通过改进采样技术和组织学表征提高前列腺肿瘤生物样本库的可靠性

摘要

该协议描述了一种促进从根治性前列腺切除术标本收集样本的方法。目标是根据解剖病理学标准对标本中的组织样本进行映射、表征和微观-宏观解剖，然后再将它们储存在生物样本库中。

摘要

获取新鲜且表征良好的肿瘤组织样本对于进行高质量的“组学”研究至关重要。然而，由于前列腺癌 （PC） 的独特性质以及与该肿瘤相关的高度异质性，它在前列腺癌 （PC） 的背景下可能特别具有挑战性。另一方面，在样本储存前对样本进行组织病理学表征而不引起显着的组织改变也是一个有趣的挑战。在这种情况下，我们提出了一种基于解剖病理学标准获取、映射、表征和显微解剖切除前列腺组织的新方法。

与以前发表的方案不同，该方法减少了前列腺标本组织病理学分析所需的时间，而不会影响其结构，这对于评估手术边缘至关重要。此外，它还能够对新鲜前列腺组织样本进行描绘和微观-宏观解剖，重点关注由病理标准定义的组织学肿瘤区域，如格里森评分、前体病变（高级别前列腺上皮内瘤变 - PIN）和炎症性病变（前列腺炎）。然后将这些样本储存在生物样本库中，用于后续研究分析。

引言

前列腺癌 （PC） 是男性第 2 大常见癌症，也是全球第^{5 大死}因¹。患者的治疗和预后取决于肿瘤的分期和分级（Gleason评分），与高Gleason分级和转移性肿瘤（31^%）相比，局限性和低级别肿瘤（Gleason 6级）（99%）的5年生存率更高2。

PC 局部复发和治疗失败与该肿瘤³ 型的特征性高遗传瘤内异质性有关。此外，PC 被认为是一种多灶性疾病，具有多个肿瘤病灶表现出不同的形态学、组织学和分子学特征⁴，这些病灶可能独立起源或源自共同的肿瘤细胞祖先⁵。先前的研究表明，基于特定的遗传驱动因素，患者的肿瘤进化存在差异，这些遗传驱动因素可以促进转移或将细胞谱系限制在前列腺⁵。因此，不同肿瘤病灶的分子表征不仅对于提供更准确的诊断和预后至关重要，而且对于为患者定制有效和个性化的治疗也至关重要。

在此背景下，生物医学研究和综合多组学方法为将癌症分类为不同的亚型、识别诊断和预后生物标志物以及发现与治疗反应相关的标志物提供了前所未有的机会。此外，这些方法有助于更好地理解这种疾病的生物学特性

研究方案

这种方法是通过涉及不同临床服务（泌尿科、病理学和拉菲医院生物银行）的合作努力开发的。该研究是按照机构、国家和国际人类福利指南进行的，并获得了 Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe（西班牙瓦伦西亚）生物医学研究伦理委员会的批准。所有样本均储存在拉菲医院生物样本库（PT13/0010/0026）。整个过程详见 图 1。

图1：整体流程方案。 协议部分中描述的逐步过程的示意图。 请点击这里查看此图的较大版本.

1. 肿瘤靶向

讨论

在任何研究中，获得高质量的样本是减少系统性偏差和获得可靠结果的基本要求²².因此，在任何涉及生物样品的方案中，都必须考虑分析前变量的控制，例如处理和储存样品的温度、从样品收集到储存所经过的时间、灭菌材料的使用或添加防腐剂或其他添加剂可能对样品产生的影响。这不仅是关键，而且样本的正确识别和编码以及它们的病理特征也至关重要。否则，可能会存储?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169