小鼠结肠直肠炎癌症模型的建立及中药治疗效果评价

Summary

该方案提供了由偶氮甲烷与硫酸葡聚糖钠联合诱导的溃疡性结肠直肠炎相关结直肠癌的小鼠模型。该模型用于评价中药化合物在预防和治疗结直肠癌中的疗效。

Abstract

结直肠癌 （CRC） 是一种常见的消化系统恶性肿瘤，已成为全球第三大常见恶性肿瘤和恶性肿瘤相关死亡的第二大原因。溃疡性结肠直肠炎 （UC） 是一种癌前病变，UC 相关 CRC （UC-CRC） 是 CRC 最常见的亚型。因此，合理的UC-CRC模型是新药研发的基石和保障。中医药（TCM）因其良好的疗效而被广泛用于治疗UC-CRC。柳君子汤（LJZD）作为中医的经典补药方，已被广泛用于治疗UC-CRC。本研究结合偶氮甲烷和硫酸葡聚糖钠建立UC-CRC模型，并给予LJZD。数据证实，LJZD可利用小鼠体重、结直肠长度、病理炎症因子、结直肠屏障功能、癌症标志物等手段有效抑制UC-CRC的癌症转化。该协议提供了一个评估中医预防和治疗UC-CRC疗效的系统。

Introduction

结直肠癌（CRC）是一种常见的胃肠道恶性肿瘤，是全球第三大常见恶性肿瘤，也是全球第二大常见死因，占全球癌症发病率的10%，占癌症相关死亡总数的9.4%^1,2。遗传因素、慢性炎症、高脂肪饮食、糖尿病和肠道菌群异常是 CRC ^3,4 的危险因素。其中，炎症性肠病，尤其是溃疡性结肠炎（UC），是CRC ^5,6的明显危险因素。UC相关结直肠癌（UC-CRC）是基于结直肠慢性炎症的炎症、非典型增生和癌症的过渡过程，与CRC ^7,8的典型腺瘤-腺癌发展模型不同。与一般人群相比，炎症性肠病患者患CRC的风险大约高出10-40倍⁹。

目前，手术仍然是 CRC 的标准治疗方法，并且根据肿瘤的位置和阶段，放射治疗、全身药物治疗或两者的组合是可能的¹⁰。虽然这些传统的治疗方式已经取得了很大的进展，但由于结直肠癌的异质性和复发率高，预后较差，....

Protocol

该动物程序已获得长春中医药大学伦理委员会批准（备案号：2021214）。将无特定病原体的C57BL / 6J小鼠（8-10周，体重18-22g），雄性和雌性，饲养在22°C和65%相对湿度的独立通风笼中。小鼠在适应性喂养7天后开始实验，在此期间它们可以自由获得水和饮食。

1.药物制备

1. LJZD的制备
   注：所用中药购自长春中医药大学附属医院，经鉴定为正品中药（见 表1）。
   1. 将当神（12g）、白术（12g）、赣草（6g）、陈皮（12g）、姜板峡（9g）放入专用陶瓷锅中（见 材料表）。加入1000mL蒸馏水，在室温下浸泡1小时（见 图1A）。
   2. 粉末12g涪凌用研磨机研磨成细粉，并在室温下在另一个容器中的300mL蒸馏水中浸泡1小时。
   3. 将上述中药混合在专用陶瓷锅中。将混合物煮沸，然后保持中火，直到只剩下 300 mL 汤剂。使用医用纱布进行过滤，并将滤液保存在室温下。
   4. 加入 1000 mL 蒸馏水，再次重复上述煎煮操作。再次用医用纱布过滤。将滤液混合并煮沸至仅剩 150 mL。
   5. 将浓缩液体以10,000× g 离心5分钟，并将获得的上清液进一步浓缩至30mL。将最终浓缩物转移到培养....

Discussion

结直肠癌是全球最常见的癌症之一，每年约有 1,148,000 例新发病例和超过 576,000 例死亡。结直肠癌根据病因不同可分为3种类型，包括遗传性、散发性和UC-CRC³¹。UC等炎症性肠病患者的CRC发病率明显高于一般人群。UC 通过炎症-癌症通路刺激 CRC 的发展，这与典型的腺瘤-腺癌通路^{不同 6}。目前UC-CRC的病因不明，主要由长期复发性慢性炎症引起，死亡率高达60%

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Azoxymethane	Sigma	A5486
5-amino salicylic acid	Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd	3819413
C57BL/6J mice	Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd	NO 210726210100853716
Cover slip	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432C
DAB color development kit	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	2005289
Dewatering machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JJ-12J
Dextran sulfate sodium	Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd	MB5535
Embedding machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-P5
Hematoxylin-eosin dye	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	B1000
IL-6	Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd	MM-0163M2
Isoflurane	RWD Life Science Co., Ltd	R510-22-10
KI67 primary antibody	Google Biotechnology Inc	GB121141
Neutral gum	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	10004160
Object slide	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432A
Occludin primary antibody	Affnity	DF7504
Orthostatic optical microscope	Nikon	Nikon Eclipse CI
Pathological microtome	Shanghai Leica Instrument Co., Ltd	RM2016
ZO-1 primary antibody	Abcam	ab221547