶原蛋白1型（从大鼠尾巴溶液）1:60-1:80在0.01 M HCl获得50μg/mL的最终工作浓度。将稀释溶液的 1.5 mL 放在 35 mm 培养皿中。将盘子放在引擎盖上1小时，盖上盖子。
    3. 取出溶液，用无菌 1x 磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 洗 3 次。这道菜已经准备好细胞播种了。
  2. 涂层玻璃滑梯
    1. 稀释胶原蛋白类型 1 （从大鼠尾巴溶液） 1:50 在 30% v/v 乙醇.对于涂层35毫米的菜，添加20μL胶原蛋白到1mL的30%乙醇。
    2. 用溶液盖住盘子，等到所有的溶液蒸发，让盘子露出几个小时。在无菌1倍PBS中清洗3次;玻璃滑梯已准备好进行细胞播种。

5. 细胞MNP吸收和生存能力

  1. 蜂窝 MNP 吸收
    1. 通过在罗斯韦尔公园医学研究所 （RPMI） 介质中加入 10% 马血清 （HS）、5% 胎儿牛血清 （FBS）、1% L-谷氨酰胺、1% 青霉素/链霉素和 0.2% 氨基霉素来为 PC12 细胞培养准备基本生长介质，并使用 0.22 μm 尼龙过滤器进行过滤。
    2. 将 1% 马血清 （HS）、 1% L-谷氨酰胺、1% 青霉素/链霉素和 0.2% 安非他明添加到 RPMI 介质中，以准备 PC12 分化介质，并使用 0.22μm 尼龙过滤器进行过滤。
    3. 在未经处理的培养瓶中生长细胞，具有 10 mL 的基本生长介质;每2-3天在烧瓶中加入10mL的基本生长介质，并在8天后对细胞进行子培养。
    4. 对于细胞吸收，离心机在离心管中悬架8分钟，在200× 克 和室温下，并丢弃超自然。
    5. 将细胞在3mL的新鲜基本生长介质中补充。再次，离心机在200× 克 和室温下将细胞悬架悬架5分钟，并丢弃超自然。将细胞重新注入3mL的新鲜分化介质中。
    6. 使用注射器和针头对细胞吸气10倍，以分解细胞群。使用血细胞计数数细胞，并在常规未涂层的 35 mm 盘中播种 106 个细胞。
    7. 在菜中加入 MNP 悬架的计算体积和分化介质的体积，以达到所需的 MNP 浓度和总体积。混合细胞、MNP 和分化介质;在 5% 的 CO2 加湿孵化器中孵化菜肴，在 37 °C 中 24 小时。
    8. 在室温下将细胞悬架在200× 克 时悬架5分钟，并丢弃超母体。将细胞重新注入1mL的新鲜分化介质中，并使用血细胞计数细胞。
  2. MNP 加载的细胞分化
    1. 执行吸收协议（第 5.1 节）。种子 8 × 104 MNP 加载细胞在 35 毫米，胶原蛋白类型 l 涂层盘在分化介质的存在（见胶原蛋白涂层协议在第 4.1 节）。24小时后，加入1:100新鲜穆林β-神经生长因子（β-NGF）（最终浓度50 ng/mL）。
    2. 更新分化介质，每 2 天添加一次新鲜的穆林β-NGF。使用光学显微镜每 2 天对细胞进行成像。网络形成后（PC12细胞6-8天），使用共焦显微镜对细胞进行成像，并观察粒子的荧光。
  3. MNP加载细胞的可生存性检测:2，3-比斯-（2-甲氧-4-硝基-5-磺胺）-2H-四环磷-5-碳化物（XTT）细胞生存能力测试。
    1. 按照步骤 5.1.1 编制基本增长介质。培养具有不同浓度的 MNP 的 PC12 细胞（0.1 毫克/mL、0.25 毫克/mL 和 0.5 毫克/mL 的基本生长介质），并且在平坦的 96 井板中也无需 MNP 用于三元控制（总体积为 100μL/井）。在 5% 的 CO 2 中孵化细胞24小时，在 37 °C 的加湿孵化器中孵化 24 小时。
    2. 准备含有无细胞介质的空白井，用于背景校正。在使用前立即在 37 °C 的浴缸中解冻 XTT 试剂溶液和含有 N-甲基二苯丙胺硫酸酯的反应溶液。轻轻旋转，直到获得清晰的解决方案。
    3. 对于一个 96 井板，将 0.1 mL 的激活解决方案与 5 mL XTT 试剂混合。向每口油井添加 50μL 的反应溶液，稍微摇动板，以均匀地分配油井中的染料，然后在孵化器中孵化板 5 小时。
    4. 使用酶相关免疫分析 （ELISA） 读卡器以 450 nm 的波长测量样品对空白油井的吸收度。使用 630 nm 的波长测量参考吸收度，并从 450 nm 测量中减去它。
    5. 当在450纳米处用XTT试剂孵育的培养介质中发生轻微的自发吸收时，从其他油井中减去空白油井的平均吸收量。从 MNP 的平行样本中减去信号值，其测试浓度与细胞样本相同。
  4. MNP 加载细胞的可行性检测:基于雷萨祖林的细胞生存能力测试
    1. 根据步骤 5.1.1 编制基本增长介质。培养具有不同浓度的 MNP 的 PC12 细胞（0.1 毫克/mL、0.25 毫克/mL 和 0.5 毫克/mL 的基本生长介质），并且没有 MNP 在 24 小时的平面 96 井板中控制三脚架。在 37 °C 的 5% CO2 孵化器中孵化细胞 24 小时。 准备含有无细胞介质的空白井。
    2. 用1倍PBS清洗细胞。将基于雷萨祖林的试剂（10%w/v）添加到介质中，并在37°C孵化器中孵化2小时。
    3. 将样品的 150μL 引用放在 ELISA 读卡器中，测量 560 nm 的激发波长和 590 nm 的发射波长的吸收。以与细胞样本相同的测试浓度从 MNP 的平行样本中减去信号值。

6. 使用感应耦合等离子体（ICP）对细胞内MNP浓度进行描述

  1. 根据步骤 5.1.1 编制基本增长介质。培养具有不同浓度的 MNP 的 PC12 细胞（0.1 毫克/mL、0.25 毫克/mL 和 0.5 毫克/mL 的基本生长介质），并且没有 MNP 在平坦的 96 井板中作为三元控制（总体积为 100 μL/井）。在 5% 的 CO2中孵化，在 37 °C 的加湿孵化器中孵化 24 小时。
  2. 将悬架转移到离心管（从每个井单独），离心机细胞在200× 克 在室温下5分钟，并丢弃超自然。将细胞重新注入1mL的新鲜分化介质中，并使用血细胞计数细胞。
  3. 通过用100微升70%硝酸分别到每口井中治疗，将细胞酶化至少15分钟。将 5 mL 的 DDW 添加到解冻的单元格中，并过滤解决方案。
  4. 使用 ICP 测量铁浓度，并使用细胞计数记录每个细胞的 Fe 浓度。

7. 磁平台上的细胞分化和生长

  1. 用 70% v/v/ 乙醇清洁图案基板，并将基板放在发动机罩中的 35 毫米培养皿中。将一块大磁铁（约 1500 Oe）放在图案基板下方 1 分钟，然后先将磁盘向上移动并远离磁铁，然后将磁铁从引擎盖中取出来，从而去除磁铁。打开紫外线15分钟。
  2. 根据第 4.2 节，将基板涂上胶原蛋白类型 1。细胞MNP吸收（第5.1节）后暂停细胞，在35毫米培养盘中播种105 个细胞，并添加2mL的分化介质。在 5% 的 CO2中孵化培养，在 37 °C 的加湿孵化器中孵化。
  3. 24小时后，加入1:100新鲜的穆林β-NGF（最终浓度为50 ng/mL）。更新分化介质，每 2 天添加一次新鲜的穆林β-NGF。每2天使用光显微镜对细胞进行一次成像，在网络形成后，对细胞进行免疫染色（第8.1节）。

8. MNP 加载的细胞染色

  1. 图布林免疫染色
    1. 通过混合 10 mL 的 16% w/v PFA 解决方案、4 mL 的 10 倍 PBS 和 26 mL 的 DDW 来准备 4% 的副甲醛 （PFA） 溶液。通过将非离子表面活性剂的 500 μL 添加到 1x PBS 的 50 mL 中，准备 50 mL 的 1% PBT。通过将 25 mL 的 1% PBT 与 1x PBS 的 25 mL 混合，准备 0.5% PBT 的 50 mL。通过在 0.25% PBT 中混合 1% 牛血清白蛋白和 1% 普通驴血清来准备阻塞解决方案。
      注意:仅在化学罩内使用 PFA。
    2. 从细胞中取出超自然介质。在化学罩内室温下，将 MNP 加载的细胞固定在 4% PFA 中 15 分钟。在化学罩内用 1 倍 PBS 清洗 MNP 加载的电池 3 次，每次洗涤 5 分钟。
    3. 用 0.5% PBT 将 MNP 加载的电池渗透 10 分钟。首先在室温下将 MNP 加载的细胞孵化为阻塞溶液 45 分钟，然后在 4 °C 的阻塞溶液中用兔子抗α-图布林抗体。 在 1 倍 PBS 中清洗 MNP 加载的电池 3 倍，每次洗涤 5 分钟。
    4. 在黑暗和室温下用 Cy2 组合驴抗兔次抗体孵育 MNP 加载的细胞 45 分钟。用 1 倍 PBS 清洗 MNP 加载的电池 3 次，每次洗涤 5 分钟。
    5. 执行共焦成像。对于图布林，使用492 nm的激发波长和510 nm的发射波长。对于 MNP（罗达明），使用 578 nm 的激发波长和 613 nm 的发射波长。
  2. 核染色与 4+，6-迪亚米迪诺-2-苯林多尔 （DAPI）
    1. 用 1 倍 PBS 清洗 MNP 加载的电池 3 次，每次洗涤 5 分钟。取出样品周围的过量液体，加入1滴（+50μL）含有DAPI的安装介质，覆盖22毫米×22毫米的区域，并在黑暗和室温下孵育5分钟。
    2. 用 1 倍 PBS 清洗 MNP 加载的电池 3 次，每次洗涤 5 分钟。执行共焦成像。对于 DAPI，使用 358 nm 的激发波长和 461 nm 的发射波长。对于 MNP（罗达明），使用 578 nm 的激发波长和 613 nm 的发射波长。

9. 测量和统计分析

  1. MNP加载细胞分化的形态分析
    1. 为了测量与细胞体不同距离的交叉点数，使用NGF治疗后3天获得培养细胞的相位图像。
      注:如果以后完成，细胞可能会发展网络，防止单细胞分辨率测量。
      1. 打开图像处理程序"ImageJ"中的图像，并使用神经元J插件，实现半自动中性跟踪和长度测量36。使用中性物跟踪器插件，跟踪中性酸盐并将数据转换为二进制图像。定义索马的中心。
      2. 执行肖尔分析，可在神经元J插件中找到。定义最大半径。重复实验三次。分析每个实验中的100多个细胞。
  2. 细胞定位分析
    1. 要确定在孵化 3 天后在磁区定位的细胞百分比，获取有或不吸收 MNP 的细胞的共焦显微图像。使用 DAPI 染色（第 8.2 节）。
    2. 手动计算图案（触摸单元）上方或部分上方的单元格以及未在模式（触摸单元格）上的单元格。重复进行三个实验。使用 MNP 分析 400 多个细胞，无需吸收。
    3. 计算磁模式上与无MNPs的细胞总数中的相对比例。此外，通过将细胞体直径添加到图案宽度中来计算磁模式有效区域的百分比，以确定细胞落在磁性模式上的随机概率。
    4. 执行单个样本 Z测试，以分析细胞分布是否是同向细胞着陆的结果，或者是否对磁模式有偏好的偏差。
  3. 增长方向分析
    1. 要量化对中性粒细胞生长方向性的影响，在8天的孵化后获取有或没有MNP治疗的细胞的共聚焦微观图像。执行免疫染色（第 8.1 节）。
    2. 使用 ImageJ 软件，测量两种条件下细胞中性粒细胞和磁条之间的角度。
      注:仅分析来自磁条上的索玛斯的中性物。
    3. 绘制中性石与条纹方向（Δθ）的分布。对Δθ的分布进行奇平方测试，以证明分配不正常或不均匀。

结果

制造了具有不同几何形状的磁平台（图1A）。磁模式通过溅射沉积:14个多层的Co80Fe20和Pd，分别为0.2纳米和1纳米。电子显微镜显示磁模式的总高度为~18纳米（图1B）。这种独特的调频多层沉积创造了一个稳定的平台，与基板平面相对于基板平面的垂直磁化同位素（PMA），使MNP加载的细胞对整个磁模式的吸引力，而...

讨论

具有代表性的结果表明，在微米尺度上控制和组织神经元网络形成的方法的有效性。MNP 加载的 PC12 电池仍然可行，并被转换为磁敏单位，这些单元被从调频电极到特定部位的磁力所吸引。这在图 5C中表现得最好，其中细胞优先粘附在六边形较大的顶点上，而不是细线。此外，细胞的分支也随着磁模式的发展而发展。所有的控制实验都明确表明，磁力引导细胞体和生长的本地...

披露声明

作者声明没有相互竞争的经济利益。

致谢

这项研究得到了以色列科学和技术部以及以色列科学基金会（569/16）的支持。

材料

NameCompanyCatalog NumberComments
16% Paraformaldehyde (formaldehyde) aqueous solutionELECTRON MICROSCOPY SCIENCES15710
6-well cell culture plateFALCON353846
96-well cell culture plateSPL life sciences30096
Amphotericin B solutionBiological Industries03-028-1B
AZ 1514H photoresistMicroChemicals GmbH
AZ 351 B developerMicroChemicals GmbH
Bovine serum albumin (BSA)Biological Industries03-010-1B
Cell and Tissue cultur flaskBiofilTCF00225075.0 cm^2 250 mL Vent cap, Non-treated
Cell culture dishGreiner Bio-One627-16035 mm
Cell Proliferation Kit (XTT-based)Biological Industries20-300-1000
Centrifuge tubeBiofilCFT02150050 mL
Co80Fe20 at% sputter targetACI Alloys99.95%
Collagen type ICorning Inc.354236Rat Tail, concentration range 3-4 mg/mL
Confocal microscopeLeicaTCS SP5
Cy2-conjugated AffiniPure Donkey Anti-rabbit secondary antibodyJackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.711-165-152
DAPI fluoromount-GSouthernBiotech0100-20
Disposable needleKDL23 G
Disposable  syringeMedispo116022764010 mL
Donor horse serumBiological Industries04-124-1A
ELISA readerMerk MilliporeBioTek synergy 4 hybrid microplate reader
Ethanol 70%ROMICAL LTD19-009102-80
Ethanol absolute (Dehydrated)Biolab-chemicals52505
Fetal bovine serum (FBS)Biological Industries04-127-1A
Fresh murine β-NGFPeprotech450-34
GMW C-frame electromagnet .Buckley systems LTD3470, 45 mm
Hydrochloric acid 32%DAEJUNG CHEMICAL & METALS4170-4100
ImageJUS National Institutes of Health, BethesdaNeuronJ plugin
Inductively coupled plasma (ICP)Ametek SpectroSPECTRO ARCOS ICP-OES, FHX22 MultiView plasma
Keithley source-measureKeithley2400
Keithley switching systemKeithley3700
L-glutamineBiological Industries03-020-1B
Light microscopeLeicaDMIL LED
Maskless photolithographyHeidelberg Inst.MLA150
Microscope SlidesBAR-NAORBN1042000C
Nitric acid 70%Sigma-Aldrich438073
Normal donkey serum (NDS)SigmaD9663
PBS 10xhylabsBP507/1LD
PC12 cell lineATCCCRL-1721
Pd sputter targetACI Alloys99.95%
Penicillin-streptomycin nystatin solutionBiological Industries03-032-1B
PrestoBlue cell viability reagentMolecular probesA-13261resazurin-based
Rabbit antibody to α-tubulinSanta Cruz Biotechnology, Inc.
RF magnetron sputtering systemOrion AJA Int.Orion 8
RPMI 1640 with l-glutamineBiological Industries01-100-1A
Sonication bathKUDOSSK3210HPFrequency: 53 kHz. Ultrasonic power: 135 W
SQUID magnetometerQuantum Design, CA
Triton X-100CHEM-IMPEX INTERNATIONAL1279non-ionic surfactant
XTT cell viability reagent

参考文献

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