针灸治疗慢性缺氧诱导认知功能障碍小鼠模型

摘要

在这里，我们描述了一种在慢性缺氧小鼠模型上实施轻度麻醉和针灸治疗的方案，并进行行为测试以评估治疗后的认知改变。

摘要

中枢神经紊乱的治疗一直对医学领域构成重大挑战。针灸是一种植根于传统中医的非药物实践，需要将细针插入身体的精确穴位，通常用于治疗各种疾病。最近，针灸已成为治疗一系列神经系统疾病（包括焦虑症和呼吸系统疾病）的有前途的治疗干预措施。然而，针灸治疗慢性缺氧引起的认知功能障碍的潜力尚未得到探索。本文提出了一个全面的方案，用于建立慢性缺氧诱导的认知障碍小鼠模型、进行轻度麻醉、进行针灸治疗以及使用开放场测试和水迷宫评估行为变化和记忆能力。分步协议提供了有关准确定位和定位穴位和针头以改善认知的详细说明。通过采用该协议，研究人员可以进行系统研究，以彻底评估针灸治疗认知功能障碍的潜力。

引言

全球人口目前正面临严重的老龄化问题，导致认知障碍的患病率迅速增加。全球认知障碍的发病率约为每 1000 人年 53.97 例¹。血管功能障碍或循环/呼吸系统疾病引起的慢性脑缺氧仍然是年龄相关性痴呆的主要危险因素^之一2。先前的研究表明，脑缺氧可以通过改变 BACE1 表达来增加淀粉样蛋白β沉积³。此外，缺氧与神经胶质细胞失调和神经炎症有关 ^4,5。尽管这个问题越来越严重，但目前缺乏有效的西药来预防慢性缺氧引起的认知能力下降。非药物中医，特别是针灸，已被用于治疗认知障碍数千年，并在缓解神经退行性疾病方面显示出可喜的效果^6,7。百慧穴、神庭穴、祖三里穴位是治疗认知功能障碍的有效穴位^8,9。临床研究表明，电针疗法可显著改善血管性认知障碍患者的蒙特利尔认知评估（MoCA）和简易精神状态检查（MMSE）评分，有效改善认知功能障碍⁸。尽管研究表明针灸可以显着增强动脉结扎大鼠的记忆能力——急性脑缺氧模型

研究方案

动物实验经河北夷陵医学研究院动物研究伦理委员会批准（批准文号：N2022148）。将体重18-22 g的雄性C57BL/6J小鼠（见 材料表）安置在河北夷陵医学研究所新药评价中心。他们每天获得正常的食物和干净的水，并暴露在人造光下12小时。房间的温度控制在20-26°C，相对湿度为40%-70%。

1.慢性缺氧小鼠模型的建立（图1）

1. 在开始实验之前，准备正常大气压下的动物笼子和连续低氧环境的笼子。利用自动气体控制输送系统用纯氧和氮气的混合物冲洗腔室，从而建立连续的低氧环境。
   注意： 该系统被编程为控制电磁阀开关，从而确保在时间和浓度方面精确输送气体。
2. 将小鼠随机分为三组：对照组（Con），模型组（CH）和电针灸组（EA + CH）。将对照和模型/电针灸小鼠分别放置在两个笼子中，每个笼子有10只小鼠。将光照周期保持在 12 小时/12 小时（亮/暗）。
   注意：对照组（Con）未诱导治疗或缺氧。模型组（CH）由慢性缺氧小鼠组成。电针灸组（EA + CH）包括用电针治疗的缺氧诱导小鼠。
3. 对于慢性缺氧，利用数字氧气计调节气体流速并保持 10% 的氧气浓度，建立低氧室的参数。在上午9：00将动物置于低氧室中，并在下午5：00将其移出，从而每天连续暴露于低氧....

讨论

针灸是一种起源于2000多年前中国的非药物医学实践，涉及将细针插入身体的特定穴位，称为穴位。这些点被认为通过通道或经络连接，身体的生命能量或“气”通过这些通道或经络流动²⁴.通过刺激这些穴位，针灸旨在恢复身体的平衡与和谐。它已被证明可以有效治疗各种疾病，包括慢性疼痛、焦虑/抑郁、消化问题、月经来潮和呼吸系统疾病 25,26,27,28,29。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% paraformaldehyde solution	Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd	RL3234
ANY-maze	Science	SA201	Video tracking system
C75BL/6J mice	BEIJING HFK BIOSCIENCE CO.,LTD	No.110322220103041767	Gender: Male,  Weight: 18–22 g
Electroacupuncture device	Great Wall	KWD-808 I
Hwato acupuncture  needle	Suzhou Medical Appliance Factory	2655519
Isoflurane	RWD Life Science Co.,Ltd	R510-22
NanoZoomer Digital Pathology	Hamamatsu Photonics K. K	C9600-01
Small animal anesthesia machine	RWD	YL-LE-A106