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摘要

本文介绍了一种通过将视频监测纳入常规空隙点测定来研究小鼠排尿行为的新方法。这种方法提供有关排尿事件的时间、空间和体积信息，以及一天中明亮和黑暗阶段小鼠行为的细节。

摘要

正常的排尿行为是膀胱、尿道和尿道括约肌在神经系统适当控制下协调功能的结果。为了研究小鼠模型中的自愿排尿行为，研究人员开发了空隙斑点测定法（VSA），这是一种测量沉积在动物笼子地板上的滤纸上的尿斑数量和面积的方法。虽然技术上简单且便宜，但该测定在用作终点测定时具有局限性，包括缺乏排尿事件的时间分辨率和难以量化重叠的尿点。为了克服这些限制，我们开发了一种视频监控的VSA，我们称之为实时VSA（RT-VSA），它使我们能够确定排尿频率，评估排尿量和排尿模式，并在一天的黑暗和光明阶段进行6小时时间窗口的测量。本报告中描述的方法可以应用于各种基于小鼠的研究，这些研究探索健康和疾病状态下自愿排尿的生理和神经行为方面。

引言

尿液储存和排尿由中枢回路（中枢神经系统）协调，该回路通过盆腔和下胃神经接收有关膀胱充盈状态的信息。尿路上皮是排列从肾盂到近端尿道的尿路上皮，对尿液中存在的代谢废物和病原体形成紧密的屏障。它是感觉网的一个组成部分，它感知膀胱的充盈状态并将其传达给下面的组织和传入神经1，2。尿路上皮屏障的破坏或尿路上皮机械转导通路的改变可导致排尿功能障碍以及下尿路症状，例如尿频、尿急、夜尿和尿失禁3，4，5，6，7。同样，衰老、糖尿病、下尿路感染、间质性膀胱炎和其他影响膀胱或控制其功能的相关回路的疾病过程已知会导致膀胱功能障碍8，9，10，11，12，13，14，15，16，17， 18，19.更好地了解正常和异常的排尿行为取决于能够可靠地区分不同排尿模式的方法的发展。

传统上，小鼠的自愿排尿行为已使用由Desjardins及其同事20开发的空隙点测定（VSA）进行了研究，并由于其简单，低成本和非侵入性方法而被广泛采用8，21，22，23，24。该测定通常作为终点测定进行，其中小鼠在衬有滤纸的笼子中花费规定的时间，随后通过计数数量并评估尿点的大小来分析当滤纸置于紫外线（UV）光下时（尿斑在这些条件下发出荧光）20.尽管有这么多优点，但传统的VSA存在一些主要限制。由于小鼠经常在同一区域排尿，研究人员必须将测定的持续时间限制在相对较短的时间内（≤4小时）25。即使在较短的时间内进行VSA，也几乎不可能分辨落在大空隙斑点上的小空隙斑点（SVS），或者将SVS与粘附在尾巴或爪子上的尿液残留区分开来。也很难区分 SVS 是频繁但个体的排尿事件（膀胱炎4，26 经常观察到的表型）的结果，还是排尿后滴漏（与膀胱出口梗阻相关的表型27）。此外，希望在工作时间内完成测定，加上在灯关闭时难以进入住房设施，通常将这些测定限制在24小时昼夜节律周期的光照期。因此，这些时间限制阻止了对小鼠在活跃夜间阶段的排尿行为的评估，从而降低了分析受昼夜节律控制的特定基因或治疗的能力。

为了克服其中一些限制，研究人员开发了实时评估排尿行为的替代方法26，28，29，30，31，32。其中一些方法涉及使用昂贵的设备，例如代谢笼26，28，29或使用热像仪30;但是，这些也有局限性。例如，在代谢笼中，尿液倾向于粘附在网状地板的电线和漏斗壁上，从而减少收集和测量的尿液量。因此，很难准确收集有关小空隙的数据。此外，代谢笼不能提供有关排尿事件的空间分布的信息（即，角落排尿与腔室中心排尿）。鉴于热像仪使用的长波长红外辐射不会穿透固体，因此通过视频热成像评估的空洞活动必须在开放系统中进行，这对于活跃的小鼠来说可能具有挑战性，因为它们可以在空中跳跃几英寸。另一个系统是自动空隙纸上污渍（aVSOP）方法33，它由卷制滤纸组成，以恒定速度卷绕在鼠笼的金属丝网地板下方。这种方法可以防止纸张损坏和经典VSA中发生的尿点重叠，并且其实施允许研究人员在几天内进行实验。然而，它不能为研究者提供排尿事件的精确时间，并且无法检查行为及其与斑点的相关性。为了获得这些信息，研究人员将视频监测纳入排尿测定，这种方法可以同时评估小鼠活动和排尿事件31，32。一种方法包括在实验笼下方放置一个蓝色发光二极管（LED）和一个带有绿色荧光蛋白滤光片的摄像机，以可视化排尿事件，并在笼子上方放置一个红外LED和一个摄像机以捕获小鼠位置32。此设置已用于在执行光纤光度测量时监测空洞行为;然而，该系统的明亮环境要求研究人员用利尿剂治疗小鼠以刺激排尿。在另一项实验设计中，将广角相机放置在实验笼的上方和下方，以分别可视化小鼠运动活动和排尿事件。在这种情况下，通过用放置在笼子31下方的紫外线灯照亮滤纸，可以发现沉积在笼子地板衬里的滤纸上的尿点。该装置在一天的光照阶段用于持续时间为4分钟的短测定，以研究参与自愿排尿行为的脑干神经元31。没有报告该系统在暗相或>4分钟时间段内的适用性。

本文介绍了一种通过允许对鼠标排尿行为进行长期视频监控来增强传统VSA的方法。这种经济高效的方法提供了关于一天中光明和黑暗阶段长时间排尿事件的时间、空间和体积信息，以及与小鼠行为相关的细节3，4，34。提供了有关空隙室的构造、实时 VSA （RT-VSA） 的实施以及数据分析的详细信息。RT-VSA对于寻求了解控制泌尿系统功能的生理机制，开发控制排尿的药理学方法以及定义影响下尿路的疾病过程的分子基础的研究人员很有价值。

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研究方案

尿路上皮压电1 /2双敲除小鼠（Pz1/2-KO，基因型: 压电1 fl/fl;压电2 fl/fl;Upk2CRE+/-）和对照（Pz1/2-C，基因型: Piezo1 fl/fl;压电2 fl/fl;Upk2CRE-/-）由从Jax实验室获得的亲本菌株（Piezo1 fl/fl 菌株#029213; 压电2 fl/fl 应变 # 027720; Upk2CRE+/- 应变 # 029281）。实验中使用雌性（1.5-3个月大，体重17-20g）和雄性（2-4个月大，体重23-29g）小鼠。对于环磷酰胺诱导的膀胱炎实验，使用野生型C57Bl / 6J雌性（3个月大，体重~20g）（杰克逊实验室，菌株#000664）。在匹兹堡大学机构动物护理和使用委员会的批准下，动物被饲养并在匹兹堡大学动物护理设施中进行实验。所有动物实验均按照《关于人道护理和使用实验动物的公共卫生服务政策》和《动物福利法》的相关准则和规定进行。

1. 实时空隙点测定（RT-VSA）保持架的组装

  1. RT-VSA钻机由一个装有两个紫外线灯泡的紫外线支架和两个广角摄像头（底部摄像头）组成，用于记录一天中光照阶段的排尿活动。安排两个鼠标室放在支架上。将广角相机（顶部相机）连接到每个小鼠室的盖子上，用于记录一天黑暗阶段的排尿活动（图1A）。
  2. 从 1 英寸 x 1 英寸 T 型槽铝型材构建 UV 支架和鼠标室的框架。有关用于构建两个鼠标室和UV支架的组件列表，请参见 表1 ，有关组装组件和尺寸的不同视图，请参见 表1B-D 。
  3. 用八个切割成 10 英寸的 T 型槽铝型材和四个切割到 14.75 英寸的 T 型槽铝型材构建每个鼠标室。首先组装鼠标室的底部，并使用标准端部紧固件（表1）根据 图1组装T型槽型材。将38.5厘米x 26.5厘米的紫外线透射亚克力安装在型材的内部通道中，以构建鼠标室的地板。
    注意: 有关如何将 T 型槽型材与标准端部紧固件组装的详细信息，请访问公司网页。
  4. 用其余的轮廓建造鼠标室的墙壁。将 38.5 cm x 21.5 cm 和 26.5 cm x 21.5 cm 耐磨 （AR） 聚碳酸酯面板安装在型材中，以组装鼠标室的外壁。使用 37.5 cm x 23.9 cm 和 24.4 cm x 23.9 cm AR 聚碳酸酯面板构建鼠标室的内部。
  5. 用标准端部紧固件 1/4-20 胎面固定 AR 聚碳酸酯面板。请参阅步骤 1.3 注释中有关如何在网页上的配置文件中安装面板的说明。使用商用硅胶填缝剂密封内部面板之间的连接处。
  6. 使用两个 12 英寸和两个 14.75 英寸的 T 型槽型材组装笼盖，如图 1B 所示。在型材的内部通道中安装一块 38.5 cm x 26.5 cm 的 AR 聚碳酸酯面板以完成盖子。
  7. 垂直于保持架顶部长轴安装12英寸相机轮廓支架，并在角支架内用两个轻过渡固定（在图1B中标记为3）。使用直平板（标记为 2）作为网络摄像头安装支架，如图 1B 所示进行安装。使用相机安装螺钉将摄像机安装到支架上。
  8. 使用 10 系列标准提离铰链右手组件将盖子连接到鼠标室的主体上（图1 B 中标记为 1）。
  9. 根据 图 1C，D 构建 UV 支架，将四个 T 型槽型材切割到 40 英寸，将四个 T 型槽型材切割到 32 英寸，将四个 T 型槽型材切割到 10 英寸。在型材中安装82.5厘米x 26.5厘米的亚克力镜板，以构建UV室的底部。
  10. 使用82.5厘米x 30.5厘米和26.5厘米x 30.5厘米的亚克力镜板来构建UV支架的墙壁。
  11. 连接 10 系列五孔 T 平板（图 1 C 中标记为 2）、10 系列五孔 L 平板（图 1 C 中标记为 3）和 10 系列五孔 T 形平板（图1 C 中标记为 1）以固定 UV 支架。
  12. 将底部摄像头安装在切割成 32 英寸的 T 型槽型材中，并使用两个轻量级过渡角支架固定在支架底部，如图 1D 所示。使用直平板将网络摄像头连接到 T 型槽型材。
  13. 将紫外灯安装在内部、正面和背面轮廓上，并连接到直平板上，如图 1D 所示。
  14. 将四个网络摄像头连接到运行视频监控软件的计算机的 USB 端口。

2. 实验前的动物饲养

  1. 家养实验小鼠，无论是专门繁殖的还是从外部站点获得的，四人一组。如果可能，使用年龄匹配的雌性或雄性小鼠进行这些实验。如果动物是从外部来源获得的，在进行任何实验程序之前，让它们适应至少 7 天。
  2. 在动物设施的整个过程中，将动物安置在装有垫料和富集物（例如，塑料冰屋，轮子，用于切碎的纸）的标准笼子中，并将它们保持在12小时的昼夜循环下，随意获得水和干老鼠食物。

3. 一天中明暗阶段的 RT-VSA 录音

注意:以下协议描述了使用RT-VSA来评估小鼠在一天的光明和黑暗阶段的排尿行为。将动物保持在12小时的光照和12小时的黑暗循环中，Zeitgeber时间（ZT）= 0在上午07:00。光相实验的记录在上午 10:30 至上午 11:00 （ZT = 3.5–4.0） 之间开始，暗相实验的记录在下午 06:00 至晚上 06:30 （ZT = 11.0–11.5） 之间开始。当在两种条件下测试动物时，实验通常在两个不同的日期进行，在浅色和深色测试之间至少连续5天。不应在清洁动物房间或更换笼子的日子进行实验，因为这些会导致影响排尿行为的压力。所有步骤都应在小鼠压力最小的条件下进行。

  1. 将实验动物从其住房位置运送到RT-VSA记录室所在的手术室。
  2. RT-VSA记录室制备
    1. 将一张滤纸（24.3 cm x 36.3 cm）放在每个 RT-VSA 记录笼的底部。根据一天中的时间，使用薄（浅相实验）或厚（暗相实验）滤纸。
      注意:在活跃的暗相期间使用厚滤纸，因为它比薄滤纸更耐碎。顶部相机用于可视化暗期沉积在厚滤纸上的尿点。相反，在光照阶段，使用底部相机，因为环境光阻止顶部相机检测沉积在滤纸上的尿点。在这种情况下，使用薄滤纸。我们发现底部相机在检测沉积在厚滤纸上的小空洞事件方面无效。
    2. 在滤纸上，放置以下物品:塑料冰屋（提供睡眠空间）、用于富集目的的无菌 1.5 mL 微量离心管和 60 mm x 15 mm 塑料培养皿，其中包含两片或三片小鼠干食物和 14-16 g 凝胶包形式的水（非润湿水凝胶;图2）。
      注意:使用1.5 mL微量离心管进行富集是本研究中使用的外壳特有的。
    3. 一旦记录室准备好，轻轻地将实验小鼠放在滤纸上，将它们轻轻地放入其中。确保动物从笼子转移到记录笼子时应力最小。
    4. 一旦所有实验动物都进入他们的记录笼，盖上盖子，用吸收性工作台蓝垫盖住盖子的顶部，以尽量减少有机玻璃盖表面上的直接环境光反射。
    5. 打开下腔室的紫外线灯。
      注意:动物不与紫外线直接接触。推荐的紫外线在材料部分有详细说明。
  3. RT-VSA 录音
    1. 要录制来自顶部和底部摄像机的视频，请使用视频监控录制软件，该软件可以配置为一次从多个网络摄像头或网络摄像机录制。
    2. 打开程序后，按程序窗口中的 命令 和 R 开始录制。以每秒 1 帧的速率执行视频录制。
    3. 开始录音后，立即退出房间，轻轻关上门。确保房间在整个实验过程中保持安静。
  4. 完成 RT-VSA 录制
    1. 7小时（光相实验）或第二天早上（暗相实验）后返回手术室。
    2. 按 Command 和 T 停止录制。关闭紫外线灯。
    3. 停止录制后，软件会自动为每台摄像机生成一个动画文件（.m4v格式），并将其以相机名称保存在先前选择的目标文件夹中。验证在每个相机文件夹中，实验是否按日期组织到文件夹中。
    4. 在每个日期/实验文件夹中，验证是否存在一个.m4v文件以及与每个影片帧对应的所有单个.jpeg文件。
    5. 注意:.jpeg文件可用于恢复实验，以防电影文件损坏。
    6. 在桌面上创建一个包含实验名称和日期的文件夹，并将所有.m4v文件传输到此文件夹中。如果需要，请在保存并备份影片文件后删除.jpeg文件。
    7. 注意:对于浅相位实验，软件将为每个相机生成一个短片，而对于暗相实验，它将为每个相机生成两个短片。这是因为在日期更改的午夜之后会生成新的.m4v文件。
    8. 将包含电影的文件夹复制到闪存驱动器中，以便在外部计算机中进行分析。此步骤可能需要几分钟时间，并且可以与步骤 3.5.1 到 3.5.3 并行执行。
  5. 清洁记录笼并将实验小鼠转移回其住所
    1. 取下覆盖笼盖的蓝垫。将动物从记录笼转移到它们的笼子里。
    2. 取出记录室中的配件和食品（即塑料冰屋、塑料管、带有食物和水凝胶的盘子以及滤纸），并将其丢弃在生物危害废物中。
    3. 使用手持式真空吸尘器清洁笼子，清除笼子底部的食物和粪便颗粒。然后，用 70% 乙醇喷洒笼子的地板和内壁，并用一块软布清洁内部。打开笼子的盖子，让它们风干。
    4. 将装有动物的笼子放在第二个容器中，然后将动物运回其住房位置。

4. 生成校准曲线

注意:需要校准曲线将空隙斑点区域转换为尿量。如果在一天的明暗阶段进行实验，则应生成两条校准曲线，每种类型的滤纸（薄滤纸和厚滤纸）各一条。校准曲线一式两份生成。每次复制都在放置在RT-VSA记录室中的滤纸上运行。鉴于其复杂的成分和紫外线兴奋性，使用小鼠尿液进行校准曲线。

  1. 小鼠尿液收集
    1. 取一块柔性透明薄膜（10 cm x 15 cm），放在长凳上。
    2. 拴住一只老鼠的尾巴，揉捏它。轻轻按摩小腹以诱导排尿。在透明膜塑料片的表面上收集尿液。
    3. 将动物轻轻放入笼子内。使用移液器将尿液从透明薄膜表面转移到无菌的 1.5 mL 微量离心管中。对多只小鼠重复该过程，直到收集~10mL小鼠尿液，汇集尿液，并储存在-20°C。
      注意:总共需要~10 mL小鼠尿液才能生成明相和暗相的重复校准曲线。为避免对实验小鼠造成压力，请勿使用将进行RT-VSA实验的小鼠进行尿液收集。
  2. 校准曲线记录
    1. 解冻在步骤4.1中收集的尿液，并通过轻轻涡旋10-15秒将其混合。
    2. 将一张薄滤纸（24.3 cm x 36.3 cm）放入两个 RT-VSA 记录笼中。
    3. 在每个滤纸上吸取以下尿量（μL）:2、5、10、25、50、80、100、200、300、400、500和750。为防止由于扩散而导致光斑重叠，请将光斑彼此分配在足够的距离处。
    4. 合上笼子的盖子并用垫子盖住它们。
    5. 按 Command 和 R 开始记录，应用用于记录实验的相同软件参数（步骤 3.3）。
    6. 记录校准曲线1小时，以允许尿斑的最大扩散。按 命令 和 T 停止录制。
    7. 在桌面上创建一个新文件夹，将.m4v文件放入其中，然后将数据传输到闪存驱动器以进行后续分析。
    8. 执行类似的过程以使用厚滤纸生成重复曲线。在这种情况下，添加额外的焊盘层以使内部变暗并模拟暗相条件。
  3. 分析校准曲线记录
    1. 在电影播放器软件中打开.m4v文件，最大化窗口以填充屏幕。要分析在厚滤纸上执行的校准曲线，请使用使用顶部相机获得的文件（图3A）。要分析在薄滤纸上执行的校准曲线，请使用底部相机获得的文件（图3B）。
    2. 播放.m4v文件，向前和向后移动时间滑块以获得完整的1 h校准曲线视频的概览。
    3. 确定较小尿点 （<25 μL） 强度最大且扩散最大的时间范围。在此时间范围内截取屏幕截图。命名屏幕截图文件并将其另存为.png文件（图3A，上图）。
      注意:屏幕截图是通过按F6键拍摄的。要设置F6进行屏幕截图获取，请选择: 系统偏好设置>键盘>快捷键，然后在右侧的框中写入F6 将 屏幕图片另存为文件 选项。
    4. 确定中型和大型尿点（>50 μL）具有最大面积的时间范围并截取屏幕截图。当较大的尿斑表现出最大扩散时，一些较小的尿斑可能已经不可见。命名文件并将屏幕截图另存为.png文件（图 3A，下图）。
    5. 打开 ImageJ 软件 （NIH），然后拖放步骤 4.3.3 中获得的.png文件图标以打开图像文件（图 4A）。
    6. 从工具栏中，选择多边 形选择 图标，然后描绘滤纸的边框。
    7. 然后，从菜单栏中选择 分析 ，从展开的菜单中选择 设置测量 值，然后从弹出的窗口中选择 区域。单击" 确定"。这允许在执行步骤4.3.8时获得面积值。
    8. 接下来，从菜单栏中再次选择" 分析" ，然后从展开的选项中选择 "度量 "。弹出一个结果窗口，其中包含一个列区域，该列区域以像素2 为单位显示区域值（图 4B–D）。
    9. 从工具栏中选择" 手绘选择" 图标，并使用它来在单个空白点的周边绘制一条线。如步骤4.3.8所示测量面积。软件会在执行新测量时更新结果表。新数字集显示在以前的数字集下方。记录每个分析点的结果窗口列区域下显示的数字（图4E–G）。
    10. 对每个复制点重复步骤 4.3.5 到 4.3.7。
    11. 将滤纸的总面积设置为100%，并计算每个尿点的面积百分比（%面积）。此归一化将纠正由于摄像机的变焦或定位差异而可能发生的错误。
    12. 在图形程序中创建一个新的XY表，并在X列中插入尿量值（以μL为单位），在Y列中插入%面积的重复值。
    13. 然后，选择"分析">"分析">"XY 分析">"非线性回归（曲线拟合）"。从出现的参数窗口中，选择模型>多项式>二阶多项式（二次）。
    14. 然后，从方法选项卡中，单击以标记以下选择:" 最小二乘回归"、" 无加权"，并将 每个重复 Y 值视为单个点。
    15. 从约束选项卡中，选择" B0"、"约束类型">"常量等于"，然后在 "值 "列下键入 0。单击" 确定"。

5.实验小鼠记录分析

  1. 打开在亮相（下部相机）或暗相（上部照相机）期间收集的影片文件进行分析。
  2. 通过向前和向后移动时间滚动器来评估电影文件的质量，确认滤纸在要分析的6小时时间窗口内保持完整（没有撕裂或咀嚼）。如果纸张撕裂，则不要执行进一步分析，因为鼠标可能在无法量化的暴露塑料上小便（图5）。
  3. 要分析在明相或暗阶段收集的实验，请使用快进命令或时间栏滑块移动到所需的时间窗口。在上午11:00至下午05:00之间记录轻度阶段的排尿活动（ZT = 4.0-10.0）和午夜至06:00之间的黑暗阶段（ZT = 17.0–23.0）。
  4. 通过单击 >> 图标（或手动滚动电影）以快进模式播放电影，寻找鼠标正在排空的证据。判断这种情况发生的最简单方法是寻找滤纸上突然出现的尿液亮点。另一个指标是寻找行为变化，包括向笼子角落移动和小鼠排尿时短暂的不活动。
    注意:随着人们在检测空隙方面变得更好，可以提高滚动或快进的速度。然而，在患有细菌和化学诱导的膀胱炎的小鼠中，它们有大量的小空隙4，34，如果一个人在电影中移动得太快，可能会错过排尿事件。
  5. 记录每个空隙发生的时间。按照惯例，在检测到尿液的第一个迹象时记录排尿时间（图6A，B）。
  6. 要测量空隙，首先使用滚动条向前（或向后）移动，寻找尿点发生最大扩散的时间点。此时暂停影片，并按照步骤 4.3.3 中所述截取屏幕截图。将计算机鼠标箭头放在要分析的点上，以便在屏幕截图中标记感兴趣的点（图6C，D）。
  7. 使用相关编号命名屏幕截图文件，以说明影片中的出现顺序。
  8. 继续分析文件，对影片上的每个空白点重复步骤 5.5 和 5.7。分析完所有空隙点后，通过捕获屏幕截图并使用4.3.6中所述的步骤测量滤纸的总面积。
  9. 如步骤4.3.9所述计算每个尿点的面积百分比。使用步骤 4 中生成的校准曲线和绘图软件中的插值函数，将每个空隙点的 % 面积值转换为尿量 （μL）。
    1. 在绘图软件中，打开包含校准曲线数据的XY表，并在校准曲线最后一个值下方的Y列中插入%面积值（图7A）。
    2. 单击 结果表 选项卡，然后在模型选项卡下，单击以选择" 从标准曲线插值未知数 "，然后按 OK。名为内插 X 平均值的选项卡将显示在结果选项卡的旁边。此选项卡包含一个表格，其中包含与每个排尿点的尿液体积（以μL为单位）相对应的插值。（图7A，B）。
  10. 重复步骤5.1至5.9以分析所有实验小鼠。
  11. 创建一个工作簿文件，其中包含从步骤 5.5 到 5.10 获得的数据，每个鼠标使用一个电子表格（图 7C）。为浅相实验创建一个文件，为暗相实验创建另一个文件。这些主文件包含用于进一步分析的所有原始数据和必要的计算。

6.实验小鼠排尿模式分析

  1. 生成初级和次级空隙点轮廓（图 8A、B 和图 9）。
    注意:根据频率分布研究23，≥20 μL 的空隙斑点通常占总空隙体积的 >95%，被认为是原发性空隙斑点 （PVS）8，23，35。≤20 μL 的空隙斑点被视为二级或小空隙斑点 （SVS）。PVS 和 SVS 之间的区分已被证明是表征排尿表型的有用方法。SVS 数量升高提示排尿功能障碍35。
    1. 从包含感兴趣的空隙斑点数据（亮相或暗相）的主文件中，根据体积将斑点分类为 PVS 当体积为 ≥20 μL 时为 PVS，或当体积为 <20 μL 时，将斑点分类为 SVS。
    2. 计算数字并计算 PVS 的平均空隙体积和总体积。 计算数字并计算 SVS 的总体积。
    3. 生成一个图形条，将对照与每个计算参数的处理小鼠进行比较:PVS的数量，PVS的空隙体积，PVS的总体积，SVS的数量，SVS的总体积。
  2. 可选:生成累积排空体积图（阶梯函数）以显示随时间推移的排空行为（图 10 和 图 11）。
    1. 打开工作簿主文件，并将以小时、分钟和秒表示的无效时间转换为十进制形式。计算每个时间点的累积尿量（以μL为单位）。
    2. 在绘图软件中生成一个XY表，X列中以十进制形式显示时间，Y列中显示累积尿量。将时间和尿量数据复制到表中。添加 （0; 0） 和 （6; 最大值） 数据点。这些点对于在实验开始时（时间:0小时）当排尿量为零（0;0）时，以及在实验结束时（时间:6小时）当排尿的累积值等于最后一次排尿事件获得的值（6;最大值）时完成图的水平线是必要的。
    3. 双击图表;应出现"设置图形格式"窗口。选择 外观 选项卡，单击以取消选择 显示符号 按钮，然后单击以选择 显示连接线/曲线。单击 样式 选项并选择 生存。

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结果

尿路上皮 压电1/2 基因敲除小鼠的排尿行为

在排尿周期的储存阶段，假设尿路上皮细胞感知膀胱中积聚的尿液所施加的张力，并将这种机械刺激转化为细胞反应，例如浆膜 ATP 释放1，3。我们之前已经证明，机械激活的PIEZO1和PIEZO2通道在小鼠尿路上皮3，36中表达。为了?...

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讨论

视频监控的结合是一种经济高效的修改，与传统的VSA相比具有几个优势。在通常用作终点测定的经典VSA中，很难区分重叠的空隙点。这不是一个微不足道的问题，因为当测定延长几个小时时，小鼠倾向于在同一区域多次排尿，通常是在笼子的角落。因此，RT-VSA的第一个优点是调查人员可以很容易地识别部分或全部沉积在一起的单个斑点。 图 12 所示的实验很好地说明了这一?...

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披露声明

作者没有什么可透露的。

致谢

这项工作得到了NIH资助R01DK119183（G.A.和MDC），通过P30DK079307（授予MGD）的试点项目奖，美国泌尿外科协会职业发展奖和温特斯基金会赠款（给NM），以及匹兹堡肾脏研究中心（P30DK079307）的细胞生理学和模式生物肾脏成像核心的支持。

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材料

NameCompanyCatalog NumberComments
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 10 inches80/201010Amount: 20
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 12 inches80/201010Amount: 6
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 40 inches80/201010Amount: 4
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 14.75 inches80/201010Amount: 12
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 32 inches80/201010Amount: 5
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