Desmodium caudatum对胃炎大鼠胃肠道激素和肠道菌群的影响

摘要

本方案描述了使用基于Illumina的16S rRNA基因测序分析肠道菌群的方法，并为评估草药汤剂的有效性提供了框架。

摘要

为初步探究 尾鲷对 大鼠胃炎及肠道菌群的影响，采用经典水杨酸钠法建立慢性胃炎大鼠模型。将18只SPF大鼠分为对照组（C组）、模型组（M组）和治疗组（T组）3组。从每组大鼠中取出胃壁的病理切片。此外，通过ELISA测定各组大鼠血清中胃泌素和丙二醛的浓度。此外，通过对三组肠道细菌群落进行详细比较，采用基于Illumina的16S rRNA基因测序，探索了D . caudatum 对胃炎大鼠肠道菌群的影响。结果表明， 尾醛 汤可降低丙二醛含量，增加胃泌素含量。此外，还发现 尾苔 汤可增强肠道菌群的多样性和丰度，通过调节和恢复肠道菌群对胃炎的治疗产生积极影响。

引言

慢性胃炎（CG）是最常见的临床疾病之一，其特征是胃黏膜上皮的慢性和持续的炎症性变化，经常受到各种致病因素的反复攻击¹。CG的发病率在所有胃病中排名第一，占胃肠科门诊服务率的40%-60%²。此外，发病率通常随着年龄的增长而增加，尤其是在中老年人^{中 3}.毫无疑问，CG大大降低了人们的生活质量，强调了发现新治疗药物的迫切需要。

大量研究报告称，CG的发生和发展与胃肠道激素（如胃泌素（GAS）^）的分泌有关^4,5。GAS是消化道中常见的胃肠道肽激素，通过促进嗜酸性粒细胞释放组胺来刺激细胞分泌胃酸。此外，它还能改善胃粘膜的营养和血液供应，促进胃粘膜和壁细胞的增殖⁶。因此，胃泌素可以作为评价CG发展水平的指标。此外，由活性氧化物触发的脂质过氧化产物可以激活炎症细胞，导致CG。丙二醛（MDA）是一种脂质过氧化标志物，是测量氧化应激程度的常用指标。它在一定程度上反映了胃粘膜中自由基的水平。MDA水平可以表明由自由基引起的局部胃粘膜中不饱和脂肪酸^的攻击7,8。

研究方案

动物的护理和使用程序得到了绵阳师范大学伦理委员会的批准，并严格遵守了所有有关动物伦理使用的制度和政府规定。在本研究中，使用了SPF大鼠（昆明物种，雄性和雌性，体重180-220 g）。这些动物是从商业来源获得的（见 材料表）。所有动物都被饲养在无病原体的环境中，并可以 随意 获取食物。

1.试剂的制备

1. 用电子秤称取2.5g水杨酸钠粉末（见 材料表）制备5%水杨酸钠溶液。将粉末溶解在少量蒸馏水中，并将其稀释至总体积为50mL。
2. 制备 D. caudatum （12.8g/kg）的汤剂。称取 128 g D. caudatum （见 材料表），将其放入装有 1000 mL 实验室蒸馏水的圆底烧瓶中，并将其浓缩至最终体积为 100 mL。

2. 分组和管理

1. 将大鼠分成不同的组，并在胃内施用所需的溶液。
   注：本研究将18只大鼠（9只雄性，9只雌性）分为三组：对照组（C组）、模型组（M组）和治疗组（T组），每组6只大鼠。对照组接受生理盐水溶液，模型组接受 5% 水杨酸钠溶液，剂量为 10 mL/kg/天

讨论

羌族¹²人常用的民间药材，在治疗胃肠道疾病方面显示出显著的疗效。随着现代药理学研究的进步，胃肠道微生态失衡导致的菌群失衡被确定为急性和慢性胃肠道疾病的关键因素^22,23。肠道中的某些微生物在维持体内的动态平衡方面起着至关重要的作用，血清中的激素反映了身体的生理和病理状态。因此，该研究的重点是肠道菌?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alpha diversity analysis	Mothur 1.30.2
AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit	Axygen Biosciences	AP-GX-50
Beta diversity analysis	Qiime 1.9.1
Cryogenic refrigerator	Forma-86C ULT freezer
Desmodium caudatum	The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County
E.Z.N.A. soil kit	Omega Bio-tek	D5625-01
Illumina MiSeq Platform	Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250
Multiskan Spectrum	spectraMax i3
OTU clustering	Uparse 7.0.1090
OTU statistics	Usearch 7.0
PCR instrument	TransGen AP221-02
PCR instrument	ABI GeneAmp 9700
QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system	Promega Corp.
Sequence classification annotation	RDP Classifier 2.11
Sodium salicylate	Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd	54-21-7
SPF rats	Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd
SPSS 18.0	IBM