处理技巧，以减轻老鼠的压力

摘要

本文描述了小鼠的处理技术，即3D处理技术，它通过减少类似焦虑的行为来促进日常处理，并介绍了两种现有相关技术（隧道和尾部处理）的细节。

摘要

实验室动物受到科学家或动物护理提供者的多次操纵。这种引起的压力会对动物的福祉产生深远的影响，也可以成为焦虑措施等实验变量的混淆因素。多年来，人们开发出能够最大限度地减少处理相关压力的处理技术，尤其侧重于大鼠，而很少关注小鼠。然而，已经表明，老鼠可以习惯使用处理技术操纵。习惯小鼠处理可减轻压力，便于日常处理，改善动物健康，降低数据变异性，提高实验可靠性。尽管处理有有益的效果，但特别紧张的尾部拾取方法仍然被广泛使用。本文详细介绍了新开发的鼠标处理技术，旨在最大限度地减少动物在人际交往中承受的压力。这种手动技术在3天（3D处理技术）中执行，并侧重于动物适应实验者的能力。这项研究还显示了以前建立的隧道处理技术（使用聚碳酸酯隧道）和尾部拾取技术的效果。具体研究的是它们对焦虑行为的影响，使用行为测试（提升加迷宫和新奇抑制喂养），与实验者的自愿互动和生理测量（皮质激素水平）。3D处理技术和隧道处理技术减少了焦虑类表型。在第一个实验中，使用6个月大的雄性小鼠，3D处理技术显著改善了实验者的相互作用。在第二个实验中，使用2.5个月大的女性，它降低了皮质激素水平。因此，在需要或首选与实验者交互或在实验期间可能无法进行隧道处理的情况下，3D 处理是一种有用的方法。

引言

小鼠和大鼠是临床前研究的重要资产^1，2用于多种目的，包括内分泌、生理、药理学或行为研究^2。从越来越多的动物研究中，出现了包括人际交往在内的不受控制的环境变量影响生物^{医学研究的各种结果。}这造成了实验和研究实验室^4、5的显著变异性，对动物研究提出了重大警告。

实施了各种方法，目的是限制环境压力源的影响，减少对人类相互作用的反应。例如，为了限制环境压力源的影响，标准化住房条件和自动化住房系统^6，7已在实验室实施。关于与人类的互动，通常用来处理和运输动物的方法很少考虑动物的不适和压力。例如，用尾巴或用钳子拾取动物⁸会增加基线焦虑^{9，10，11，}减少探索^9，12，并大大有助于个体间的变异，在研究13，14。因此，还开发了其他方法，例如适用于小鼠和大鼠的杯子处理技术。在这种方法下，动物被"杯"出笼子，由实验者用双手握住，形成一个^9、10、11的杯子。另一个有用的尾部处理方法是使用聚碳酸酯隧道将^{老鼠转移9、10、15。}此方法消除了鼠标和实验者之间的直接相互作用。杯子和隧道的方法都显示出有效的减少焦虑的行为和对实验者的恐惧，可以夸大反向处理技术，如尾部拾取/尾部处理^9，10。

因此，越来越多的证据表明，适当的老鼠处理有助于减少^{个体之间的}变异性^9，11，并改善动物福利^10。然而，上述技术仍然面临局限性。杯具处理技术已经实施，时间表从10天（10次超过2周^16）到15周^17，这是相当长的时间设施工作人员和实验者。此外，杯子处理的有效性因应变⁹而不同，而传统的杯子处理在张开手中可能导致天真的小鼠或特别跳跃的菌株从手^9，18跳。隧道处理结果更一致，一般更快的结果，在绅士^19。隧道也被用作家庭笼子浓缩。它们帮助动物习惯于快速处理，并提供丰富的额外好处。然而，隧道处理在设备之间转移动物时有局限性。有趣的是，赫斯特和西⁹号，亨德森等人²⁰日证明，使用温和而简短的手动处理方式将动物从隧道转移到机器上并不影响它们的表型。

为了提供现有方法的替代方案，在短时间内实现习惯，本文描述了一种新颖的技术，扩展了杯具处理技术，因此不需要特定的设备。此方法使用里程碑来衡量小鼠在处理过程中的舒适程度。它显示了减少小鼠反应和压力（在行为和荷尔蒙水平）的功效，促进日常处理，并有助于减少动物之间的变异性。此处提供了此技术的详细信息，与隧道处理（正控）和尾部处理技术（负控制）相比，在减少焦虑行为、改善与实验者互动和限制外周压力激素（皮质激素）释放方面的功效在两项独立的研究（雄性小鼠和雌性小鼠）中得到了证明。

研究方案

涉及动物主体的程序已得到CAMH动物护理委员会的批准，并符合加拿大动物护理理事会的准则进行。

注:此处描述的处理方法可用于各种鼠标菌株，包括非转基因（C57/BL6、BalbC、CD1、SV129 等）和转基因线。它也可以与年轻或老老鼠一起使用，指出年轻的成年（4-6周大）小鼠往往比成年或老老鼠稍微活跃一些，尤其是在第一天。

1. 实验准备

1. 在研究开始之前，根据EING指南^21，随机分配鼠标给每个处理组（3D处理，隧道处理或尾部处理）。
2. 确定执行处理的房间。它可以在住房室或单独的房间进行。如果处理是在一个单独的房间进行，这需要动物移动在移动的推车上，允许动物习惯到新的房间20-30分钟之前启动处理协议。
3. 对于群居动物，在处理后使用临时笼子将老鼠安置在笼子里，然后将它们全部重新组合在最初的家庭笼子里。这减少了动物在处理前（尤其是雄性动物）之间的潜在战斗。
4. 在柜台（最好是清理的台面）或生物安全柜中工作，将住房笼远离动物处理。靠近住宅笼增加了跳跃的风险。如果动物被群居，将老鼠跳入家庭笼子可能会给笼友带来压力。
   注:在生物安全柜中工作可限制老鼠跳楼的风险，某些设施可能需要这种风险。该技术可用于生物安全柜，确保始终在生物安全柜内执行所有步骤，并避免小鼠在处理器前臂上行走。

2. 第 1 天:每只鼠标 5 分钟

1. 轻轻打开笼子，将盖子放在一边，取出筑巢材料，以及其他浓缩物，如运行轮或庇护所。
2. 将戴手套的张开的手引入家庭笼子，慢慢地将手放在笼壁的一侧（离处理者最近的墙壁，图1A）。
   1. 不要立即尝试拿起鼠标。
3. 保持不动，让动物习惯在笼子里的手存在约30s。
4. 尝试拿起手掌中的鼠标（即避免用尾巴接动物）。
   1. 如果鼠标在 3 次尝试后不容易拾起，则用双手将鼠标引导到角落和杯子。
   2. 轻轻地将杯子手移向鼠标，试图将其拾起。
   3. 如果两只手最多尝试 3 次后未成功，请用尾巴底部轻轻拾起鼠标，并将其转移到前臂或扁平手上。
5. 手握鼠标，保持手尽可能平整和打开。
   注:这为鼠标提供了一个平坦的平台，并限制了被咬伤的风险。
6. 将手打开并平放在手掌上，将另一只手放在手旁边，手握鼠标，让鼠标在没有任何约束的情况下从手到手自由移动（图1B）。
7. 让鼠标在手之间探索和移动 1 分钟。
   1. 在这一点上，老鼠可能会试图跳走。将手放在位置上，这样，如果鼠标跳跃，鼠标就会落在台面上而不是地板上。
   2. 如果鼠标看起来像是准备跳跃（朝手的边缘移动，用后腿饲养），慢慢地将另一只手放在它前面，并试图引导它走到这只手上。避免突然移动，因为它增加了他们跳跃的风险。
   3. 如果鼠标确实会跳转，则尝试拿起鼠标以避免尾部处理并恢复处理会话。如果鼠标停留在地板上或手外超过 10s，请在处理会话中增加额外的时间，以弥补鼠标从手中的任何时间。
   4. 记下跳跃的记录。跳跃总数可用于评估动物之间潜在的变异性。
8. 用平手处理1分钟后，放松手掌，轻轻将鼠标杯在手上，然后轻轻地将鼠标在双手之间滚动（图1C）。
   1. 要"滚动"，将鼠标放在手掌上，放在平手上，垂直于手指。
   2. 慢慢地合上手，把手指放在鼠标的背面。
   3. 将自由手直接放在手下，握住鼠标。
   4. 慢慢地用鼠标转动/旋转手，轻轻地将鼠标转移到另一只手（180° 翻转）。
   5. 在手之间来回重复。
9. 交替从手之间的温柔滚动和自由探索的开放手为60s，技术之间交替约每20s。
10. 执行"庇护测试"（图 1D）。
    1. 让鼠标移动到手的边缘，然后将两只手放在一起。
    2. 非常缓慢，杯他们，使鼠标适合在一个"庇护所"由手形成。留开口，以便鼠标在需要时可以逃逸。
    3. 旨在保持鼠标在庇护所5-10s，没有任何限制。
    4. 在庇护所测试之间交替，在手之间滚动，并免费探索张开的手为另外60s，一定要执行庇护步骤3或更多次。
11. 在 2.10 中描述的所有程序中，不要匆忙处理流程。如果鼠标出现压力（即试探性逃跑，从手中跳下，避免与手接触等），被限制在手内，继续在手之间滚动和自由探索20s，然后重试。
12. 里程碑:为完成第 1 天，至少执行 1 次 10s 的住房测试。
    1. 考虑当鼠标留在手中时成功进行庇护测试。如果鼠标弹出头，回到避难所，它仍然是一个成功的测试。如果动物完全离开避难所，那是个失败。
13. 允许在手的30s免费探索。
14. 轻轻更换笼子里的鼠标。如果组放置，将鼠标放在临时笼子中，直到处理所有笼子伴侣。将老鼠抱在手掌上，将它们放回原来的笼子里。不要使用尾部拾取。
15. 用70%的乙醇清洁潜在粪便和尿液的板凳顶部。
16. 在处理下一只鼠标之前，用 70% 乙醇（或适当的清洁液）或更换手套彻底冲洗手套（可以为笼友保留相同的手套）。
    注意:建议使用合理数量的动物进行处理，以避免处理程序疲劳。处理24只小鼠大约需要2小时，建议每个处理者不超过24只小鼠。如果需要处理更多的动物，建议要么拥有多个处理程序，要么在多天内将处理程序拆分为子组。

3. 第 2 天:每只鼠标 3 到 5 分钟

1. 试图拿起手掌上的鼠标。在这个阶段，它应该是可行的，老鼠不应该跳出手。
2. 从第 1 天开始，手掌打开，让鼠标在 20 s 内自由探索。
3. 然后，将鼠标在手之间滚动几次（4-5 次）。
4. 执行 5s 的"庇护测试"。
5. 在 2 到 3 分钟内重复几次（+5-6）的庇护测试。
6. 在同一2至3分钟期间，交替与双手之间的滚动和自由探索的开放手步骤从第一天开始，以改善习惯。
   1. 触摸鼠标的头部和背部（图1E），5-6次。习惯的标志是鼠标允许你触摸它，而无需试图逃脱。
   2. 执行"鼻子戳":尝试触摸鼠标的鼻子，2至3次（图1F）。
      1. 如果鼠标试图咬人或在被触摸时表现出明显的应力迹象，不要立即尝试再次戳鼻子。相反，交替与平手探索和滚动。动物在人类接触时没有逃跑或转过头来，"习惯"反映了这一点。
7. 在 3.4-3.6 中描述的所有程序中，不要匆忙处理流程。如果鼠标因被限制在手内或不想被触摸而出现压力，请继续在手之间滚动 20-30s，然后重试。
8. 里程碑: 执行至少 1 成功的鼻子戳 2 - 3s 完成第 2 天。
9. 停止这个会话后约3分钟的处理，如果动物反应良好，"庇护所"，"头部抚摸"，"鼻子戳"，如果鼠标似乎愿意探索手没有压力的迹象。
10. 如果鼠标继续表现出压力迹象或对"庇护测试"或"鼻子戳"测试反应不好，请继续会话，直到第 1 天达到 5 分钟。
11. 更换笼子里的老鼠，像第一天一样清洁长凳上衣和手套。

4. 第3天:每只老鼠约3分钟

1. 第三天，通过与第 2 天相同的步骤，持续 2 到 3 分钟。
   1. 拿起手掌上的鼠标。
   2. 在手之间转移和滚动鼠标
   3. 执行庇护所测试。
   4. 试着抚摸老鼠的背部和头部。
2. 在这些步骤之间交替约 1 到 2 分钟。
3. 继续手术，直到鼠标放松到足以坐在手掌上，而不会试图逃脱。
4. 在第3天结束前，重复庇护测试和鼻子戳测试作为习惯测试。
   1. 如果两次测试都能在第一次尝试时完成，则习惯过程就完整了。继续轻轻地处理鼠标 30 秒到一分钟。
   2. 如果鼠标最初对任一测试都具有抗药性，则重复步骤 4.1-4.3 为 20-30s，然后再重新进行鼻子戳和庇护测试。
   3. 如果鼠标在 3 分钟后仍然对这些测试具有抗药性，则第三天可能会重复。
5. 里程碑:执行至少 2 次成功的庇护测试，每个 10s，和 2 次成功的鼻子戳测试，以完成第 3 天，并完成整个 3D 处理程序。
6. 将鼠标放回笼子，清洁台顶和手套。

5. 动物注射或加法受到约束的可选方法

注:在第3天，如果动物将被限制用于实验目的（口腔咽部、腹内注射等），小鼠可以接受颈部捏合测试。

1. 抓住拇指和食指之间的颈部尿布（图1G）。
2. 将鼠标举到手上方 3-5 厘米处，以 2-3 s。
   注:对于成年小鼠来说，这通常是一个非自然的位置，如果小鼠保持在不动状态附近，它们就习惯于处理，并且很容易被限制用于实验目的。
3. 将鼠标放回平手，或者鼠标对颈部捏有反应时，考虑将其放在实验者的袖子、笼盖或台面上
   注意:如果在生物安全柜中工作，不要将鼠标放在袖子上，否则鼠标可以向上走，然后退出生物安全柜。最好将鼠标放在生物安全柜内的台面上。
4. 让鼠标自由探索实验者的手1分钟。

6. 额外处理天数的可选方法

1. 在高压力的鼠标线的可能发生时，使用第 2/3 天中描述的方法，增加额外的天数来降低动物的反应和应力水平。
   注:许多因素可以影响动物的基线压力，包括应变，转基因改造的存在，年龄，性别和住房条件。如果这些因素在组之间不一致，例如对年轻对照组进行测试的老年动物或对野生类型对照测试的转基因动物，建议对每组使用相同天数的居住。

7. 隧道处理

注:此技术仅适用于隧道处理的鼠标。隧道是聚碳酸酯管，长约13厘米，直径约5厘米。

1. 把隧道放在老鼠的笼子里。
2. 在处理前将隧道放在笼子里7天。
3. 打开笼子，把盖子放在一边。
4. 轻轻引导鼠标进入聚碳酸酯隧道（已在笼子里）。
5. 水平地将隧道从笼子中抬起来。如有必要，松散地覆盖隧道的两端，以防止动物跳/掉出隧道，可能回落到笼子或地板上。
6. 将隧道中的动物从家庭笼子中移开，并将其从任何表面保持 30s。
7. 将隧道放回家庭笼中，让鼠标离开管子。
8. 等待 60s， 然后重复步骤 7.4 - 7.7 一次。
9. 在习惯下一只老鼠之前，用 70% 乙醇彻底冲洗手套或更换手套。
10. 连续 10 天重复此程序。

8. 尾部处理

注:此技术仅适用于尾部处理的小鼠。它被用来将老鼠从笼子转移到仪器，反之亦然。

1. 打开笼子，把盖子放在一边。
2. 抓住拇指和食指之间的尾巴底部的小鼠。
3. 把老鼠从笼子里抬起来。
4. 在2-3s，转移鼠标到实验者对面的前臂，同时保持对尾巴的抓地力，以避免鼠标悬空。
5. 当实施此实验时需要尾部处理（例如，在抽血进行皮质醇测试之前）时，动物通过尾部处理转移到实验者的前臂，并保持 15s，然后再返回笼子。

9. 提升加迷宫

1. 房间设置
   1. 将迷宫放在房间中间，放在装有存储卡的数码相机下。
   2. 使用放置在迷宫后面的 2 盏立灯，在 60 Lux 设置房间的灯光。
   3. 关闭任何头顶照明，以避免在迷宫上直接照明，从而产生反射并干扰迷宫中动物的检测。
   4. 一旦所有的设备都设置，转移动物到房间，让他们适应灯光设置和新的环境30分钟。
2. 测试
   1. 用70%的乙醇清洁迷宫，防止灰尘或以前测试过的动物的气味。
   2. 启动相机。
   3. 在将动物置于迷宫之前，使用一张带有动物 ID 的纸在视频中记录 ID（这将促进正确识别每个视频中正在拍摄的鼠标）。
   4. 使用适当的处理技术，以每一个动物转移到迷宫。
   5. 将鼠标放在中央平台上，面对一只张开的手臂。
   6. 让鼠标探索仪器10分钟，不受干扰。
   7. 10分钟后，停止摄像头。
   8. 从迷宫中取回鼠标，放回笼子里。
   9. 用70%乙醇清洁迷宫中的粪便和尿液。
   10. 一旦所有鼠标完成测试，将视频从存储卡传输到计算机进行视频跟踪。
   11. 使用自动动物跟踪软件，跟踪张开和闭合手臂的条目数量，以及张开或闭臂所花费的时间（此处 Ethovision XT 14）。

10. 实验者相互作用（源自赫斯特和西^9）

1. 房间设置
   1. 在装有存储卡的数码相机下放置一张桌子在测试室中间。
   2. 在 50-70 Lux 设置灯，在房间的角落里放置 4 个灯泡，直面天花板。关闭头顶照明，以避免迷宫上产生反射并干扰对竞技场动物的检测的直接照明。
   3. 把动物带到房间里去。
   4. 让他们适应房间30分钟。
2. 实验
   1. 将家庭笼子放在数码相机下。
   2. 取下盖子。
   3. 去除可能干扰动物追踪的筑巢材料和其他浓缩物。
   4. 启动相机。
   5. 使用带有动物 ID 的笼卡在视频中识别动物。
   6. 沿着右前侧笼子的墙壁将一只手放在主笼子里。
      1. 确保处理程序的头部不会阻塞摄像机以拍摄鼠标。
   7. 启动时间器。
   8. 保持手不动2分钟，让鼠标探索手。
   9. 将手从笼子中取出 15s。
   10. 尝试用杯形手拿起鼠标，记录鼠标是否逃跑。
   11. 重复最后一步长达五次，每5秒，或直到鼠标允许自己被拾起。
   12. 记录拾取鼠标所需的尝试次数。
   13. 将筑巢材料和浓缩物送回笼子。
   14. 清洁手套与70%乙醇或更换手套之前，继续到下一个动物。
   15. 测试后，将视频从存储卡传输到计算机。
   16. 使用自动视频跟踪软件，将笼子分成四个相等象限，并记录鼠标在每个象限中花费的时间（这里，Ethovision XT 14）。

11. 新奇的抑制喂养

1. 食物匮乏
   1. 测试前3天，执行完整的笼更换，和单屋动物（单壳更可进行家庭笼测试）。
      注:提供新鲜的床上用品可去除自上次笼子更换以来床上积聚的潜在灰尘或少量食物。
   2. 在测试的前一天，在下午6点左右称量所有动物。
   3. 从食物漏斗中取出所有食物，并确保笼子或床上没有食物。
2. 房间设置
   1. 将 NSF 室放在桌子上。
   2. 在房间里装满一层薄薄的玉米床上用品（或其他不同于动物家庭笼中使用的床上用品）。
   3. 将灯设置在 70 Lux，将 4 个灯泡放置在房间所在的桌子的一角，面朝天花板。关闭顶置灯以保持低房间照明。
   4. 将设施中使用的一粒标准周放在面向实验者的腔室一侧（距离墙壁≈10厘米）。
3. 测试
   1. 在食物匮乏后的早晨，在测试前30分钟将动物带到房间，让它们适应光线环境和新环境。
   2. 称重所有动物，以便根据前一天测量的体重测量其体重来测量其体重减轻。动物应该失去8-12%过夜，以便能够正确地执行任务。
   3. 对每次减肥的动物进行排序，并从体重损失最大的鼠标开始筛选它们，以减轻体重最少的鼠标为开始。
   4. 确保房间内装满床上用品和单粒颗粒。
   5. 将动物放在房间的另一边，远离食物颗粒。
   6. 立即启动时间器。
   7. 让鼠标探索房间长达 12 分钟。
   8. 测量接近和喂养（动物必须咬和吃）食物颗粒的延迟。
      1. 当动物靠近颗粒、闻到颗粒并不咬人时，将其视为一种方法。
      2. 将咬伤定义为动物开始食用颗粒时。
   9. 记录延迟，以接近并在几秒钟内以颗粒为食。
   10. 一旦鼠标以食物颗粒为食，将鼠标从腔室中取出。
   11. 丢弃床上用品，但保存颗粒，将用于测试食欲驱动器在鼠标家庭笼。
   12. 为下一个动物重置房间，然后继续下一个动物。
   13. 在室内完成测试15分钟后，将测试过程中使用的颗粒滴入鼠标的主笼内，靠在笼子前面的墙上。
   14. 当颗粒在家庭笼子中时，测量以颗粒为食的延迟。这是衡量食欲的指标。
       1. 最好取出筑巢材料，以确保鼠标看到颗粒掉入笼子中。

12. 血清收集和皮质激素测量

1. 使用分配的技术处理动物 1 分钟，在采血前 15 分钟（这可以用群居或单户饲养的动物完成，在重新组合小鼠时记住打架的风险）。
   1. 对于隧道处理老鼠，引导他们到隧道，从笼子里抬起隧道1分钟，并更换在笼子里的老鼠。
   2. 对于尾部处理的鼠标，抓住鼠标的尾部底座，将鼠标从笼子中取出。将鼠标转移到实验者套管上1分钟，然后用尾部处理将鼠标放回笼子。
   3. 对于 3D 处理鼠标，使用杯形手将鼠标从笼子中取出。将鼠标握在杯子手中1分钟，然后放回笼子里。
2. 处理15分钟后，从下静脉²²进行采血。
3. 牢牢地擦洗鼠标，使鼠标头牢固固定。
4. 找到穿刺的部位。
   1. 沿着脸部的可操纵性有一个小无毛酒窝，可以用作定位穿刺部位的地标。在下颚底部和这个酒窝之间画一条线，穿刺部位位于这个酒窝后面，朝向耳朵大约5毫米，就在下颚铰链后面。
5. 保持一个干净的23G针垂直于穿刺部位，并使用快速坚定的拉伸运动。针尖应穿透深度在1-2毫米之间，静脉一刺穿，血液就会立即流动。
6. 在 EDTA 涂层收集管中收集 150 μL 的血液，并储存在冰上。
7. 用无菌纱布垫将轻微压力施加到穿刺现场5s或更多，使血液凝固。
8. 一旦血液凝固，老鼠就会回到家里的笼子里。
9. 离心血在 4 °C 3，500 x g 10 分钟。
10. 装饰超纳特。
11. 将超高纳特存储在 -20 °C 以进行下游分析。
12. 根据制造商的协议使用皮质激素 ELISA 套件测量皮质激素水平。
13. 使用光谱仪读取 ELISA 结果。

结果

对C57BL/6小鼠进行了两项单独的研究。研究#1包括6个月大的男性，研究#2包括2.5个月大的女性（N=36/研究）从杰克逊实验室（猫#000664）。老鼠在2个月大的时候到达了工厂。虽然研究#2女性在抵达后两周被处理和测试，但研究#1男性只在6个月大时才被处理和测试（由于全球大流行关闭而延迟）。在此期间，一只来自研究#2老鼠在开始处理实验之前死亡。这项研究#1雄性小鼠由动物设施工作人员照顾。所...

讨论

这项研究和方法开发基于这样一种观察，即科学界仍然忽视老鼠的处理技术，一些实验室仍然不愿意在实验前实施习惯或处理技术，以减轻其动物的压力和反应能力。动物处理在代表时间承诺的同时，为动物提供了有益的效果，可能有助于要进行的实验的成功，并防止由于数据变异或动物反应过度而不得不多次进行实验。使用3D处理技术减少了小鼠的逃生尝试。它还增加了与实验者的互动，并减?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
23 G x 1 in. BD PrecisionGlide general use sterile hypodermic needle. Regular wall type and regular bevel.	BD	2546-CABD305145	Needles for Blood collection
BD Vacutainer® Venous Blood Collection EDTA Tubes with Lavender BD Hemogard™ closure, 2.0ml (13x75mm), 100/pk	BD	367841	EDTA Coated tubes for blood collection
Bed’o cobs ¼” Corn cob laboratory animal bedding	Bed-O-Cobs	BEDO1/4	Novel bedding for novelty suppressed feeding
Centrifuge	Eppendorf	Centrifuge 5424 R	For centrifugation of blood.
Corticosterone ELISA Kit	Arbor Assays	K003-H1W
Digital Camera	Panasonic	HC-V770	Camera to record EPM/Experimenter interactions
Elevated Plus Maze	Home Made	n/a	Custom Maze made of four black Plexiglas arms (two open arms (29cm long by 7 cm wide) and two enclosed arms (29 cm long x7 cm wide with 16 cm tall walls)) that form a cross shape with the two open arms opposite to each other held 55 cm above the floor
Ethanol	Medstore House Brand	39753-P016-EA95	Dilute to 70% with Distilled water, for cleaning
Ethovision XT 15	Noldus	n/a	Automated animal tracking software
Laboratory Rodent Diet	LabDiet	Rodent Diet 5001	Standard Rodent diet
Memory Card	Kingstone Technology	SDA3/64GB	For video recording and file transfer
Novelty Suppressed Feeding Chamber	Home Made	n/a	Custom test plexiglass test chamber with clear floors and walls 62cm long, by 31cm wide by 40cm tall .
Parlycarbonate tubes	Home Made	n/a	13 cm in length and 5cm in diameter
Purina Yesterday’s news recycled newspaper bedding	Purina	n/a	Standard Bedding
Spectrophotometer	Biotek	Epoch Microplate Reader