小鼠远端眶下神经慢性缩窄损伤 （DIoN-CCI） 研究三叉神经性疼痛

摘要

小鼠远端眶下神经的慢性收缩损伤会引起自发行为（面部梳理活动增加）和伤害行为的变化，以响应触觉刺激（对 von Frey 头发刺激的高反应性），这是持续疼痛和异常性疼痛的迹象，并作为三叉神经性疼痛的模型。

摘要

动物模型仍然是研究神经性疼痛的必要工具。本手稿描述了远端眶下神经慢性缩窄损伤 （DIoN-CCI） 模型，用于研究小鼠的三叉神经性疼痛。这包括执行慢性缩窄性损伤的外科手术和术后行为测试，以评估自发和诱发行为的变化，这些变化是持续疼痛和机械性异常性疼痛的迹象。方法和行为读数类似于大鼠的眶下神经慢性收缩损伤 （IoN-CCI） 模型。然而，为了使 IoN-CCI 模型适应小鼠，需要进行重要的更改。首先，眼眶内入路被更喙入路所取代，在眼睛和胡须垫之间有一个切口。因此，IoN 在眶腔外的远端连接。其次，由于小鼠的运动活动较高，允许大鼠在小笼子中自由移动被将小鼠置于定制设计和制造的约束装置中所取代。DIoN 连接后，小鼠表现出自发行为的变化和对 von Frey 毛发刺激的反应变化，这与 IoN-CCI 大鼠相似，即增加定向面部梳理和对 IoN 区域的 von Frey 毛发刺激的高反应性。

引言

神经性疼痛是由于体感神经系统受损引起的，导致感觉信号异常地传递到大脑。躯体感觉神经损伤并不总是导致神经性疼痛，但患病率随着临床神经病变的严重程度而增加 ^1,2。神经性疼痛患者会出现特定症状，例如自发感觉（灼热感、针刺感、电感）和异常剧烈或长时间的疼痛，以及对无害或有害刺激的异常强烈或长时间的疼痛，这些刺激往往会变成慢性的，并且对常规止痛药物治疗有抵抗力³。神经性疼痛研究领域的重大进展源于发现大鼠坐骨神经周围的松散收缩结扎会导致类似于人类神经性疼痛状况的行为⁴。这些动物对热、冷和机械刺激的阈值降低，并表现出伤害性行为。尽管人类和啮齿动物之间的疼痛处理存在固有的生物学差异，但动物模型是研究神经性疼痛发展的潜在机制和测试新提出的治疗策略的宝贵工具。

基于感觉反射的疼痛测试范式已广泛用于神经性疼痛模型，但考虑到这些是影响生活质量的常见临床症状，测量持续疼痛或其他经常伴随的障碍（睡眠障碍、抑郁、焦虑）并未得到足够的重视 5,6,7,8 ^....

研究方案

根据国际疼痛研究协会 （International Association for the Study of PAIN） 的清醒动物疼痛研究指南，并符合佛兰德和欧洲动物研究法规以及 ARRIVE 指南，对动物进行治疗和照料。该协议由机构伦理委员会批准。

1. 动物

1. 使用雄性和雌性 C57BL/6J 小鼠 （Janvier，到达时 10 周龄）。
2. 将雄性和雌性小鼠分别饲养在湿度为 40%-60% 且室温 （RT） 为 21 ± 1 °C 的集落室中的标准实心底小鼠笼中。
3. 随意提供水和食物。
4. 将小鼠保持在正常的 12：12 小时暗/亮周期（08：00 开灯）。

2. 手术

1. 每只小鼠准备一块约 6 厘米长的铬肠结扎线 （6-0），并将其置于无菌盐水中，以避免干燥和变硬变脆。
2. 用氯胺酮/甲苯噻嗪（75/15 mg/kg，腹膜内，注射体积 10 mL/kg）麻醉小鼠。通过捏住脚趾之间的皮肤来检查麻醉深度。确保鼠标不会弯曲其腿。如有必要，等到动物完全麻醉和/或给予额外的氯胺酮/甲苯噻嗪。
   注意：不应给予补充镇痛药，以避免可能干扰三叉神经性疼痛发展....

讨论

在大鼠中，先前已经争论认为，考虑到完整的精细肌肉组织控制震颤触觉辨别中复杂搅拌模式的重要性以及中线切口到皮肤眶下神经区域的相对距离^10，IoN 的眶内入路是可取的。其他人则认为，通过切口进入振震垫尾部的毛状皮肤的远端入路有很多好处^13,14。从手术上讲，这是一种更简单的微创技术。它可以?.......

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chromic catgut (6-0)	Dynek	CG602D	ligatures
Cotton applicator	Pharmacy
Digital video camera	Sony	HDR-CX330E
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11251-10
Dumont forceps - Micro-blunted tips (#5/45)	Fine Science Tools	11253-25
Duratears	Alcon	0037-820	ophthalmic ointment
Hooked ligation aid	Fine Science Tools	18062-12
Ketalar	Pfizer		ketamine (50 mg/mL)
Operation microscope	Kaps	SOM 62
Precision cotton swab	Qosina	10225
Precision trimmer	Philips	HP6392/00
Rompun	Bayer		xylazine (2%)
Scissors - blunt tips	Fine Science Tools	14574-09
Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer kit	Stoelting	58011
Vicryl Rapide	Ethicon	MPVR489H	sutures