复合痤疮的大鼠模型

摘要

该协议概述了用油酸和 痤疮杆菌在大鼠皮肤中诱导痤疮炎症的程序。

摘要

寻常痤疮是一种普遍的慢性皮肤病，其特征是面部、颈部和胸部出现粉刺、丘疹和脓疱。为了模拟寻常痤疮的炎症，该协议详细介绍了一种通过使用油酸和 痤疮杆菌 （痤疮丙酸杆菌）诱导大鼠耳朵痤疮炎症来建立复合痤疮啮齿动物模型的方法。将大鼠随机分为 4 组：正常对照组 （NC）、油酸处理癞部 （OA） 狄部、 痤疮丙酸杆菌 处理狄部 （C. acnes）、油酸狄部和 痤疮丙酸杆菌 （OA + 痤疮丙酸杆菌） 狄部。为了模拟皮脂分泌过多，将油酸涂抹在 OA 和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组大鼠的耳朵上 25 天。

从第 21 天到第 25 天，痤 疮丙酸杆菌 混悬液皮内注射到 痤疮丙酸杆菌 和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组大鼠的耳朵中，以加重痤疮炎症。每周测量耳朵厚度作为炎症严重程度的衡量标准。大体观察、苏木精和伊红染色、免疫组化 （IHC） 检测结果显示 OA 组和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组的耳朵增厚和硬质，伴有红斑和粉刺的存在。此外，在 C. acnes 和 OA + C. acnes 组中观察到丘疹。组织病理学表现为 OA 和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组毛囊角化过度和漏斗部扩大。在 痤疮丙酸杆菌 和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组的真皮中发现炎症细胞和脓肿浸润。IHC 结果证实 痤疮丙酸杆菌 组和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组真皮中肿瘤坏死因子 （TNF）-α 水平升高。以上结果共同表明复合痤疮啮齿动物模型的成功建立。

引言

寻常痤疮是一种常见的慢性皮肤病，其特征是面部、颈部和胸部出现粉刺、丘疹和脓疱，严重时可能会发展为结节、囊肿和永久性疤痕¹。流行病学研究报告称，痤疮影响了全球 9.4% 的人口，而由此产生的症状会带来严重的身体和社会心理挑战 ^2,3。

痤疮的发病机制是多因素的，包括四个关键过程：皮脂分泌过多、粉刺形成、皮肤微生物群的毛囊定植以及毛囊皮脂腺单位周围炎症介质的释放 ^4,5。皮脂分泌增加，导致过量不饱和游离脂肪酸 （UFFAs） 的积累，导致皮肤微生物群的异常繁殖，其中之一就是痤疮杆菌，如基因组研究所示⁶。同时，皮肤微生物群分解皮脂并增加 UFFA 的浓度，导致恶性循环⁷。此外，过量的 UFFA 会导致毛囊角化过度，进而引发痤疮⁸。皮肤微生物群和皮脂增加都会激活 Toll 样受体 （TLR） 以产生多种促炎细胞因子，例如白细胞介素 （IL）-1 和 TNF-α

研究方案

该方案已获得北京中医药大学 （No.2023033103-1183） 的伦理批准。该方案使用了 12 只雄性 Sprague-Dawley 大鼠 （体重，208 g ± 5 g），分为四组：NC 组 （n = 3）、OA 组 （n = 3）、 痤疮丙酸杆菌 组 （n = 3） 和 OA + 痤疮丙酸杆菌 组 （n = 3）。

1. 开发痤疮模型

1. 建模前使用电子游标卡尺测量并记录大鼠耳朵的厚度（参见 材料表）。
   1. 将电子游标卡尺的外颌放在耳朵外缘的中点，并将其伸入耳道。记录沿线的 2/3 点的粗细和 1/2 点的粗细。测量每个点 3 次，并计算两个点的厚度的平均值，以视为耳朵的厚度。
2. 将大鼠的头部向一侧倾斜，使耳朵朝上，将 50 μL 油酸（参见 材料表）均匀涂抹在耳朵的腹侧和背侧，每天一次，持续 25 天。
3. 从第 21 天到第 25 天，每天在应用油酸之前，使用 4% 异氟醚麻醉大鼠，然后使用配备 34 G 或 36 G 针头的 1 mL 注射器将 50 μL 1^{× 7} CFU 痤疮丙酸杆菌 悬浮液（见 材料表

讨论

由于痤疮模型的方法和评估标准不明确，该方案旨在为研究痤疮的研究人员提供参考。由于小鼠耳朵体积小，背部长出毛发会造成干扰，使用脱毛膏和剃须刀，大鼠的耳朵可能是建立痤疮啮齿动物模型的更好选择。我们曾尝试在大鼠的背部皮肤上创建痤疮模型，但效果不如在大鼠耳朵上观察到的效果。

一些研究人员只采用单一的方法来引起痤疮炎症?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anaero-indicator	Mitsubishi, Japan	C-22
AnaeroPack	Mitsubishi, Japan	C-11, C-41
Columbia blood agar plate	BeNa Cuture Collection, China	BNCC330605
Constant temperature incubator	SHANGCHENG, China	303-0
Cotton swab	HYNAUT, China	_
Cutibacterium acnes	BeNa Cuture Collection, China	BNCC330605
Dako REAL EnVision Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse	DAKO, Denmark	K5007
disposable sterile injection needle	Zhejiang Oujian Medical Apparatus, China	_
Electronic scale	JINXUAN, China	A017
Electronic vernier caliper	Deli, China	DL90150
Oleic acid (Analytical reagent, AR)	Fangzheng, China	_
Sodium chloride injection	CR Double CRANE, China	Y2212241
SPSS Statistics	IBM, USA	26.0
sterile hypodermic syringes	Shandong weigao group medical polymer, China	_
TNF Alpha Monoclonal antibody	Proteintech Group,int, USA	60291-1-lg