需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。
Method Article
* 这些作者具有相同的贡献
在这里,我们描述了心肌梗死的实验模型,研究心脏重塑和功能的超声心动图程序,以及量化毛刺红染色和罗丹明染色切片纤维化和肥大的程序,以及用 Masson 三色染色的切片中的梗塞大小和扩张指数。
心血管疾病是西方国家最普遍的死亡原因,急性心肌梗死 (MI) 是最普遍的形式。本文描述了一种方案,用于研究半乳糖凝集素 3 (Gal-3) 在 MI 实验动物模型中心脏愈合和重塑的时间进化中的作用。
描述的程序包括雄性 C57BL/6J(对照)和 Gal-3 敲除 (KO) 小鼠具有永久性冠状动脉结扎的 MI 实验模型,用于研究 体内心脏重塑和收缩功能的超声心动图程序,间质心肌纤维化的组织学评估与毛刺红染色和罗丹明结合凝集素染色切片,用于通过横截面积 (MCSA) 研究肌细胞肥大, 以及通过平面测定法对用 Masson 三色和三苯基四唑氯化物染色的切片进行梗死面积和心脏重塑(疤痕变薄、隔膜厚度和扩张指数)的定量。 Gal-3 患有 MI 的 KO 小鼠显示心脏重塑中断,瘢痕变薄比率和扩张指数增加。在 MI 发作时,心肌功能和心脏重塑也受到严重影响。在 MI 后 4 周,梗死 Gal-3 KO 小鼠纤维化的自然演变也受到影响。
综上所述,MI 的实验模型是研究 Gal-3 基因缺失小鼠心脏修复和重塑时间演变的模型和其他动物模型。缺乏 Gal-3 会影响心脏修复的动力学,并破坏 MI 后心脏重塑和功能的演变。
心肌梗塞 (MI) 是心血管疾病最普遍的形式。心肌梗死后,心肌发生一系列形态和功能变化,包括 MI 梗死区愈合、心室重塑 (VR) 和心肌功能障碍1。心肌梗死的愈合是一个动态且精心策划的过程,与深度炎症浸润相关,最终形成纤维化疤痕 2,3。小鼠 MI 的实验模型目前用于研究病理条件下的心脏重塑 4,5,并且了解精确的手术方案对于开发可重复且有效的诱导永久冠状动脉结扎的程序至关重要。需要这种方法来研究 MI 的愈合及其在左心室重塑 (LVR) 的时间演变和与 MI 相关的心功能障碍中的相关性。
半乳糖凝集素是一组凝集素,可识别细胞内配体、膜受体和细胞外糖蛋白中的特定碳水化合物。半乳糖凝集素 3 (Gal-3) 是该家族的一员,通过识别和交联细胞表面糖缀合物中的 N-聚糖和 O-聚糖发挥作用,并在免疫系统中广泛表达6。以前的研究调查了 Gal-3 在心血管疾病中作为炎症和纤维化调节剂的作用 7,8,9,10,11,12。由于靶向愈合过程中炎症的调节因子具有高度相关性,因为炎症可以显着影响重塑的进化,因此我们旨在描述一种研究 MI 后心室重塑时间演变的方案,以及确定 Gal-3 基因突变如何改变 MI 愈合的时间演变并影响小鼠心脏重塑和功能的步骤和方法。
注意:本协议中描述的所有实验均由布宜诺斯艾利斯大学动物护理和研究委员会 (CICUAL) 批准,与国家研究委员会 (US) 委员会一致,以更新实验动物护理和使用指南13。对于实验,使用体重为 30-35 g 的雄性、年龄匹配的 C57BL/6J 和 Gal-3 KO 小鼠(8-10 周龄),这允许更好的手术作。让动物 随意饮水和食物。 Gal-3 KO 小鼠在与对照 C57BL/6J 小鼠相同的生物资源设施中在 C57BL/6J 背景上繁殖。
1. 手术区域和器械
2. 麻醉和插管
3. 研究设计
4. 超声心动图
注意:对于小鼠超声心动图,必须使用超过 10 MHz 的线性换能器来正确观察壁直径和腔体大小。该程序可以在麻醉下使用 1.15 mL/kg 的腹膜内 (IP) avertin 或在清醒的动物中进行。然而,由于作引起的压力和焦虑,后者会导致 MI 小鼠的混淆结果。
5. 组织学评估
6. 定量测定梗死面积和平面测定以评估心脏重塑
心肌梗死后生存和尸检
在 4 周的随访中,发现 17% (4/23) 的 C57 小鼠与 40% (8/20) 的 Gal-3 KO 小鼠死亡。进行了尸检;死亡的 Gal-3 KO 小鼠显示出比 C57 小鼠更大的心脏(图 1),并且 38% 的 C57 小鼠与 32% 的 Gal-3 KO 小鼠相比具有与心脏破裂直接相关的肉眼可见的胸部凝块。后者表明死因与心脏破裂无关。在方案结束时...
通过永久冠状动脉结扎的 MI 实验模型用于研究心脏修复和重塑的各种病理生理机制 5,14,17。本文总结了该实验室目前用于研究心脏修复的时间演变及其对 MI 后心室重塑影响的不同方法14,17。迄今为止,主要研究了两种缺血性心脏病模型:永久性冠状动脉结扎...
作者没有需要声明的利益冲突。
作者非常感谢 Ana Chiaro 的技术援助。这项工作得到了阿根廷科学技术促进局(PICT 2014-2320、2019-02987 和 PICT 2018-03267 至 VM)和布宜诺斯艾利斯大学(UBACyT 2018-382 20020170100619BA 至 GEG)的资助。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
8-0 silk suture | Ethicon | ||
C57BL/6J mice | Department of Bioresources of the Faculty of Veterinary of the University of Buenos Aires, Argentina | ||
Forceps | |||
Hardvard 386 respirator | Hardvard company | ||
Heating pad | maintain animal's temperature during surgery | ||
Image Pro-Plus 6.0 | Media Cybernetics | Image Analysis Software | |
Ketamine | Holiday | ||
Masson Trichrome | BIOPUR | ||
Picrosirius red | BIOPUR | ||
Retractors | |||
Rodent Ventilator Model 683 | Harvard Apparatus | Mechanical ventilator | |
Scissors | |||
Stereoscopic magnifying glass | Arcano | ||
Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Norway) | General Electric | Any tracking software can be utilized with this protocol | |
WGA no. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame | Vector Laboratories | ||
Xylazine | Pro-Ser |
请求许可使用此 JoVE 文章的文本或图形
请求许可This article has been published
Video Coming Soon
版权所属 © 2025 MyJoVE 公司版权所有,本公司不涉及任何医疗业务和医疗服务。