饮食诱导的肥胖糖尿病小鼠的十二指肠-空肠搭桥手术

摘要

十二指肠空肠旁路术 （DJB） 手术可以改善葡萄糖代谢并降低胰岛素抵抗。在这里，我们提出了一种协议来建立稳定可靠的 DJB 小鼠模型。

摘要

肥胖症和 2 型糖尿病的患病率是一个严重的全球健康问题。肥胖是 2 型糖尿病、心血管疾病和某些癌症的主要致病因素。减肥手术为肥胖和糖尿病提供了一种长期有效的治疗选择。袖状胃切除术 （SG） 和 Roux-en-Y 胃旁路术 （RYGB） 被广泛认为是最受欢迎的减肥手术。此外，几项探索性减肥手术已显示出有希望的治疗效果。十二指肠空肠旁路术 （DJB） 专为体重指数低的糖尿病患者量身定制，已显示出有益的代谢结果。然而，由于动物模型有限，其不依赖体重的代谢益处尚不完全清楚。在本文中，我们描述了在饮食诱导的肥胖 （DIO） 糖尿病小鼠中进行 DJB 手术的优化护理方案和手术技术。使用小鼠模型有助于更好地了解 DJB 手术诱导的变化的性质，同时促进相关的临床实践。

引言

肥胖和 2 型糖尿病是世界上最常见的慢性疾病，其患病率在年轻人中呈上升趋势¹。减肥手术是治疗肥胖和糖尿病的最有效方法，可促进长期血糖稳定，同时还可以改善与肥胖相关的并发症 ^2,3。减肥手术有几种类型，根据它们是否减少胃容量或肠道吸收进行分类;这些包括限制性、吸收不良和组合性 ^4,5。

十二指肠-空肠旁路术 （DJB） 最初由 Rubino 和 Marescaux 开发，他们证明可以通过连接十二指肠和空肠而不是通过减少胃容量来缓解 2 型糖尿病 ^6,7。DJB 保留整个胃并绕过整个十二指肠和近端空肠。肠道分为胆胰、消化和总肢 ^6,8。DJB 与减肥手术有一些相似之处，包括 Roux-en-Y 胃旁路术 （RYGB）、微型胃旁路术、胆胰旁路术、十二指肠分流术和 DJB 加袖状胃切除术

研究方案

以下描述的所有协议步骤均遵循南方战区司令部总医院动物护理和使用委员会的指导方针，批准编号为 2020112501。

1. 一般术前准备

注意：购买了 30 只 6 周龄雄性 C57BL/6 小鼠。将小鼠饲养在无特异性病原体 （SPF） 实验室中，在 12 小时的光照/黑暗循环下;温度，22 ± 2 °C;湿度为 55-65%。小鼠自由饮水并喂食 60% kcal 脂肪饮食 6 周以诱导肥胖。腹腔注射 40 mg/kg 链脲佐菌素 5 天以诱导糖尿病¹⁷。在 30 只小鼠中，随机筛选 22 只小鼠血糖> 300 mg/dL，并随机分为 DJB （n=15） 和假手术 （n=7） 组。8 只小鼠因血糖不合格而被排除在实验之外。

1. 手术前将小鼠禁食 8 小时。手术前 2 小时撤水。
2. 腹膜内注射 1% 戊巴比妥钠溶液 （6 mL/kg） 和丁丙诺啡 （1 mg/kg）。用镊子触摸老鼠的脚趾或尾巴，确保老鼠没有出现任何明显的抽搐或晃动。在充分麻醉下，小鼠可以在没有补充氧气的情况下自由呼吸。
3. 将小鼠仰卧在无菌板上和立体显微镜下。将眼药膏涂抹在眼睛上。在整个过程中使用电热毯让老鼠保持温暖。使用无菌操作，包括手术衣、无菌手套和高压灭....

结果

一般条件
DJB 手术的平均手术时间为 84.5 ± 2.6 分钟。15 只小鼠接受了 DJB 手术，9 只小鼠存活。如 表 1 所示，大多数死亡发生在手术期间或随后的 7 天内。术后死亡原因为术后 1 天出血 （n=2），术后 4 天吻合口瘘 （n=1），术后 7 天吻合口梗阻 （n=2），术后 3 周原因不明 （n=1）。

在本实验之前的 8 周内，我们每周对 10 只?.......

讨论

1953 年，Varco 等人 ¹⁸ 进行了第一例空肠-回肠搭桥手术，作为减肥手术的开始。从那时起，外科医生进行了许多减肥手术。这些手术导致体重减轻并改善了代谢并发症 ^4,19,20。此外，在 1967 年，Mason 和 Ito²¹ 进行了第一例 Roux-en-Y 胃旁路手术 （RYGB），该手术可以有效减.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Abdominal retractor	F.S.T	17000-03	Colibri Retractor -3cm,retractor range 1.5cm/3cm long
1% sodium pentobarbital solution	Guangzhou Chemical Reagent Factory	/	Dissolved 500mg of pentobarbital sodium powder in 50ml of normal saline to obtain 1% pentobarbital sodium solution.
Benzylpenicillin sodium for Injection	North China Pharmaceutical Company Ltd.	F2062121	Penicillin
Buprenorphine	Guangzhou Chemical Reagent Factory	/	Analgesia
Buprenorphine	Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd	/	Analgesic
Citric acid-sodium citrate buffer	LEAGENE	R00522	Buffer solution
Cotton buds	HaoZheng Medical	60220610	Cotton swabs
Depilatory paste	Veet	AAPR-S222	Hair removal cream
Ear tag	ZEYA	SUS304	Ear-mark
Electric blanket	ZOSEN	ZS-CWDRT	Heat pad
Electronic scale	WETTLER TOLEDO	20060902-6	Measure the weight
Enteral nutritional powder	Abbott Laboratories	/	Nutrition powder
Eye ointment	Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd	/	Protect the eyes
Glucometer	Roche	6993788001	Assess blood glucose
Graphpad Prism version 9.4.1	GraphPad Software	version 9.4.1	Software for statistical analysis
High-fat diet (High Fat [60FDC] Purified Rodent Diet)	Dyets	112252	60kcal% High Fat Diet
Micro Forceps	Jinzhong Medical	18-1140	Micro forceps
Micro needle holder	Jinzhong Medical	EMT-160-Z	Needle holder
Micro Scissors	Jinzhong Medical	YBC010	Micro scissors
Microscope camera	LAPSUN	E 2000	Video
Ophthalmic scissors	Jinzhong Medical	Y00030	Surgical scissors
Pentobarbital	Guangzhou Chemical Reagent Factory	/	Narcosis
Sodium chloride Injection	Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd	B21L0301	NaCl 0.9%
Stereo microscope	ZEISS	Stemi 305	Binocular stereomicroscope
Streptozotocin	Sigma	S110910-1g	STZ
Suture line	LINGQIAO SUTURE	ZS-LQPMRZ5/0	Prolene 6/0,Prolene 10/0
Tissue forceps	Jinzhong Medical	H1701	Surgical forceps